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抗人AFP单链抗体基因的构建和在大肠杆菌中的表达

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四川大学学报（医学版） 2005年第1期36卷 20-23页

作者：张平蔡美英赵宗蓉魏大鹏黎光毕建虹四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的　构建抗人 AFP单链抗体 (Sc Fv)的基因并转入大肠杆菌 BL - 2 1(DE3)中诱导表达。分离纯化Sc Fv并鉴定其生物活性。方法　用 RT- PCR方法从能分泌特异性抗人 AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离纯化抗体 VH和 VL基因。用重叠延伸 PC... 详细信息

目的　构建抗人 AFP单链抗体 (Sc Fv)的基因并转入大肠杆菌 BL - 2 1(DE3)中诱导表达。分离纯化Sc Fv并鉴定其生物活性。方法　用 RT- PCR方法从能分泌特异性抗人 AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离纯化抗体 VH和 VL基因。用重叠延伸 PCR方法将 VH和 VL拼接在一起 ,构建抗人 AFP单链抗体的基因。将 Sc Fv基因克隆至 p GEM- T载体构建 ,用限制性内切酶切以及测序鉴定。将 Sc Fv基因连接到 p ET32 (a+ )质粒 ,转化 BL - 2 1(DE3)细菌。抗性生长的克隆用异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导 4 h。溶解细菌并纯化 Sc Fv,通过 SDS-PAGE电泳及竞争抑制 EL ISA实验检测其活性。结果　获得的 VH含 339bp,来自小鼠 Ig Gγ链 ,VL含 312 bp,来自小鼠κ链。 VH和 VL通过编码 (G4 S) 3连接肽的 4 5 bp序列连接在一起构成含 6 96 bp的 Sc Fv基因。 BL - 2 1(DE3)中表达的 Sc Fv抗体与融合蛋白 (Trx A)融合在一起并以包涵体的形式存在。 Trx A- Sc Fv相对分子质量约 4 0× 10 3,Sc Fv相对分子质量约 2 4× 10 3。竞争 EL ISA实验显示 :Trx A - Sc Fv可抑制 4 1%的 Mc Ab与抗原结合 ,而Sc Fv抗体则可抑制 5 3%的 Mc Ab与抗原结合。结论　我们成功构建了由 6 96个碱基组成的抗人 AFP单链抗体的基因。

关键词： ScFv基因构建和表达 ScFv活性

C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达

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华西医科大学学报 2002年第4期33卷 536-539页

作者：张平毕建虹蔡美英章崇杰王蓉赵宗蓉魏大鹏唐梅四川大学华西医学中心免疫学教研室成都610041 四川省人民医院检验科

目的　以逆转录病毒 PL XSN为载体 ,构建重组逆转录病毒 C-末端缺陷的 JAK3[c- term defi-cient JAK3,JAK3(ΔC) ]载体 PL JAK3(Δ C) ,以 BAL B/ c3T3为靶细胞 ,转染 JAK3(ΔC) c DNA,检测 JAK3(Δ C)蛋白在真核细胞中的表达情况。为利... 详细信息

目的　以逆转录病毒 PL XSN为载体 ,构建重组逆转录病毒 C-末端缺陷的 JAK3[c- term defi-cient JAK3,JAK3(ΔC) ]载体 PL JAK3(Δ C) ,以 BAL B/ c3T3为靶细胞 ,转染 JAK3(ΔC) c DNA,检测 JAK3(Δ C)蛋白在真核细胞中的表达情况。为利用 JAK3(ΔC)对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法　用限制性内切酶法从质粒 Pc DNA3- JAK3(Δ C)中分离目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体 PL XSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体 PL JAK3(Δ C) ,通过转化感受态细菌扩增并检测 DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定 ;用脂质体L IPOFECTAMINE介导法将 PL JAK3(Δ C)转染包装细胞 PA317细胞 ,并用 G4 18筛选抗性细胞克隆 ,收集病毒 ;用该病毒感染靶细胞 BAL B/ c3T3,G4 18筛选抗性克隆并测定病毒滴度 ;抗性细胞扩增培养 ,细胞溶解后经免疫沉淀 (IP)、Western blotting检测 BAL B/ c3T3细胞中 JAK3(Δ C)的表达情况。结果　 1重组逆转录病毒载体 PL -JAK3(Δ C)酶切和 DNA测序均表明含有 2 796 bp的 JAK3(ΔC)基因 ;2病毒滴度为 1.2× 10 4 CFU/ ml;3PL JAK3(Δ C)转染 BAL B/ C3T3细胞中表达出了 JAK3(Δ C)蛋白 ,其相对分子质量为 10 7× 10 3。结论　该研究构建的 C-末端缺陷 JAK3重组逆转录病毒载体 PL JAK3(

