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曼氏血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表达及特性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第2期28卷 89-93页

作者：谢曙英陈红根余传信殷旭仁华万全曾小军梁幼生高琪江西省寄生虫病防治研究所南昌330046 江苏省寄生虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡214064

目的合成并表达曼氏血吸虫虫卵白介素4诱导物(IPSE)基因,并对其免疫特性进行分析。方法应用重叠PCR方法合成曼氏血吸虫IPSE基因,将其定向克隆至表达载体pET32a(+)的硫氧还蛋白(Trx)序列下游,构建重组表达质粒IPSE/pET32a(+)。将重组质... 详细信息

目的合成并表达曼氏血吸虫虫卵白介素4诱导物(IPSE)基因,并对其免疫特性进行分析。方法应用重叠PCR方法合成曼氏血吸虫IPSE基因,将其定向克隆至表达载体pET32a(+)的硫氧还蛋白(Trx)序列下游,构建重组表达质粒IPSE/pET32a(+)。将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达Trx-IPSE融合蛋白。大量制备表达产物,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化重组Trx-IPSE融合蛋白。用大量PBS对变性融合蛋白进行透析,获得部分复性的可溶性Trx-IPSE融合蛋白。应用蛋白质印迹(Westernblotting)分析其是否能被慢性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体所识别,及其与健康人血清中IgE抗体的结合能力。结果人工合成的IPSE基因序列与天然基因序列完全一致。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,含重组质粒的转化子细菌能表达相对分子质量(Mr)约35700的蛋白分子,与预计Trx-IPSE融合蛋白的相对分子质量大小相符。Westernblotting分析结果显示,变性的和复性的Trx-IPSE融合蛋白均能被慢性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体识别,融合蛋白Trx-IPSE能与健康人血清中IgE抗体非特异性结合。结论曼氏血吸虫IPSE基因合成获得成功,重组表达的IPSE具有与天然抗日本血吸虫抗体反应和与IgE非特异性结合的能力。

关键词：曼氏血吸虫虫卵蛋白血吸虫虫卵白介素4诱导物基因合成功能分析

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快速ELISA法诊断血吸虫病的应用研究

中国血吸虫病防治杂志 2011年第2期23卷 158-162页

作者：华万全余传信殷旭仁钱春艳江苏省血吸虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡214064

目的对快速酶联免疫吸附试验(ELISA)的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察... 详细信息

目的对快速酶联免疫吸附试验(ELISA)的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察待测血清和HRP-SPA不同混合反应时间对检测效果的影响,优化快速ELISA法的检测条件。用快速ELISA法、常规ELISA法和胶体染料试纸条法(DDIA)平行检测慢性血吸虫病人、华支睾吸虫病人及健康人血清,观察快速ELISA法的血吸虫病诊断实用价值。结果 HRP-SPA的最佳工作浓度为1∶2 000,待测血清和HRP-SPA最佳混合反应条件是37℃同步反应60 min。快速ELISA法检测慢性血吸虫病人血清抗体阳性检出率为93.8%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为4.0%,检测健康人血清的假阳性率为1.5%,与常规ELISA法和DDIA检测结果相似。结论快速ELISA法具有快速、简便等优点,是一种简便实用的血吸虫病免疫诊断方法。

关键词：血吸虫病免疫诊断快速ELISA法金黄色葡萄球菌A蛋白

1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉衍生物的合成及抗日本血吸虫活性评价

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有机化学 2013年第12期33卷 2588-2595页

作者：王文龙宋丽君王古平范文华殷旭仁余传信冯柏年江南大学药学院无锡214122 江苏艾凡生物医药有限公司无锡214122 江苏省寄生虫病防治研究所无锡214064

大规模使用抗血吸虫病药物吡喹酮产生的耐药性问题备受关注．为了寻找新型的抗血吸虫病药物，设计、合成了一类1-甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉衍生物2～10，并对化合物进行了体外抗日本血吸虫活性评价．结果显示，含有氯乙酰基取代的衍生... 详细信息

