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衣原体质粒侵袭细胞相关毒力基因的体外鉴定

衣原体质粒侵袭细胞相关毒力基因的体外鉴定

作者：毕田田天津医科大学

学位级别：硕士

目的:体外培养、扩增和纯化沙眼衣原体鼠肺炎株（MoPn）。比较几种转化MoPn菌株在体外培养中对宿主细胞的感染力,鉴定与衣原体质粒侵袭细胞相关的毒力基因,并比较不同实验条件对衣原体侵袭和粘附宿主细胞能力的影响;鉴定影响衣原体在宿... 详细信息

目的:体外培养、扩增和纯化沙眼衣原体鼠肺炎株（MoPn）。比较几种转化MoPn菌株在体外培养中对宿主细胞的感染力,鉴定与衣原体质粒侵袭细胞相关的毒力基因,并比较不同实验条件对衣原体侵袭和粘附宿主细胞能力的影响;鉴定影响衣原体在宿主细胞与细胞间传播和生长能力和导致包涵体内糖原合成障碍相关的基因。方法:选取Hela细胞为宿主细胞,将携带敲除了衣原体质粒中不同开放阅读框（ORF）的各转化菌株接种培养20~24h,复苏成功后不断扩增收集。采用泛影钠-泛影葡胺密度梯度离心法进行菌株的纯化;测定各菌株浓度,按相同的菌量接种,设定离心+二乙胺乙基葡聚糖（DEAE-D）、离心、DEAE-D、无任何处理四个接种条件,在不同的实验条件下分别对各菌株进行处理,利用间接免疫荧光显微镜计数包涵体数目;分别于（20、40、60 h）观察各菌株连续3代感染细胞后菌斑形成的速度与面积大小;采用Lugol碘液染色,在倒置显微镜下,观察各菌株包涵体内糖原的合成情况。结果:纯化后获得了高感染活性的沙眼衣原体原体（EB）。敲除质粒编码蛋白Pgp4的菌株p GFP::CMΔPgp4在4种条件下包涵体数目分别为（10.20±1.30）、（6.80±0.44）、（3.00±1.22）和（0.80±0.45）个,阴性对照组质粒缺失株CMUT3包涵体数目分别为（6.40±0.89）、（3.80±0.83）、（1.60±0.89）和（0.60±0.54）个,同一条件下两者均表现出相近的感染能力,包涵体数目均低于同一条件下其他菌株（均P＜0.01）;同一菌株在不同条件下,包涵体数目差异具有统计学意义（F=845.310,P＜0.01）;各菌株在离心+DEAE-D条件下包涵体数目最多;菌株p GFP::CMΔPgp4和质粒缺失株连续3代感染细胞时菌斑形成的速度和面积大小均低于其他菌株;并出现糖原累积的障碍。结论:超速低温密度梯度离心纯化能够去除细胞中其它细胞成分对实验结果的影响,较既往常规的纯化方法更能保证结果的可靠性。Pgp4是衣原体质粒侵袭细胞相关的毒力基因之一,影响衣原体在宿主细胞与细胞之间的传播和生长能力和包涵体内糖原的合成能力。实验条件离心和DEAE-D均能增强毒力基因在体外对宿主细胞的侵袭和粘附能力。

关键词：沙眼衣原体纯化质粒开放阅读框毒力基因

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幼儿疥疮一例

中国麻风皮肤病杂志 2022年第1期38卷 53-55页

作者：毕田田宋元涛李钦峰天津市儿童医院皮肤科天津300074

患儿,男,3岁。臀部皮疹伴痒2个月余。皮肤科情况:臀部、双下肢、躯干可见红斑、丘疹、结节;阴茎可见单发暗红色结节。皮肤镜示:镜下可见隧道,隧道一端可见棕色小三角形结构。反射式共聚焦显微镜示:镜下可见开口于表皮的中高折光隧道结构... 详细信息

