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中国药物与临床 2003年第1期3卷 15-17页

作者：余传信朱荫昌殷旭仁杨小红江苏省血吸虫病防治研究所科技部 214064

目的　探讨噬菌体展示模拟抗原表位对血吸虫病诊断及疗效考核价值。方法　将目标噬菌体感染大肠杆菌ER2 5 3 7进行扩增 ,用聚乙二醇 80 0 0 (PEG 80 0 0 )沉淀法纯化目标噬菌体。建立以噬菌体为抗原检测血吸虫病人血清抗体的血吸虫病酶... 详细信息

目的　探讨噬菌体展示模拟抗原表位对血吸虫病诊断及疗效考核价值。方法　将目标噬菌体感染大肠杆菌ER2 5 3 7进行扩增 ,用聚乙二醇 80 0 0 (PEG 80 0 0 )沉淀法纯化目标噬菌体。建立以噬菌体为抗原检测血吸虫病人血清抗体的血吸虫病酶联免疫诊断方法 ,以此方法检测急性、慢性及晚期血吸虫病人血清 ,同时检测健康人及肝吸虫病人血清 ,观察噬菌体抗原诊断血吸虫病的价值。以同样的方法平行检测治疗前及治愈后半年及 1年的血吸虫病人血清 ,观察噬菌体抗原的疗效考核价值。结果　以混合噬菌体抗原检测急性、慢性及晚期血吸虫病人血清 ,敏感性分别达到 94 8% ,97 2 %和 91 9%。检测健康人血清的假阳性率为 5 8% ,与肝吸虫病人血清的交叉反应率为 5 1%。检测 2 9份同一病人治愈后半年的血清 ,阴转率为 3 7 9% ,3 6份治愈后 1年的同一病人血清 ,阴转率达到 5 8 3 % ,明显高于可溶性虫卵抗原的阴转率。结论　噬菌体展示模拟血吸虫抗原表位可以作为血吸虫病的诊断抗原。

关键词：噬菌体抗原表位疗效血吸虫病诊断

日本血吸虫中国大陆株过氧化物氧化还原酶1的表达及生物学功能研究

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中国病原生物学杂志 2013年第6期8卷 514-519,526页

作者：金一柯雪丹余传信宋丽君王玠殷旭仁沈双陶永辉张英许永良杨静江苏省寄生虫病分子生物学重点实验室卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064

目的制备重组日本血吸虫过氧化物氧化还原酶1(rSj Prx1)蛋白,研究其生物学功能。方法采用RT-PCR方法,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并亚克隆入表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒Sj Prx1-pET28a,转化*** BL21... 详细信息

目的制备重组日本血吸虫过氧化物氧化还原酶1(rSj Prx1)蛋白,研究其生物学功能。方法采用RT-PCR方法,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并亚克隆入表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒Sj Prx1-pET28a,转化*** BL21,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达rSj Prx1蛋白,通过镍柱亲和层析纯化rSj Prx1蛋白。采用生物化学方法分析rSj Prx1对底物H2O2进行还原的酶活性。用纯化的rSj Prx1蛋白免疫小鼠,酶联免疫法检测小鼠血清抗体水平,观察其免疫原性。通过Western blot观察rSj Prx1蛋白对血吸虫感染血清的免疫反应性。以纯化rSj Prx-1蛋白刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,通过RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶表达水平的变化,采用细胞因子检测试剂盒分析巨噬细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以评价rSj Prx1蛋白的免疫调节功能。结果通过RT-PCR获得编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并成功构建了重组表达质粒Sj Prx1-pET28a。含重组质粒Sj Prx1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导表达可溶性Sj Prx1蛋白。纯化的rSj Prx1蛋白具有氧化还原活性,可还原底物H2O2。rSj Prx1蛋白免疫小鼠可产生高效价的血清抗体,该蛋白能被日本血吸虫感染者血清、病兔及病鼠血清识别,而免疫血清同样可能识别来源于血吸虫成虫及虫卵的天然Sj Prx1蛋白。制备的rSj Prx1可诱导巨噬细胞高水平表达与M2型转化相关的IL-10、精氨酸及CD206。结论制备的rSj Prx1蛋白具有天然的酶学特性、抗原性和Th2型免疫调节功能,为进一步发展新的血吸虫病治疗药物和免疫调节方法奠定了基础。

