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牛凝乳酶原基因克隆及序列的进化分析

遗传 2008年第7期30卷 863-869页

作者：孙大庆姜毓君韩希妍曲妍妍毕宇涵张光辉东北农业大学乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030

利用RT-PCR克隆获得牛凝乳酶原基因的cDNA序列,测序后与GenBank中凝乳酶原基因进行序列比对和生物信息学分析。序列比对统计分析显示,该基因为牛凝乳酶原B基因,与已知牛和其他哺乳动物的凝乳酶原基因具有很高的同源性,18种哺乳动物凝乳... 详细信息

利用RT-PCR克隆获得牛凝乳酶原基因的cDNA序列,测序后与GenBank中凝乳酶原基因进行序列比对和生物信息学分析。序列比对统计分析显示,该基因为牛凝乳酶原B基因,与已知牛和其他哺乳动物的凝乳酶原基因具有很高的同源性,18种哺乳动物凝乳酶原基因密码子一、二、三位点的碱基偏倚度分别为:6.227、1.042和1.456。这表明该基因具有整体保守性和突变位点偏倚性两个特征,可以作为哺乳动物系统进化的研究对象。采用多种方法构建的该基因系统进化树一致表明,偶蹄动物与灵长动物的亲缘关系比偶蹄动物与啮齿动物的亲缘关系更近,比偶蹄动物与食肉动物的亲缘关系更远,并且18种哺乳动物的亲缘关系与动物种系进化关系一致,为哺乳动物系统进化关系研究提供了分子水平的佐证和依据。

关键词：凝乳酶原序列比对同源性系统进化

实时RT-PCR检测存活于乳中的单核细胞增多性李斯特菌

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食品科学 2008年第2期29卷 292-296页

作者：闫冰姜毓君曲妍妍毕宇涵相丽赵凤乳品科学教育部重点实验室东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌。为克服传统PCR检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总RNA并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlyA为靶基因,设计特异性引... 详细信息

单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌。为克服传统PCR检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总RNA并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlyA为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针进行实时PCR检测,研究了检测的特异性和灵敏度,考查了对人工污染牛乳进行检测的应用性。结果表明,所用引物和探针能较好的扩增目的基因,而对其他食源性致病菌无交叉反应。单增李斯特菌经1h增菌,可检出3×102CFU/ml。而经3h增菌,活菌检测限可达30CFU/ml。人工污染牛乳样品经6h增菌,检测限为17CFU/ml。此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查。

关键词：实时RT-PCR 单增李斯特菌 hlyA 人工污染乳活菌

RT-PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

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东北农业大学学报 2009年第2期40卷 88-91页

作者：姜毓君李一松相丽毕宇涵赵凤乳品科学教育部重点实验室东北农业大学食品学院哈尔滨150030

金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病源菌之一,尤其是肠毒素。国内外由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的食物中毒屡屡发生。目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素仍采用传统的方法,其操作繁琐、检测时间较长,通常需要3-5 d才能完... 详细信息

金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病源菌之一,尤其是肠毒素。国内外由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的食物中毒屡屡发生。目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素仍采用传统的方法,其操作繁琐、检测时间较长,通常需要3-5 d才能完成,且灵敏度较低。本研究缩短食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测时间,针对PCR检测的灵敏性、特异性,建立了检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法,为检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素提供了技术支持。分别采用TRIZol法和热酚法提取金黄色葡萄球菌总RNA并进行比较研究,在此基础上反转录获得cDNA,用特异引物对sea基因进行扩增,并优化PCR反应条件,获得理想的sea基因阳性扩增条带。结果表明,热酚法在总RNA提取方面优于TRIZol法,改进PCR反应时间和循环次数,最终初步建立RT-PCR检测金黄色葡萄球菌A基因的方法。

关键词：金黄色葡萄球菌 sea基因 RT-PCR

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肉鸡中沙门菌定量风险评估研究

卫生研究 2016年第6期45卷 998-1002页

作者：遇晓杰闫军朱江辉王开利薛成玉郑晓华毕宇涵谢平会黑龙江省疾病预防控制中心哈尔滨150030 国家食品安全风险评估中心

目的评估从零售到餐桌肉鸡中沙门菌引起的食源性疾病风险,并根据风险评估结果寻找有效的预防措施。方法利用黑龙江省肉鸡中沙门菌的监测数据及相关数据资料,结合剂量-反应模型和Combase数据库,应用@RISK软件对厨房内交叉污染造成鸡源性... 详细信息

