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子宫肌瘤致病相关基因的初步研究

癌症 2004年第3期23卷 292-295页

作者：李田李小毛殷恒讳杨越波中山大学附属第三医院妇产科广东广州510630 中山大学附属第一医院血管外科广东广州510630

背景与目的:已知子宫肌瘤的发生与某些基因的表达异常有关,但其分子生物学机制尚未完全阐明,本研究通过比较子宫肌瘤及正常子宫肌组织在mRNA分子水平上的表达差异,筛选子宫肌瘤的致病相关基因。方法:应用荧光标记的mRNA差异显示技术,包... 详细信息

背景与目的:已知子宫肌瘤的发生与某些基因的表达异常有关,但其分子生物学机制尚未完全阐明,本研究通过比较子宫肌瘤及正常子宫肌组织在mRNA分子水平上的表达差异,筛选子宫肌瘤的致病相关基因。方法:应用荧光标记的mRNA差异显示技术,包括4种锚定引物和3种随机引物,共12种组合,比较子宫肌瘤及正常子宫肌组织基因表达的差异,对获得的差异基因片段进行克隆、测序及同源性分析,并对其中一条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT-PCR分析。结果:从子宫肌瘤中分离出差异基因片段27条,克隆及测序显示N568片段与GCRG114基因序列同源性达96%,RT-PCR证实该基因的表达水平在90.0%(9/10)的肌瘤组织中显著低于正常子宫肌组织。结论:N568片段与GCRG114基因序列有高度同源性,可能与子宫肌瘤的发病相关。

关键词：子宫肌瘤基因肿瘤子宫肌组织妇科

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乳腺癌基因治疗的现状与存在问题

中华医学杂志 2005年第1期85卷 3-6页

作者：王深明殷恒讳中山大学第一附属医院血管外科广州510080

乳腺癌的基因治疗是继手术、放疗、化疗和内分泌治疗后出现的一种新的治疗手段.基因治疗系统由治疗基因和运送基因的病毒性或非病毒性载体两部分构成.近年来,随着人们对乳腺癌分子病理学认识的深入和重组DNA技术的快速发展,乳腺癌的基... 详细信息

乳腺癌的基因治疗是继手术、放疗、化疗和内分泌治疗后出现的一种新的治疗手段.基因治疗系统由治疗基因和运送基因的病毒性或非病毒性载体两部分构成.近年来,随着人们对乳腺癌分子病理学认识的深入和重组DNA技术的快速发展,乳腺癌的基因治疗发展迅速。

关键词：乳腺癌基因治疗癌基因分子病理学治疗手段内分泌治疗病毒性重组DNA技术运送载体

基因芯片技术筛选原发性下肢深静脉瓣膜功能不全所致大隐静脉曲张的发病相关基因

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中国实用外科杂志 2004年第9期24卷 554-556,i001页

作者：王深明林颖殷恒讳中山大学附属第一医院血管外科广州510080

目的　利用基因芯片技术分析原发性下肢深静脉瓣膜功能不全 (PDVI)所致大隐静脉曲张的基因表达谱和差异基因。方法　对 10例PDVI所致的曲张大隐静脉和 10例正常对照组织进行mRNA抽提 ,分别给予荧光素Cy5和Cy3标记以制备cDNA探针 ,并与含... 详细信息

目的　利用基因芯片技术分析原发性下肢深静脉瓣膜功能不全 (PDVI)所致大隐静脉曲张的基因表达谱和差异基因。方法　对 10例PDVI所致的曲张大隐静脉和 10例正常对照组织进行mRNA抽提 ,分别给予荧光素Cy5和Cy3标记以制备cDNA探针 ,并与含有 12 2 0个人类全长互补DNA的基因芯片进行杂交和分析。结果　在PVDI所致的曲张大隐静脉组织中共检测到 2 1个差异基因 ,其中 9个为上调基因 ,12个为下调基因。差异表达基因包括参与信号传导、细胞周期以及细胞生长、分化、代谢、增殖和凋亡的相关基因。结论　运用基因芯片技术筛选出的差异基因与PVDI所致大隐静脉曲张发病相关。