关键词：血吸虫,日本过氧化物氧化还原酶-1 基因克隆表达酶学活性免疫原性免疫调节

日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶抗体反应模式及诊断价值的研究

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中国病原生物学杂志 2015年第3期10卷 232-238页

作者：王玠余传信肖迪赵飞殷旭仁宋丽君沈双高玒张建中何利华许永良杨静江苏省寄生虫病分子生物学重点实验室卫生部重要寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064 中国疾病控制中心传染病预防控制所传染病诊断室北京昌平102206

目的观察血吸虫感染家兔体内抗日本血吸虫中国大陆株果糖二磷酸醛缩酶(Sj FBA)抗体反应的动态变化,评价检测抗Sj FBA抗体IgG用于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法采用RT-PCR方法从日本血吸虫中国大陆株cDNA中扩增出编码Sj FBA... 详细信息

目的观察血吸虫感染家兔体内抗日本血吸虫中国大陆株果糖二磷酸醛缩酶(Sj FBA)抗体反应的动态变化,评价检测抗Sj FBA抗体IgG用于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法采用RT-PCR方法从日本血吸虫中国大陆株cDNA中扩增出编码Sj FBA的开放阅读框基因片段,然后亚克隆到表达质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj FBA-pET28a。将重组表达质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经镍螯合胶亲和层析的方法纯化重组Sj FBA蛋白。用日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染日本大白兔,6周后用吡喹酮与青蒿琥酯进行治疗,收集感染前和感染后2、4、6周及治疗后2、4、6、8、10、12、14、16周的血样。以重组Sj FBA为包被抗原,建立检测抗Sj FBA抗体IgG的酶联免疫吸附试验方法(rSj FBA-ELISA),用于检测家兔不同感染阶段血清抗Sj FBA抗体反应模式。分别用5、10、15和20条日本血吸虫中国大陆株尾蚴感染小鼠,收集感染后35d的小鼠血清,采用rSj FBA-ELISA检测抗Sj FBA抗体IgG并观察抗Sj FBA抗体水平与感染度的关系。用rSj FBA-ELISA分别检测血吸虫病患者血清、健康人血清、华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清,观察该方法用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;使用该方法检测治疗前及治疗后1年的同一血吸虫现症感染患者的配对血清,观察抗Sj FBA抗体IgG检测用于血吸虫病疗效考核的价值。结果血吸虫感染家兔体内抗Sj FBA抗体IgG水平随感染时间的延长而逐渐增强,感染6周达到高峰(A450值为1.364),但治疗后抗Sj FBA的抗体则迅速下降,治疗6-8周后抗体水平可下降至阴性阈值(A450值为0.4),而未治疗组则抗体水平则始终保持在高水平,表明家兔体内抗Sj FBA抗体反应呈典型的短寿抗体反应模式。不同感染度小鼠血清抗Sj FBA抗体水平随着感染度的升高而逐渐升高,呈剂量依赖性关系。检测抗Sj FBA抗体IgG用于血吸虫现症感染诊断的特异性为88.8%,敏感性为82.5%,阴性预测值和阳性预测值分别为78.6%和91.0%;与华支睾吸虫病患者血清的交叉反应率为10%,与卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应率为30%。治愈1年后患者血清中抗Sj FBA的抗体IgG阴转率达100%。结论日本血吸虫Sj FBA在宿主体内诱导短寿抗体反应,应用rSj FBA-ELISA检测抗Sj FBA抗体IgG的敏感性和特异性均较高,具有血吸虫病诊断与疗效考核价值。

关键词：日本血吸虫中国大陆株果糖二磷酸醛缩酶短寿抗体反应现症感染免疫诊断疗效考核

重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2009年第1期21卷 6-10,F0003页

作者：余传信殷旭仁李健吴宇迪华万全梁幼生高琪江苏省血吸虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡214064

目的探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白(GST-TSP2HD)抗血吸虫感染免疫保护效果。方法采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白。实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,... 详细信息