大规模使用抗血吸虫病药物吡喹酮产生的耐药性问题备受关注．为了寻找新型的抗血吸虫病药物，设计、合成了一类1-甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉衍生物2～10，并对化合物进行了体外抗日本血吸虫活性评价．结果显示，含有氯乙酰基取代的衍生物10表现了优于吡喹酮的杀虫活性，可以作为开发新型抗血吸虫病药物的先导化合物．

关键词：吡喹酮 1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉衍生物日本血吸虫杀虫活性

日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原的融合表达及抗原性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第3期23卷 155-158页

作者：柳建发余传信朱荫昌殷旭仁许永良宁波大学医学院宁波315211 江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的重组表达制备日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原(SjMP10)。方法根据日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10分子的读框序列设计合成1对引物,扩增SjMP10DNA片段并克隆到表达载体pGEX-4T-3中。转化BL21(DE3)后,诱导表达谷胱甘肽转移酶-虫卵中毛蚴抗原... 详细信息

目的重组表达制备日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原(SjMP10)。方法根据日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10分子的读框序列设计合成1对引物,扩增SjMP10DNA片段并克隆到表达载体pGEX-4T-3中。转化BL21(DE3)后,诱导表达谷胱甘肽转移酶-虫卵中毛蚴抗原10(GST-SjMP10)融合蛋白。采用洗脱法制备GST-SjMP10融合蛋白,应用免疫印迹法(Westernblotting)和淋巴细胞增殖试验进行重组蛋白的抗原性分析。结果SjMP10基因克隆到表达质粒pGEX-4T-3后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导能表达出Mr39000的GST-SjMP10融合蛋白,经电洗脱法纯化的上述重组融合蛋白可被血吸虫感染兔血清所识别,并能刺激血吸虫感染鼠脾淋巴细胞增殖。结论日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10融合表达获得成功。

关键词：日本血吸虫毛蚴抗原表达抗原性分析

日本血吸虫中国大陆株21.7kDa分子(SjC21.7)的基因克隆及序列分析

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中国血吸虫病防治杂志 2000年第1期12卷 4-7页

作者：余传信朱荫昌殷旭仁江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的克隆回本血吸虫中国大陆株２１．７ｋＤａ分子的编码基因。方法合成１对特异性引物，通过聚合酶链反应技术从日本血吸虫中国大陆株ｃＤＮＡ中对目的基因进行扩增和克隆，对扩增产物进行核苷酸序列分析。结果用聚合酶链反应，从日本... 详细信息

目的克隆回本血吸虫中国大陆株２１．７ｋＤａ分子的编码基因。方法合成１对特异性引物，通过聚合酶链反应技术从日本血吸虫中国大陆株ｃＤＮＡ中对目的基因进行扩增和克隆，对扩增产物进行核苷酸序列分析。结果用聚合酶链反应，从日本血吸虫中国大陆株ｃＤＮＡ中扩增出１条单一的ＤＮＡ条带，大小约为５００～６００ｂｐ。核苷酸序列分析表明日本血吸虫中国大陆株２１．７ｋＤａ分子的开放阅读框全长为５５８ｂｐ，与日本血吸虫菲律宾株２１．７ｋＤａ分子基因完全同源。结论日本血吸虫中国大陆株２１．７ｋＤａ膜蛋白基因克隆成功为进一步研究该分子用作疫苗的潜能奠定基础。

关键词：日本血吸虫 21.7kDa分子基因克隆

日本血吸虫(中国大陆株)磷酸丙糖异构酶(SjC-TPI)基因克隆与序列分析

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中国血吸虫病防治杂志 1997年第6期9卷 321-325页

作者：余传信朱荫昌殷旭仁司进江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

根据已知日本血吸虫菲律宾株TPI序列，设计合成一对5’端分别带有BamH1，Sal1酶切位点的引物P1和P2，制备日本血吸虫成虫（中国大陆株）mRNA，采用反转录聚合酶链反应技术，从mRNA中扩增出日本血吸虫中国大陆株TPI基因片段，序列分析表... 详细信息

根据已知日本血吸虫菲律宾株TPI序列，设计合成一对5’端分别带有BamH1，Sal1酶切位点的引物P1和P2，制备日本血吸虫成虫（中国大陆株）mRNA，采用反转录聚合酶链反应技术，从mRNA中扩增出日本血吸虫中国大陆株TPI基因片段，序列分析表明，日本血吸虫（中国大陆株）TPI基因开放阅读框架全长为759bp，与曼氏血吸虫TPI基因的同源性为84％。与日本血吸虫（菲律宾株）TPI基因的同源性为99.7％。

关键词：日本血吸虫(中国大陆株) 磷酸丙糖异构酶(TPI) 基因克隆序列分析

模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究

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中国血吸虫病防治杂志 2004年第2期16卷 95-99页

作者：余传信朱荫昌殷旭仁杨小红江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎... 详细信息

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.

