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新型鹅细小病毒KC3S3株感染性克隆的构建及拯救毒株生物学特性研究

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新型鹅细小病毒KC3S3株感染性克隆的构建及拯救毒株生物学特性研究

作者：毛明田山东农业大学

学位级别：硕士

传统意义上的水禽细小病毒包括鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus,MDPV)两种,鹅细小病毒能够引起雏鹅肠道产生纤维素性栓塞,番鸭细小病毒则导致雏番鸭出现腹泻、喘气和脚软的症状。2015年3月开始... 详细信息

传统意义上的水禽细小病毒包括鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus,MDPV)两种,鹅细小病毒能够引起雏鹅肠道产生纤维素性栓塞,番鸭细小病毒则导致雏番鸭出现腹泻、喘气和脚软的症状。2015年3月开始,我国山东、安徽、江苏等不同省份的樱桃谷肉鸭与骡鸭群爆发了以患病鸭短喙、舌外伸、发育受阻为主要特征的新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)感染,该病又称为“鸭短喙侏儒综合征”(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS),患病鸭生长迟缓,群体淘汰率可以超过40%,给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。本研究从内蒙古地区SBDS症状明显的樱桃谷肉鸭组织中分离到一株NGPV,将其命名为KC3S3株。对该毒株进行全基因组序列分析与致病性研究,同时以此毒株的全基因组为基础序列构建NGPV感染性克隆,感染性质粒通过鸭胚进行转染,成功得到带有分子遗传标记的NGPV病毒粒子。后续在拯救株的传代过程中,随着毒株复制能力逐渐达到亲本毒株水平,病毒感染鸭胚与细胞的能力明显与亲本毒株不同。鉴于此,本试验选取亲本毒株与两个不同代次拯救毒株进行雏鸭感染试验,通过不同组间差异分析,比较毒株的致病能力,这不但从动物水平上反映了不同毒力NGPV的感染差异性,同时也为NGPV传代致弱的理论模型提供了事实依据,为今后深入研究NGPV的致病机理与免疫防控提供了一定的技术支持。主要研究内容如下:采集内蒙古地区SBDS症状明显的樱桃谷肉鸭病料,处理后接种鸭胚,胚体在120h前后死亡,死亡鸭胚前胸羽毛部位轻微出血,生长严重抑制,PCR检测及NGPV VP2基因测序表明所分离病毒为NGPV,将其命名为KC3S3株,然后通过分段测序后拼接基因组进行KC3S3株全序列分析。同源性分析结果表明,KC3S3株与2020年山东NGPV分离株JS1212的核苷酸相似性达到99.8%。将KC3S3株同时与GPV参考株和MDPV参考株进行核苷酸同源性分析,结果显示其全基因组与GPV参考株的核苷酸同源性为94.7%～95.9%,与MDPV参考株的核苷酸同源性仅为81.2%～85.0%。遗传进化分析结果表明,KC3S3株与新型鹅细小病毒的亲缘关系最近,该分离毒株位于一条单独的进化分支,并与NGPV JS1212株、JS112株与HN1P株共处同一段基因进化簇。动物回归试验结果显示,感染KC3S3株的樱桃谷肉鸭表现出发育迟缓、舌尖磨损、胫骨骨折、胸腺点状出血等SBDS典型病变特征。综上所述,KC3S3株是一株具有独特进化性质的NGPV分离毒株。利用分段DNA扩增和同源重组的方式对KC3S3株进行反向遗传操作。通过高保真酶扩增KC3S3株全基因组,对位于NS2片段的SphⅠ酶切位点进行重叠突变,并以此作为分子标签。末端倒置重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)是一段位于基因组两端的包含大量重复GC碱基序列的长复杂回文序列,该序列为细小病毒属所共有。由于完整ITR在转化过程中极易发生缺失重排,本试验通过分隔ITR的方法对易变区域进行改造,从而降低了ITR在大肠杆菌体内复制的突变概率,同时也减少了ITR在菌种体内的复制次数,保证了克隆质粒的正确性。底层质粒选取p Blue Script II SK(+)载体(p BSK载体),目的片段通过同源重组的方式依次连接到载体的KpnⅠ与Bam HⅠ酶切位点之间,重组质粒命名为p KS3。p KS3质粒与脂质体混合后转染至10日龄鸭胚绒毛尿囊膜,37℃培养120 h后收取尿囊液并盲传3代。第3代鸭胚在160 h前后死亡,收集鸭胚尿囊液进行鉴定,PCR结果显示,盲传3代仍能检测到病毒粒子存在,测序结果表明拯救毒株已成功引入核苷酸位点标记。感染性质粒拯救得到的毒株命名为r KS3-N(N为代次),采用细胞与动物感染试验进行拯救毒株的生物学特性分析。亲本毒株与不同代次拯救毒株通过Taq Man荧光定量的方法统一病毒粒子拷贝数,选取KC3S3株、r KS3-3株、r KS3-5株与r KS3-10株进行DEF细胞感染试验,同时选取KC3S3株与r KS3-10株进行鸭胚感染试验,不同毒株的感染结果迥然不同。选取KC3S3株、r KS3-5株与r KS3-10株构建动物模型,120只一日龄樱桃谷雏鸭随机分为4组,每组30只,A组为KC3S3株感染组,B组为r KS3-5感染组,C组为r KS3-10感染组,D组为对照组。KC3S3感染组与r KS3-10感染组每只接种0.1 m L(1×10copies/0.1m L)病毒液与2.4 m L生理盐水配成的混合液,r KS3-5感染组每只接种2.5 m L(1