目的探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白(GST-TSP2HD)抗血吸虫感染免疫保护效果。方法采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白。实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,同时设置佐剂对照组及GST蛋白免疫对照组,每2周加强免疫1次。加强免疫2次后每只小鼠经腹部皮肤感染(45±2)条血吸虫尾蚴。感染42 d后剖杀小鼠,经生理盐水静脉灌注收集成虫,计数减虫率,用KOH溶液消化肝组织收集虫卵,计算减卵率。组织切片观察小鼠肝组织病理变化,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中的抗体水平。结果与佐剂对照组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组的减虫率为27.10%,减卵率为32.30%;与GST蛋白免疫组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组可获得39.57%的减虫率,43.53%的减卵率。GST-TSP2HD融合蛋白免疫组肝组织中的虫卵肉芽肿数量明显减少,单个虫卵肉芽肿平均直径比佐剂对照组、GST蛋白免疫组分别下降了27.08%(P<0.05)和40.53%(P<0.01),差异均有统计学意义。GST-TSP2HD能诱导高水平抗TSP2HD蛋白的特异性抗体IgG,其中IgG1、IgG2b和IgG2c亚类可能在小鼠抗血吸虫感染保护性免疫中发挥重要作用。结论日本血吸虫四跨膜蛋白是一个有效的日本血吸虫病疫苗候选分子。

关键词：日本血吸虫四跨膜蛋白免疫保护性作用小鼠

预警哨鼠抗Sj23HD IgG抗体Western blot检测方法的改进及应用

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中国病原生物学杂志 2013年第12期8卷 1078-1081页

作者：王玠余传信杨坤殷旭仁宋丽君沈双金一姚媛陶永辉许永良杨静卫生部重要寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064

目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法，并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条，采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG，观察方法... 详细信息

目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法，并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条，采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG，观察方法的稳定性和敏感性，并对2012年江苏省潜在血吸虫感染高风险水域监测预警哨鼠回收后第14、21、35d血样进行检测，同时以ELISA检测方法作为对照，对免疫检测结果与解剖查虫结果进行统计学分析。结果改进后的Western blot操作简便，比常规方法节省142周时间。预制NC膜条至少可低温保存6个月，其敏感性与新鲜制备的NC膜条的敏感性相似。使用改进后的Western blot方法检测预警哨鼠14、21和35d血清标本，阳性率分别为0．90％，3．50％和5．06％，ELISA阳性率分别为0．45％、3．00％和5．06％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两种免疫学方法的敏感性均高于解剖查虫法。结论改进后的Western blot操作简便，敏感性高，可用于预警哨鼠血吸虫感染检测。

关键词：血吸虫,日本 Sj23HD 特异性IgG抗体哨鼠早期诊断 Western blot 简化

刚地弓形虫RH株GRA6分子基因克隆与序列分析

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中国寄生虫病防治杂志 2002年第3期15卷 141-143页

作者：余传信殷旭仁任建功朱荫昌江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064

目的　克隆刚地弓形虫 RH株致密颗粒抗原 (Dense granule antigen,GRA6 )分子基因 ,为研究使用重组的GRA6分子作为抗原进行弓形虫病诊断奠定基础。　方法　根据己知的 GRA6序列合成一对引物 ,抽提弓形虫速殖子m RNA,以速殖子 m RNA为模... 详细信息

目的　克隆刚地弓形虫 RH株致密颗粒抗原 (Dense granule antigen,GRA6 )分子基因 ,为研究使用重组的GRA6分子作为抗原进行弓形虫病诊断奠定基础。　方法　根据己知的 GRA6序列合成一对引物 ,抽提弓形虫速殖子m RNA,以速殖子 m RNA为模板 ,通过反转录 PCR(RT- PCR)扩增出 GRA6的 c DNA条带。目的基因 DNA条带被克隆到质粒 p UC19中形成重组质粒。对重组质粒 DNA进行纯化 ,并对目的基因片段进行核苷酸序列分析。　结果　通过RT- PCR从 m RNA中扩增出一条分子量约 70 0 bp的 DNA条带。核苷酸序列分析表明 ,GRA6分子基因的开放的阅读框全长为 6 93bp,编码 2 30个氨基酸分子 ,与已报道的 RH株 GRA6分子具有 10 0 %的同源性。　结论　本研究获得了刚地弓形虫 RH株的 GRA6分子基因。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒抗原基因克隆序列分析

日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及特性分析

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第4期23卷 412-418页

作者：宋丽君余传信谢曙英殷旭仁钱春艳王玠张伟柯雪丹江苏省血吸虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡214064 江西省寄生虫病防治研究所