患儿,男,3岁。臀部皮疹伴痒2个月余。皮肤科情况:臀部、双下肢、躯干可见红斑、丘疹、结节;阴茎可见单发暗红色结节。皮肤镜示:镜下可见隧道,隧道一端可见棕色小三角形结构。反射式共聚焦显微镜示:镜下可见开口于表皮的中高折光隧道结构;境界清楚疥螨虫体;椭圆形,轮廓清楚的虫卵结构;圆形高折光粪便结构。诊断:疥疮。

关键词：疥疮皮肤镜反射式共聚焦显微镜幼儿

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疥疮的临床诊疗研究进展

现代诊断与治疗 2022年第2期33卷 177-179页

作者：毕田田李钦峰天津市儿童医院皮肤科天津300134

疥疮是临床上常见的一种传染性皮肤病,主要通过人型疥螨在家庭和其他接触者之间直接进行传播。皮疹形态多样,瘙痒剧烈,反复搔抓刺激可导致皮疹不典型,极易导致误诊,严重影响患者及家庭生活质量,因此病原体检测对于早期诊断疥疮具有确诊... 详细信息

疥疮是临床上常见的一种传染性皮肤病,主要通过人型疥螨在家庭和其他接触者之间直接进行传播。皮疹形态多样,瘙痒剧烈,反复搔抓刺激可导致皮疹不典型,极易导致误诊,严重影响患者及家庭生活质量,因此病原体检测对于早期诊断疥疮具有确诊意义。有医学研究提出,皮肤影像技术中的皮肤镜和反射式共聚焦显微镜能提供更加全面的皮肤损伤信息,降低医生的误诊率。目前医学上对于疥疮的治疗方法是以外用药为主,严重情况下需给患者提供系统用药,常用的外用药有5%~10%硫软膏、3%水杨酸软膏等,但部分患者在使用后会出现接触性皮炎等不良反应。有医学研究提出,氧化锌硫软膏作为含有氧化锌、升华硫等成分的复方制剂,治疗疥疮的效果明显,且不良反应较少。文章就皮肤影像技术对疥疮的临床诊断及疥疮治疗用药进展进行综述。

关键词：疥疮皮肤影像技术误诊率皮肤镜反射式共聚焦显微镜

婴幼儿颞部三角形脱发皮肤镜和反射式共聚焦显微镜特征分析

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中国皮肤性病学杂志 2022年第1期36卷 60-63,83页

作者：管志伟毕田田苏海辉天津市儿童医院(天津大学儿童医院)皮肤科天津300134

目的分析婴幼儿颞部三角形脱发(TTA)的皮肤镜和反射式共聚焦激光扫描显微镜(RCM)特征,探讨皮肤镜和RCM对TTA的辅助诊断价值。方法收集2015年1月-2020年12月在天津市儿童医院皮肤科门诊就诊的TTA患儿10例,行皮肤镜和RCM检查,记录图像特... 详细信息

目的分析婴幼儿颞部三角形脱发(TTA)的皮肤镜和反射式共聚焦激光扫描显微镜(RCM)特征,探讨皮肤镜和RCM对TTA的辅助诊断价值。方法收集2015年1月-2020年12月在天津市儿童医院皮肤科门诊就诊的TTA患儿10例,行皮肤镜和RCM检查,记录图像特点。结果皮肤镜图像显示,皮肤颜色大致正常,毛囊开口数量大致正常,毛囊口有毛绒状毛发(毳毛),边缘被正常毛发包围,没有黄点征、黑点征,脆性毛发和"感叹号"发,没有毛细血管扩张结构,未见明显皮肤萎缩及瘢痕。RCM图像显示,表皮结构大致正常,毛囊数量大致正常,毛囊形态偏小,毛囊口可见细小毛发,基底细胞环完整,未见液化变性,真皮乳头结构清晰,未见炎细胞浸润。结论婴幼儿TTA具有典型的皮肤镜及RCM特征,可为其诊断及鉴别诊断提供依据。