关键词：基因芯片筛选原发性下肢深静脉瓣膜功能不全下肢大隐静脉曲张基因表达

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子宫肌瘤相关基因筛查与克隆的初步研究

中国实用妇科与产科杂志 2004年第2期20卷 106-107页

作者：李田李小毛殷恒讳杨越波中山大学附属第三医院妇产科广州510630 中山大学附属第一医院外科广州510080

子宫肌瘤的病因,不论从临床方面或从实验室方面都有过不少研究,但均未获得确切的结论.本研究从分子生物学角度,在mRNA水平,采用荧光标记mRNA差异显示技术对子宫肌瘤组织及正常子宫肌组织的差异表达基因情况进行研究,筛查并克隆子宫肌瘤... 详细信息

子宫肌瘤的病因,不论从临床方面或从实验室方面都有过不少研究,但均未获得确切的结论.本研究从分子生物学角度,在mRNA水平,采用荧光标记mRNA差异显示技术对子宫肌瘤组织及正常子宫肌组织的差异表达基因情况进行研究,筛查并克隆子宫肌瘤的相关基因,为进一步探讨子宫肌瘤的发病机制提供依据.

关键词：子宫肌瘤发病机制相关基因 mRNA差异显示技术

原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的大隐静脉曲张致病相关基因的筛选与克隆

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中华外科杂志 2002年第12期40卷 909-911页

作者：王深明殷恒讳王劲松胡作军黄雪玲中山大学附属第一医院血管外科广州510080

目的　筛选和克隆原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的大隐静脉曲张的致病相关基因。方法　利用mRNA荧光差异显示技术比较原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者的曲张大隐静脉隐股瓣膜区组织中mRNA表达与对照组的差异 ,获得的差异表达cDNA片... 详细信息

目的　筛选和克隆原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的大隐静脉曲张的致病相关基因。方法　利用mRNA荧光差异显示技术比较原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者的曲张大隐静脉隐股瓣膜区组织中mRNA表达与对照组的差异 ,获得的差异表达cDNA片段经Northernblot验证后进行克隆和测序以探明其基因来源。　结果　共获得 37条差异表达的cDNA条带 ,经杂交验证其中 30条为阳性 (阳性率 80 %)。克隆及测序结果显示C610 片段 (NO 18克隆 )与麦考综合征 (Mckusick Kaufmansyndrome,MKKS)基因的mRNA序列有 96 %的同源性。　结论　C610 片段 (NO 18克隆 )与麦考综合征基因高度同源 ,与下肢大隐静脉曲张的发病密切相关。

关键词：原发性下肢深静脉瓣膜功能不全大隐静脉曲张致病相关基因病因基因克隆荧光差异显示技术 PDVI

原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者曲张大隐静脉组织内KIAA0353基因的表达缺失

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中华医学杂志 2003年第8期83卷 620-623页

作者：殷恒讳王深明王劲松胡作军黄雪玲中山大学附属第一医院血管外科广州510080

目的　筛选原发性下肢深静脉瓣膜功能不全 (PDVI)患者中大隐静脉曲张的致病相关基因。方法　利用荧光差异显示技术 (FDD) ,比较 10例PDVI患者中曲张的大隐静脉隐股瓣膜区组织与正常人相应组织中mRNA表达的差异。获得的差异表达cDNA片段... 详细信息

目的　筛选原发性下肢深静脉瓣膜功能不全 (PDVI)患者中大隐静脉曲张的致病相关基因。方法　利用荧光差异显示技术 (FDD) ,比较 10例PDVI患者中曲张的大隐静脉隐股瓣膜区组织与正常人相应组织中mRNA表达的差异。获得的差异表达cDNA片段经Northern印迹证实后进行克隆和测序 ,分析其来源。结果　发现 37条差异表达cDNA片断 ( 30条证实为阳性 ) ,其中一条 5 40bp的片断只在正常人组中特异性表达 ,与人类KIAA0 35 3基因的mRNA部分序列有 99%的同源性。结论　原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者中大隐静脉曲张的发生是一个多基因参与的过程 ;KIAA0 35 3基因的表达缺失可能与PDVI患者中大隐静脉曲张的发生有关。

关键词：原发性下肢深静脉瓣膜功能不全组织内 KIAA0353基因表达缺失大隐静脉曲张

大鼠弹力蛋白原基因重组腺病毒载体的构建及在血管平滑肌细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2007年第10期24卷 1189-1191页