目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(***)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET... 详细信息

目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(***)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET-41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET-41a。将重组表达质粒SjTGR-pET-41a和质粒pSUABC共转化到***21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达SjTGR蛋白。用阿糖胞苷-2',5'-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组SjTGR蛋白。以重组SjTGR免疫小鼠制备TGR多克隆血清,免疫印迹试验分析日本血吸虫体内是否存在天然TGR。采用生物化学方法分析重组SjTGR硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性。结果含有***硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功。含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET-41a的转化子细菌在静止生长期经IPTG诱导,24℃培养24h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSUABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量。免疫印迹试验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR。生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶。结论具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础。

关键词：日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶表达纯化酶活性

重组刚地弓形虫微线料体蛋白MIC10的制备与特性分析

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中国病原生物学杂志 2018年第9期13卷 979-983页

作者：周伟宋丽君沈双殷旭仁许永良刘茜余传信江苏省血吸虫病防治研究所国家卫生和计划生育委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江南大学公共卫生研究中心江苏无锡214064

目的制备重组刚地弓形虫微线体蛋白10(MIC10),并对其免疫学特性进行分析。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从弓形虫总RNA中反转录制备第一链cDNA,再利用特异性引物从cDNA中扩增出编码MIC10的基因片段,构建重组表达质粒pET28a-MIC10,转化... 详细信息

目的制备重组刚地弓形虫微线体蛋白10(MIC10),并对其免疫学特性进行分析。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从弓形虫总RNA中反转录制备第一链cDNA,再利用特异性引物从cDNA中扩增出编码MIC10的基因片段,构建重组表达质粒pET28a-MIC10,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)后用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过镍螯合亲和层析法纯化重组MIC10蛋白。用纯化的重组蛋白免疫家兔,制备抗MIC10多克隆抗体,采用Western blot分析重组MIC10蛋白的免疫学特性。结果采用RT-PCR法从弓形虫cDNA中反转录扩增到长度约为416bp的特异性DNA,基因序列分析证实为编码MIC10的基因片段;制备的重组表达质粒pET28a-MIC10转化大肠埃希菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,能表达重组MIC10蛋白;用纯化的重组MIC10蛋白免疫家兔,血清抗体效价达到1∶200 000以上。Western blot分析显示该抗体能识别弓形虫排泄分泌抗原中的天然MIC10分子而不识别弓形虫成虫抗原,证明MIC10为外分泌蛋白。结论制备了具有天然免疫原性的重组弓形虫MIC10蛋白,并证明该蛋白为外分泌蛋白。

关键词：刚地弓形虫微线体蛋白10 免疫原性免疫诊断

免疫刺激序列增强日本血吸虫DNA疫苗的免疫保护作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第1期23卷 1-5页

作者：赵松朱荫昌 D.A.Harn 司进任建功殷旭仁何伟梁幼生徐明许永良江苏省血吸虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室无锡214064 哈佛大学公共卫生学院

目的　探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。　方法　将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40... 详细信息

目的　探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。　方法　将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40只雌性BALB/c小鼠随机分为 4组 ,① pcDNA3 1对照组 ;②pcDNA3 1 SjC2 3组 ;③ pcD NA3 1 CpG组 ;④ pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG组。每鼠经两侧股四头肌注射质粒DNA共 10 0 μg ,隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴 45条 /鼠 ,45d后计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前和感染前 2d分别经尾静脉采血 ,检测IgG及IgG1、IgG2a。末次免疫后 3周取小鼠脾细胞 ,检测经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后小鼠白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 4(IL 4)和γ干扰素 (IFN γ)。用51Cr释放法检测经SjC2 3重组蛋白刺激后脾细胞对小鼠淋巴瘤细胞的杀伤作用。　结果　②组和④组减虫率分别为 2 8 1%和 3 5 1% ,减卵率分别为 2 1 6%和 2 6 5 %。④组减虫率显著高于②组 (P <0 0 5 )。这两组均检测到特异性IgG ,IgG2a/IgG1比值分别为 10 1和 12 2。脾细胞经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后的IL 2水平 ,②组较①组、④组较③组均有升高。②组脾?

关键词：免疫刺激序列 pcDNA3 脾细胞 DNA疫苗日本血吸虫免疫保护作用小鼠白刺刀豆成虫