关键词： JAK3(ΔC) 逆转录病毒载体真核细胞

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人AFP全长基因编码序列的克隆及表达

四川大学学报：医学版 2004年第5期35卷 612-614,633页

作者：邓小玲蔡美英魏大鹏胡丽娟毕建虹袁暾四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室

目的　构建人 AFP全长基因编码序列的真核表达质粒 ,并在 CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法　从人胎肝组织中提取 AFP基因 ,以全长基因序列为目的基因片段 ,真核表达质粒 pc DNA3.1(+)为载体 ,构建AFP重组质粒 ph AFP,经酶切分析和 DNA测... 详细信息

目的　构建人 AFP全长基因编码序列的真核表达质粒 ,并在 CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法　从人胎肝组织中提取 AFP基因 ,以全长基因序列为目的基因片段 ,真核表达质粒 pc DNA3.1(+)为载体 ,构建AFP重组质粒 ph AFP,经酶切分析和 DNA测序对 ph AFP进行鉴定。重组质粒 ph AFP经脂质体转染真核细胞CHO以及直接注射小鼠胫前肌 ,并采用免疫荧光染色及免疫组化对其表达产物进行检测。结果　获取的 AFP基因片段与 Gen Bank报道的序列一致 ,确认为人 AFP基因的全长编码序列 ,构建的重组质粒 ph AFP能在体外真核细胞 CHO、体内肌细胞中有效表达。结论　成功构建了能在真核细胞中表达的重组质粒 ph AFP,为 AFP

关键词：甲胎蛋白克隆真核表达

Protiva公司开发抗癌和抗炎生物治疗药物

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生物制品快讯 2001年第10期 22-23页

作者：毕建虹

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人类6型疱疹病毒

生物制品快讯 2002年第6期 10-12页

作者：毕建虹

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医学免疫学复习指导 1

丛书名：临床、口腔、预防、药学、医技、护理等专业考试辅导用书

2012年

作者：罗志娟章崇杰毕建虹吕梅励任德莲等编者

本书共分20章，每章由主要内容、重要词汇、自测题和参考答案四部分组成。主要内容部分将教材中的重点难点进行了归纳总结，层次清楚，知识点明确，便于理解、记忆；重要词汇部分列举了章节中出现的重要专业词汇的中英文，便于免疫学专... 详细信息

ISBN: (纸本)9787561457306

本书共分20章，每章由主要内容、重要词汇、自测题和参考答案四部分组成。主要内容部分将教材中的重点难点进行了归纳总结，层次清楚，知识点明确，便于理解、记忆；重要词汇部分列举了章节中出现的重要专业词汇的中英文，便于免疫学专业词汇的掌握和双语教学的开展。本书内容全面新颖、结构严谨、实用性强，对医药学院校各专业本科生、研究生系统复习和掌握医学免疫学理论知识，提升应试能力，具有很好的指导作用。同时也不失为研究生入学考试和执业医师资格考试的参考用书。

关键词：医药、卫生基础医学医学免疫学

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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碱性成纤维细胞生长因子与卵巢癌的关系

中华医学遗传学杂志 2003年第6期20卷 532-535页

作者：林卫彭芝兰郑艾毕建虹黄仲英四川大学华西第二医院妇产科成都610041 华西医学中心免疫教研室

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接... 详细信息

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF,每日行结晶紫染色后测定光密度 (D4 90 )值 ,绘制细胞生长曲线 ;将 SKOV3细胞团接种于铺设有细胞外基质凝胶的 4孔板 ,每日测定癌细胞在凝胶中的浸润距离 ;建立 SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型 ,每周两次分别将 b FGF、b FGF-MAb和生理盐水注射于移植瘤周围 ,8周后测量肿瘤体积 ;对移植瘤组织切片行因子的免疫组化染色、测定肿瘤内微血管密度 (microvessel density,MVD)。　结果　 b FGF能促进 SKOV3细胞增殖并呈浓度依赖 ,实验第 5天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞 D4 90 值是对照组的 1.0 9倍和 1.2 1倍 ;b FGF能促进 SKOV3细胞浸润并呈浓度依赖 (P<0 .0 5 ) ,第 7天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞浸润距离分别是对照组的 1.5 3倍和2 .4 5倍 ;b FGF组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 1.80倍和 1.4 6倍 (P<0 .0 5 ) ,b FGF- MAb组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 6 3.7%和 6 2 .8% (P<0 .0 5 )。　结论　b FGF能明显促进卵巢癌细胞的增殖、?