关键词：模拟抗原表位序列测定合成多肽血吸虫病

日本血吸虫SjC21.7核酸疫苗诱导小鼠保护性免疫作用的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2002年第4期20卷 201-204页

作者：余传信朱荫昌殷旭仁任建功司进许永良沈林南江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 1.7k Da膜蛋白分子 (Sj C2 1.7)核酸疫苗对 BAL B/ c小鼠的免疫保护性作用。　方法　采用 PCR方法扩增出特异性 Sj C2 1.7基因的开放阅读框序列 ,在其起始密码子处引入 Kozark序列。将目的基因片段亚... 详细信息

目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 1.7k Da膜蛋白分子 (Sj C2 1.7)核酸疫苗对 BAL B/ c小鼠的免疫保护性作用。　方法　采用 PCR方法扩增出特异性 Sj C2 1.7基因的开放阅读框序列 ,在其起始密码子处引入 Kozark序列。将目的基因片段亚克隆到真核表达质粒 pc DNA3.1中 ,构建重组真核表达质粒 Sj C2 1.7- pc DNA3.1。 4 8只 BAL B/ c小鼠分为对照组、实验组和加强组。对照组小鼠的股四头肌注射接种 pc DNA3.1,实验组同法注射重组质粒 Sj C2 1.7- pc D-NA3.1,加强组除注射重组质粒 Sj C2 1.7- pc DNA3.1外 ,同时注射重组质粒 P35 - pc DNA3.1及 P4 0 - pc DNA。每隔 2 wk免疫 1次 ,共免疫 3次。第 3次免疫后第 30天 ,每只鼠感染 4 5± 1条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各组小鼠成虫数及肝卵数。通过 EL ISA和免疫组化分析观察小鼠免疫学特征的变化。　结果　免疫组化分析显示 ,实验组小鼠股四头肌局部组织有特异性抗原蛋白表达。EL ISA分析表明 ,免疫后实验组和加强组有部分小鼠出现特异性 Ig G抗体。与对照组比较 ,实验组减虫率及减卵率分别为 2 9.9%及 13.8% ,加强组分别为 31.9%及 2 8.0 %。加强组减卵率显著高于实验组(P<0 .0 5 )。　结论　 Sj C2 1.7核酸疫苗能诱导 BAL B/

关键词：日本血吸虫 21.7kDa蛋白分子核酸疫苗免疫保护作用 IL-12 白细胞介素-12 血吸虫病

弓形虫磷酸丙糖异构酶原核表达及免疫保护的初步研究

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第6期29卷 780-783页

作者：沈双殷旭仁宋丽君王玠柯雪丹周伟余传信上海健康医学院附属第六人民医院东院上海201306 上海交通大学附属第六人民医院江南大学公共卫生研究中心国家卫生计生委寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所

目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(... 详细信息

目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,镍亲和层析法纯化目的蛋白。将与佐剂乳化后的TPI蛋白对小鼠颈背部多点皮内免疫,间隔2周,连续免疫4次,最后一次为加强免疫,同时设置佐剂对照组与正常对照组。尾静脉采血检测小鼠血清抗体效价。以400个弓形虫速殖子/只接种小鼠腹腔,观察记录各组小鼠的生存率。结果成功扩增到弓形虫TPI基因,构建原核表达载体TPI/p ET-28a(+),获得纯化的TPI蛋白,TPI免疫4次后的小鼠血清抗体效价可达1:100 000以上,且生存期显著高于佐剂对照组与正常对照组。结论弓形虫TPI蛋白对弓形虫感染小鼠具有一定的免疫保护作用,为研究弓形虫疫苗奠定了理论基础。

关键词：刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶原核表达免疫保护