关键词：新型鹅细小病毒全基因组序列分析感染性克隆传代致弱动物试验

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感染性休克58例围手术期处理

人民军医 1992年第2期35卷 64-65页

作者：汪中波刘玉祥毛明田 371医院

我科1986年1月～1991年5月共收治外科感染性休克58例,现将围手术期救治体会报告如下。临床资料本组男22例,女36例;年龄12～87岁,平均49岁。救治成活44例(75.9%);死亡14例(24.1%)。导致休克的原因有:急性化脓性梗阻性胆管炎(12例,死亡4... 详细信息

我科1986年1月～1991年5月共收治外科感染性休克58例,现将围手术期救治体会报告如下。临床资料本组男22例,女36例;年龄12～87岁,平均49岁。救治成活44例(75.9%);死亡14例(24.1%)。导致休克的原因有:急性化脓性梗阻性胆管炎(12例,死亡4例);胃、十二指肠溃疡或胃癌穿孔(11例,死亡2例);急性化脓性坏疽性胆囊炎(9例,死亡2例);急性出血性坏死性胰腺炎(3例,死亡1例);绞窄性小肠梗阻(6例,死亡2例);术后十二指肠残端瘘、膈下脓肿、结肠癌梗阻穿孔(各2例,各死亡1例);急性坏疽性、穿孔性阑尾炎(6例,无死亡);蛔虫致肠穿孔腹膜炎(2例,无死亡);肝脓肿(3例,无死亡)。本组行手术治疗48例。

关键词：休克感染性休克围手术期处理

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低位大口径胆总管十二指肠吻合术临床分析

实用外科杂志 1992年第1期12卷 54-55页

作者：汪中波马峰毛明田刘玉祥新乡市解放军371医院外一科 453000

70年代以来,国内外学者对胆总管十二指肠吻合术(CDD)褒贬不一.我科1978年1月至1990年8月以来对CDD 进行了改进,采用低位大口径CDD 治疗各类肝胆管结石病64例,经随访疗效满意,报告如下.

关键词：胆管结石胆总管十二指肠吻合术

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腹部严重多发伤76例围手术期救治体会

实用外科杂志 1993年第1期13卷 45-46页

作者：汪中波刘玉祥孙雷毛明田新乡市解放军371医院 453000

我科1981年1月至1991年12月共收治腹部创伤147例,其中腹部严重多发伤76例(51.7%)。本组伤情复杂,病情危重。

关键词：腹部损伤外科手术

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随机泛函微分方程参数估计的渐近行为

数学物理学报（A辑） 2024年第3期44卷 746-760页

作者：王佳曦毛明志中国地质大学(武汉)数理学院武汉430074

该文主要研究一类分布依赖随机泛函微分方程(McKean-Vlasov SDE)的系数最小距离估计值问题.在漂移系数满足一定假设条件下,得到了估计量的极限分布,进而讨论估计量的相合性和渐近正态性,在L^(γ)惩罚函数约束条件下,该文也给出了系数估... 详细信息

该文主要研究一类分布依赖随机泛函微分方程(McKean-Vlasov SDE)的系数最小距离估计值问题.在漂移系数满足一定假设条件下,得到了估计量的极限分布,进而讨论估计量的相合性和渐近正态性,在L^(γ)惩罚函数约束条件下,该文也给出了系数估计量的渐近行为,一个典型例子.