关键词：碱性成纤维细胞生长因子卵巢癌肿瘤细胞增殖肿瘤浸润肿瘤血管生成

阿莫西林对芍药苷治疗痛经模型小鼠疗效的影响研究

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中国药房 2007年第4期18卷 261-262页

作者：毕建虹宋鑫谢萍邱宇唐小海鲍朗四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都市610041 成都药友科技发展有限公司成都市610041 四川大学华西口腔医学院成都市610041

目的：研究阿莫西林对芍药苷治疗痛经模型小鼠疗效的影响。方法：小鼠随机分组，所有组连续12d灌胃给予己烯雌酚造模，第5天时模型对照组、阳性对照组、芍药苷不同剂量＋阿莫西林（PA）3组灌胃给予阿莫西林7d，于第12天对芍药苷（P）3组... 详细信息

目的：研究阿莫西林对芍药苷治疗痛经模型小鼠疗效的影响。方法：小鼠随机分组，所有组连续12d灌胃给予己烯雌酚造模，第5天时模型对照组、阳性对照组、芍药苷不同剂量＋阿莫西林（PA）3组灌胃给予阿莫西林7d，于第12天对芍药苷（P）3组和PA3组分别给予芍药苷不同剂量。给药后1h。所有组腹腔注射缩宫素，记录首次发生扭体的潜伏期和15min内小鼠扭体次数。结果：与阴性对照和模型对照组比较，P3组扭体潜伏期明显延长，15min内扭体次数明显减少（P〈0．01～0．05），PA3组中除大剂量组具有延长扭体潜伏期和减少扭体次数作用外（P〈0．01～0．05），其余2组作用不明显（P〉0．05）。结论：阿莫西林可降低芍药苷治疗痛经模型小鼠的疗效，提示这2种药物不宜同时使用。

关键词：阿莫西林芍药苷小鼠痛经疗效

亲水性接枝纳米炭的制备及其淋巴靶向特性的研究

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华西药学杂志 2006年第4期21卷 337-339页

作者：谢萍谢永美宋鑫毕建虹张勇何俊邱宇唐小海四川大学华西口腔医学院四川成都610041 四川大学化学学院四川成都610064 成都市药友科技发展有限公司四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院四川成都610041

目的制备亲水性纳米炭并研究其淋巴靶向性。方法浓硝酸氧化修饰纳米炭表面,100℃反应100 h,所得纳米炭能够在水中直接分散成混悬液,表明纳米炭经过修饰后成为亲水性接枝纳米炭。使用红外光谱、碱量滴定法和元素分析对纳米炭进行分析,并... 详细信息

目的制备亲水性纳米炭并研究其淋巴靶向性。方法浓硝酸氧化修饰纳米炭表面,100℃反应100 h,所得纳米炭能够在水中直接分散成混悬液,表明纳米炭经过修饰后成为亲水性接枝纳米炭。使用红外光谱、碱量滴定法和元素分析对纳米炭进行分析,并通过小鼠皮下注射实验研究其淋巴示踪性。结果硝酸氧化在纳米炭表面引入了大量含氧官能团,特别是羧基,其含量从2.1 ***-1增加到15.4 ***-1;使用激光粒度仪测定亲水纳米炭混悬液的平均粒径为71 nm,室温下放置考察6个月后,平均粒径无变化;用这种亲水性接枝纳米炭制备的混悬液能在4 m in内有效地对小鼠淋巴结进行染色,具有淋巴示踪特性。结论亲水性接枝纳米炭混悬液具有良好的悬浮稳定性,淋巴示踪效果好且染色迅速,可望成为新一代的淋巴靶向示踪剂。

关键词：氧化亲水性接枝纳米炭含氧官能团淋巴示踪