目的评估从零售到餐桌肉鸡中沙门菌引起的食源性疾病风险,并根据风险评估结果寻找有效的预防措施。方法利用黑龙江省肉鸡中沙门菌的监测数据及相关数据资料,结合剂量-反应模型和Combase数据库,应用@RISK软件对厨房内交叉污染造成鸡源性沙门菌食物中毒的风险进行评估。结果根据本次生鸡肉的定量风险评估结果,提示由于中国居民发生厨房内交叉污染,导致鸡源性沙门菌食源性疾病的风险较高。情景分析显示,生鸡肉在零售阶段采用冷冻或者冷藏保存,可以将中国居民发生鸡源性沙门菌疾病的平均风险降至1/5。结论零售阶段生鸡肉采用冷链管理,可以有效地降低我国居民罹患鸡源性沙门菌食源性疾病的风险。

关键词：肉鸡沙门菌模型风险评估

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双重PCR检测食品中的动物源性成分

食品工业科技 2009年第3期30卷 315-318页

作者：毕宇涵闫冰赵凤王明娜韩希妍吕琦姜毓君乳品科学教育部重点实验室东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

建立了一种检测肉制品中动物源性成分的双重PCR技术,针对五种不同动物线粒体DNA中所含有的特异性基因分别设计引物,同时对脊椎动物所共有的保守基因进行引物设计,并将其作为体系中的内参照。用此技术可同时检测出肉制品中5种动物源性成... 详细信息

建立了一种检测肉制品中动物源性成分的双重PCR技术,针对五种不同动物线粒体DNA中所含有的特异性基因分别设计引物,同时对脊椎动物所共有的保守基因进行引物设计,并将其作为体系中的内参照。用此技术可同时检测出肉制品中5种动物源性成分,检测灵敏度达到1%,能够适应市场化检测的需要。

关键词：双重PCR 动物源性成分线粒体DNA 肉制品

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双重PCR检测食品中的动物源性成分

双重PCR检测食品中的动物源性成分

原料乳中多种致病菌的快速过滤富集及多重PCR检测

营养与食品——健康中国高级论坛Ⅱ

作者：姜毓君毕宇涵周艳秋张广辉乳品科学教育部重点实验室东北农业大学食品学院

利用双重PCR手段,以线粒体DNA为模板,针对猪、牛、马、鸡、羊这五种不同动物种属所含有的特异性基因分别设计引物,同时对脊椎动物所共有的存在于线粒体DNA中的保守基因进行引物设计,将其作为体系中的内参照。通过优化PCR反应条件,使其满... 详细信息

利用双重PCR手段,以线粒体DNA为模板,针对猪、牛、马、鸡、羊这五种不同动物种属所含有的特异性基因分别设计引物,同时对脊椎动物所共有的存在于线粒体DNA中的保守基因进行引物设计,将其作为体系中的内参照。通过优化PCR反应条件,使其满足6对引物同时出现双重有效扩增,从而同时对肉源样品进行种属鉴别,提高了检测效率与准确性。在生鲜肉及熟肉制品中,本检测方法对混入的其他肉样检出限可达1%,检测时间不足6h且操作方法与RELP-PCR、免疫扩散等方法相比成本低廉,能够适应快速检测的需要。

关键词：双重PCR 动物源性成分种属鉴别

来源： cnki会议评论

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食品与发酵工业 2008年第12期34卷 155-159页

作者：吕琦赵凤毕宇涵张光辉周艳秋遇晓杰张剑峰姜毓君乳品科学教育部重点实验室东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030 国家乳业工程技术研究中心黑龙江哈尔滨150086 黑龙江省疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨150030

针对目前原料乳中致病菌的检测方法繁琐费时耗力的缺点,建立一种能同时检测原料乳中多种致病菌的快速检测方法,采用多重PCR快速灵敏检测技术与一种不需要预增菌就可以直接从原料乳中快速过滤富集菌体的技术相结合来同时检测原料乳中主... 详细信息

针对目前原料乳中致病菌的检测方法繁琐费时耗力的缺点,建立一种能同时检测原料乳中多种致病菌的快速检测方法,采用多重PCR快速灵敏检测技术与一种不需要预增菌就可以直接从原料乳中快速过滤富集菌体的技术相结合来同时检测原料乳中主要致病菌——沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌和蜡样芽孢杆菌。整个过程只需7～8h即可完成,且检测灵敏度可达102cfu/mL。这种方法是对传统检测方法的有效改进,并且达到了原料乳检测快速、准确、灵敏的要求。

关键词：多重PCR 原料乳致病菌过滤快速检测

原料乳中多种致病菌的快速过滤富集及多重PCR检测

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