关键词： Wasserstein度量最小距离估计 Gronwall不等式分布测度

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设计创新在可持续发展包装设计中的应用研究

中国包装 2024年第7期44卷 32-39页

作者：毛明浙江纺织服装职业技术学院

目的以“设计创新在可持续发展包装设计中的应用研究”这一题目为核心,对可持续性与包装设计结合进行探讨,并提出具有实践价值的设计思路与创新方案。方法采用文献综述和案例分析方法进行研究。结果从可持续性和包装设计创新的发展历程... 详细信息

目的以“设计创新在可持续发展包装设计中的应用研究”这一题目为核心,对可持续性与包装设计结合进行探讨,并提出具有实践价值的设计思路与创新方案。方法采用文献综述和案例分析方法进行研究。结果从可持续性和包装设计创新的发展历程及应用等角度出发,探讨如何在保障产品功能和商业效益的同时,确保可持续性设计理念得以实现。通过分析基于可持续性理念的包装设计策略案例,提出了一些可行的设计思路和创新方案。结论在包装设计中应结合可持续性理念,通过创新手段来减少资源浪费、降低环境污染等负面影响,既能保证产品功能和商业效益,也能实现可持续发展。

关键词：设计创新可持续发展包装设计应用研究循环经济用户需求功能性

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基于排序学习的主客观组合赋权研究

统计与决策 2024年第2期40卷 67-72页

作者：毛明松邹瑞云毛福华郭唐宣江西财经大学信息管理学院南昌330013

文章针对多指标组合赋权问题,提出一种基于排序学习的主客观组合赋权方法,目的是使指标赋权的结果同时兼顾主观权重和客观权重。该方法首先构建指标和评价对象的初始偏序关系,然后构建指标和评价对象的预测偏序概率以及排序损失函数,最... 详细信息

文章针对多指标组合赋权问题,提出一种基于排序学习的主客观组合赋权方法,目的是使指标赋权的结果同时兼顾主观权重和客观权重。该方法首先构建指标和评价对象的初始偏序关系,然后构建指标和评价对象的预测偏序概率以及排序损失函数,最后以预测概率与真实概率的差距最小为优化目标,建立综合决策模型。对8家快递型物流上市企业2021年度财务数据进行实证分析,通过实例说明了该方法的合理性和有效性。

关键词：排序学习组合赋权法多指标评价指标赋权

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物联网下基于属性加密且支持溯源的数据共享方案

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计算机应用与软件 2024年第8期41卷 351-358,375页

作者：关川江史国振毛明西安电子科技大学通信工程学院陕西西安710071 北京电子科技学院电子与通信工程系北京100070

针对一对多模型下数据共享缺乏细粒度访问控制和数据流转缺乏溯源的问题,提出一种物联网下基于属性加密且支持溯源的数据共享方案。基于Waters所提密文策略属性方案对共享密钥加密,实现数据细粒度访问控制。依据区块链智能合约技术,有... 详细信息

针对一对多模型下数据共享缺乏细粒度访问控制和数据流转缺乏溯源的问题,提出一种物联网下基于属性加密且支持溯源的数据共享方案。基于Waters所提密文策略属性方案对共享密钥加密,实现数据细粒度访问控制。依据区块链智能合约技术,有效防止授权中心权限过大导致的安全隐患,保证所有参与者按照智能合约事先约定规则执行,用户验证数据正确性不需要额外计算开销。安全性分析表明,所提方案能很好地保护用户数据的安全性,系统数据流转可追溯。实验分析表明,所提方案在区块链交易数量、属性令牌生成、资源搜索以及验证方面有一定优势,适用于物联网设备资源受限场景下一对多数据共享。

关键词：属性基加密智能合约数据溯源物联网区块链

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生态诗人加里·斯奈德的海洋书写研究

海南师范大学学报（社会科学版） 2024年第1期37卷 127-132页

作者：毛明岭南师范学院文学与传媒学院广东湛江524048

美国山野诗人斯奈德创作了数量可观的海洋诗歌,可以称为海洋诗人。斯奈德的海洋书写包括海洋意象和海洋想象两个方面的主要内容,后者颇有价值,所蕴含的下列观点值得重视:海与山互相依赖、互相转化;海是生命之源,是阴性和母性的象征;水... 详细信息

美国山野诗人斯奈德创作了数量可观的海洋诗歌,可以称为海洋诗人。斯奈德的海洋书写包括海洋意象和海洋想象两个方面的主要内容,后者颇有价值,所蕴含的下列观点值得重视:海与山互相依赖、互相转化;海是生命之源,是阴性和母性的象征;水里看山可以颠覆“常识”,人类需要跳出自我看世界。斯奈德的海洋书写是其生态思想的体现,可能有助于纠正海洋文化与文学研究的三个偏颇:海洋与陆地的二元对立,用男性气质定义海洋精神,海洋研究中的海洋缺席。

关键词：加里·斯奈德海洋书写海洋文学生态思想

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