关键词：颞部三角形脱发婴幼儿皮肤镜反射式共聚焦显微镜

毛果杨PtIPT5基因的克隆及低温胁迫表达分析

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江苏农业科学 2023年第22期51卷 14-23页

作者：毕田田张骐代金玲高秀芳白玉娥内蒙古农业大学林学院内蒙古呼和浩特010000 鄂尔多斯市林业和草原事业发展中心内蒙古鄂尔多斯017000

为探究异戊稀基转移酶基因(IPT)的抗逆机理,通过PCR技术从毛果杨叶片中克隆了IPT基因,命名为PtIPT5,对该基因及其蛋白进行生物信息学分析,并使用实时荧光定量技术(qRT-PCR)分析其在毛果杨组培苗不同组织及不同程度低温处理下的表达特性... 详细信息

为探究异戊稀基转移酶基因(IPT)的抗逆机理,通过PCR技术从毛果杨叶片中克隆了IPT基因,命名为PtIPT5,对该基因及其蛋白进行生物信息学分析,并使用实时荧光定量技术(qRT-PCR)分析其在毛果杨组培苗不同组织及不同程度低温处理下的表达特性。结果表明,PtIPT5基因编码区(coding sequence,CDS)长度为984 bp,可编码327个氨基酸残基;PtIPT5蛋白为稳定亲水蛋白,且无信号肽和跨膜结构,含有GxxGxGK[S,T]保守基序;系统进化树分析结果显示,毛果杨PtIPT5蛋白与美洲黑杨、红皮柳等杨柳科植物的IPT亲缘关系较近;同源蛋白结构域分析结果显示,IPT蛋白高度保守,只有Cas3_I superfamily结构域;亚细胞定位预测PtIPT5蛋白位于叶绿体中;启动子分析结果显示,PtIPT5基因的启动子序列包含多种胁迫响应的顺式作用元件;PtIPT5基因在毛果杨茎段、顶芽、腋芽、主根、侧根、幼嫩叶、扩展叶和黄化衰老叶中均有表达,其中在顶芽、根部和幼嫩叶中相对表达量较高;低温胁迫下,PtIPT5基因的相对表达量随温度降低和胁迫时间增加显著下降,据此推测该基因响应低温胁迫并发挥调控作用。

关键词：毛果杨 PtIPT5基因克隆低温胁迫生物信息学表达分析

GJB2基因突变致儿童角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征一例

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中国麻风皮肤病杂志 2023年第6期39卷 423-425页

作者：冯小燕刘欣欣毕田田李钦峰天津市儿童医院皮肤科天津300134

患儿,女,6岁。全身皮肤干燥、粗糙,双手、足、肘膝、臀部呈棕褐色颗粒状皮革样改变,掌跖皮肤增厚,指(趾)甲增厚变形;头发、眉毛稀少、睫毛缺失,听力下降。本例患儿外周血GJB2基因第2外显子检测到杂合突变c.148G>A(p.D50N),皮损组织病理... 详细信息

患儿,女,6岁。全身皮肤干燥、粗糙,双手、足、肘膝、臀部呈棕褐色颗粒状皮革样改变,掌跖皮肤增厚,指(趾)甲增厚变形;头发、眉毛稀少、睫毛缺失,听力下降。本例患儿外周血GJB2基因第2外显子检测到杂合突变c.148G>A(p.D50N),皮损组织病理检查示鱼鳞病样改变,听力检查:双耳耳聋。符合儿童角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征诊断。

关键词：角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征 GJB2基因基因突变

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糖尿病大鼠脑额叶皮层血流量的经时变化

中国药理学通报 2017年第11期33卷 1517-1523页

作者：杨明艳王玥毕田田毕玉莹王冬雪赵瑛哈尔滨商业大学药学院黑龙江哈尔滨150076

目的探讨糖尿病大鼠脑额叶皮层血流量的动态变化,初步研究其与主要血管活性物质变化的关系,为进一步研究糖尿病认知障碍以及中枢神经系统功能变化提供前期基础。方法 34只♂Wistar大鼠随机分为空白对照组和糖尿病模型组。模型组腹腔注... 详细信息