作者：熊江殷恒讳朱易凡叶财盛王深明中山大学附属第一医院血管外科广州510080

目的构建携载大鼠弹力蛋白原(tropoelastin)基因的重组腺病毒载体,并在体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中表达。方法利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pShuttleTropoelastin-GFP进行同源重组,筛选... 详细信息

目的构建携载大鼠弹力蛋白原(tropoelastin)基因的重组腺病毒载体,并在体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中表达。方法利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pShuttleTropoelastin-GFP进行同源重组,筛选出重组黏粒pAdTropoelas- tin-GFP,经过包装、扩增、纯化后获得重组腺病毒AdTropoelastin-GFP,测定病毒滴度。腺病毒体外感染大鼠主动脉平滑肌细胞,一步法提取细胞总RNA,逆转录后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测tropoelastin的mRNA。结果得到了携载tropoelastin基因的重组腺病毒,纯化后滴度为5×10^(11)pfu/ml,腺病毒转染VSMC后1、3 d tropoelastin mRNA表达较空病毒明显增高(P<0.01),并超出空病毒转染组2倍以上。结论成功构建了携带tropoelastin的重组腺病毒载体,体外转染的VSMC有效表达目的基因。

关键词：弹力蛋白原腺病毒载体基因治疗平滑肌细胞

PDVI患者曲张大隐静脉组织中DMN水平的表达

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中山大学学报（医学科学版） 2003年第3期24卷 217-220页

作者：殷恒讳王深明张革银巍王劲松中山大学附属第一医院血管外科广东广州510080 中山大学分子医学中心实验室广东广州510080

【目的】探讨Desmuslin(DMN)及其基因表达水平在原发性下肢深静脉瓣膜功能不全(primary deepvein valve insufficiency,PDVI)引起的大隐静脉曲张组织中的变化。【方法】分别用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blotting检测PDVI病人曲张大隐静脉以及正常人大隐静脉组织中DMN基因和DMN蛋白的表达水平,用图像分析软件分析电泳照片,比较两组标本条带积分光密度的差异。【结果】RT-PCR中,病例组扩增的条带积分光密度为20 225,3±1 573.6,对照组为117327.9±9183.5(P<0.01);Western blotting中,病例组条带积分光密度为16786.9±3169.3,对照组为93739.3±8614.8(P<0.01)。【结论】DMN蛋白和desmuslin基因表达的下调可能与PDVI引起的大隐静脉曲张有关。

关键词： Desmuslin 大隐静脉曲张原发性下肢深静脉瓣膜功能不全聚合酶链式反应病理机制

应用荧光标记信使核糖核酸差异显示技术分离子宫肌瘤相关基因片段

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新医学 2003年第8期34卷 472-474页

作者：李小毛李田殷恒讳杨越波中山大学附属第三医院妇产科 510630 中山大学附属第一医院外科 510080

目的:应用荧光标记的信使核糖核酸(messengerribonucleicacid,mRNA)差异显示技术分离子宫肌瘤及正常子宫肌组织相关的差异基因片段。方法:用4种锚定引物和3种随机引物,共12种组合,结合GenomyxLRTMDNA差异显示系统及GenomyxSCTM荧光图像... 详细信息

目的:应用荧光标记的信使核糖核酸(messengerribonucleicacid,mRNA)差异显示技术分离子宫肌瘤及正常子宫肌组织相关的差异基因片段。方法:用4种锚定引物和3种随机引物,共12种组合,结合GenomyxLRTMDNA差异显示系统及GenomyxSCTM荧光图像扫描系统,以及配套的FluoroDDandHI-EROGLYPHmRNAProfile试剂盒,采用荧光标记的mRNA差异显示技术进行子宫肌瘤及正常子宫肌组织相关差异基因片段的分离。结果:从子宫肌瘤及正常子宫肌组织间分离出相关的差异基因片段27条,差异片段中主要表现为条带密度的强弱差别。结论:子宫肌瘤的产生可能与某些基因表达的差异有关,而差异基因的序列及功能有待进一步研究。

关键词：子宫肌瘤荧光标记信使核糖核酸差异显示技术基因诊断