目的探讨糖尿病大鼠脑额叶皮层血流量的动态变化,初步研究其与主要血管活性物质变化的关系,为进一步研究糖尿病认知障碍以及中枢神经系统功能变化提供前期基础。方法 34只♂Wistar大鼠随机分为空白对照组和糖尿病模型组。模型组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1复制糖尿病模型,葡萄糖氧化酶法测定72 h空腹血糖≥16.7 mmol·L^(-1)作为成模标准,血糖仪连续动态测定FBG,Morris水迷宫检测糖尿病大鼠学习记忆能力,双通道激光多普勒血流仪检测大鼠90 d额叶皮层血流量。另取34只♂Wistar大鼠分组造模同前,连续动态监测造模d 0、7、14、21、28、35、42、56、75额叶皮层血流量;ELISA法检测脑脊液中i NOS、c NOS和ET-1的浓度。结果 Morris水迷宫检测显示,糖尿病模型组大鼠从训练第6次逃避潜伏期明显延长(P<0.05),额叶皮层血流量/100 g体重明显降低(P<0.05);额叶皮层血流量动态监测结果显示,糖尿病大鼠造模d 21脑血流量/100 g体重下降(P<0.05),并在相似水平持续到成模d 75(P<0.01,P<0.05);与对照组相比,模型组脑脊液中i NOS和c NOS浓度明显升高(P<0.05),ET-1浓度明显下降(P<0.01)。结论糖尿病认知障碍大鼠额叶皮层血流量减少,提示脑血流量的减少可能是导致糖尿病发生认知障碍的因素之一。糖尿病动态脑血流量检测显示脑血流量减少发生在糖尿病早期,之后并无明显继续恶化。脑血流减少可能与NO、ET-1浓度变化无明显关系,但脑血流的变化趋势可能与二者变化有关。

关键词：糖尿病脑额叶皮层脑血流量双通道激光多普勒血流仪 NOS ET-1

浅析中小高科技企业知识型员工流失的原因与对策

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知识经济 2019年第6期 39-39,41页

作者：陈红毕田田烟台南山学院商学院 265700

知识型员工是中小高科技企业长远发展的重要贡献者,而中小高科技企业由于自身发展规模的限制,知识型员工流失率一直居高不下,高员工流失率会给企业带来诸多问题。本文主要分析了中小高科技企业知识型员工流失的原因,如员工忠诚度普遍偏... 详细信息

知识型员工是中小高科技企业长远发展的重要贡献者,而中小高科技企业由于自身发展规模的限制,知识型员工流失率一直居高不下,高员工流失率会给企业带来诸多问题。本文主要分析了中小高科技企业知识型员工流失的原因,如员工忠诚度普遍偏低、激励方式单一、个人的发展前景不明朗等,并有针对性的提出相关对策建议,希望本文的研究成果能够为中小高科技企业降低知识型员工流失率提供有参考价值的建议。

关键词：中小高科技企业知识型员工员工流失

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反射式共聚焦显微镜辅助诊断疥疮

临床皮肤科杂志 2022年第4期51卷 215-217页

作者：毕田田刘欣欣廉佳李钦峰天津市儿童医院皮肤科天津300400

患儿男,8岁。双手及腋下红色丘疹,阴囊结节伴瘙痒3个月。皮肤科检查:双手背、指间、掌纹间隙及腕部屈侧可见粟粒大暗红色丘疹,双侧腋下及股部可见豆粒大红色丘疹,阴囊和阴茎可见多发绿豆至黄豆大暗红色结节。反射式共聚焦显微镜下可见... 详细信息

患儿男,8岁。双手及腋下红色丘疹,阴囊结节伴瘙痒3个月。皮肤科检查:双手背、指间、掌纹间隙及腕部屈侧可见粟粒大暗红色丘疹,双侧腋下及股部可见豆粒大红色丘疹,阴囊和阴茎可见多发绿豆至黄豆大暗红色结节。反射式共聚焦显微镜下可见隧道、疥螨虫体、虫卵及粪便。诊断:疥疮。

关键词：疥疮共聚焦激光扫描显微镜