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驯鹿结核病的抽样调查

畜牧与饲料科学 2005年第5期26卷 51-52页

作者：赵洪喜李云章岳峰于江江段跃强内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

驯鹿结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病。据报道,驯鹿间的结核病存在已久,呈地方性流行发病,可持续数年。结核病潜伏期长短不一,主要通过呼吸道、消化道传染,初期症状不明显,逐步加重,其主要临床症状为肺部听诊有摩擦音、食... 详细信息

驯鹿结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病。据报道,驯鹿间的结核病存在已久,呈地方性流行发病,可持续数年。结核病潜伏期长短不一,主要通过呼吸道、消化道传染,初期症状不明显,逐步加重,其主要临床症状为肺部听诊有摩擦音、食欲减退、咳嗽、贫血、下痢、消瘦、淋巴结肿大、容易疲劳等。野生驯鹿行踪不定,捕捉困难,故不能及时发现和治疗,使得其生存受到严重威胁。2004年8月30日—9月1日,笔者在内蒙古自治区呼伦贝尔市根河的达玛拉猎民点利用牛型提纯结核菌素(PPD)对部分野生驯鹿进行了结核病调查。1材料与方法1.1实验动物:内蒙古呼伦贝尔市根河市鄂温克乡猎民点驯鹿58只。1.2实验器械及药品:牛型提纯结

关键词：结核病驯鹿抽样调查慢性传染病结核分枝杆菌临床症状淋巴结肿大地方性可持续潜伏期

1种布鲁菌抗体检测试纸条快速检测方法的建立

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中国兽医学报 2021年第7期41卷 1310-1314,1347页

作者：吴志强刘少蓉白民俊段晓珮高强黄素文段跃强内蒙古华希生物科技有限公司内蒙古呼和浩特010111 北京美联泰科生物技术有限公司北京100176

以光滑型布鲁菌脂多糖(smooth lipopolysaccharide,sLPS)抗原为检测抗原,葡萄球菌蛋白A(SPA)为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁菌抗体。通过敏感性和特异性试验检测试纸条性能。结果显示,试纸条最低可检测血清浓度... 详细信息

以光滑型布鲁菌脂多糖(smooth lipopolysaccharide,sLPS)抗原为检测抗原,葡萄球菌蛋白A(SPA)为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁菌抗体。通过敏感性和特异性试验检测试纸条性能。结果显示,试纸条最低可检测血清浓度为0.1 IU/mL。试纸条批内和批间可重复性为100%,不与其他非相关疾病感染血清反应。试纸条法与试管凝集试验对牛、羊血清检测的符合率分别为95.4%和97.2%。结果表明,该试纸条在保证检测特异性的基础上,提高了对样品检测的敏感性,具有敏感、特异、简便、快速的特点,更加适合在基层推广使用。

关键词：布鲁菌 sLPS 胶体金免疫层析

重组金黄色葡萄球菌肠毒素B蛋白可溶性微针制备及免疫效果研究

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免疫学杂志 2018年第5期34卷 449-455页

作者：刘思齐杨国忠李明辉段跃强牛燕王希良杨英高云华杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 中国科学院理化技术研究所光化学转换和功能材料重点实验室北京100190 军事科学院军事医学研究院病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第三〇二医院肝胆外科中心北京100039

目的建立重组金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)蛋白的可溶性微针体外检测方法及体内免疫效果评价。方法通过动态光散射(DLS)检测蛋白粒径、BCA法检测单片微针的蛋白浓度、活体成像实验检测微针皮内注射后蛋白在体内的停留时间,通过DRIZE评分... 详细信息

目的建立重组金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)蛋白的可溶性微针体外检测方法及体内免疫效果评价。方法通过动态光散射(DLS)检测蛋白粒径、BCA法检测单片微针的蛋白浓度、活体成像实验检测微针皮内注射后蛋白在体内的停留时间,通过DRIZE评分评价微针注射后的皮肤情况,通过动物实验评价重组SEB蛋白可溶性微针的免疫原性及免疫保护效果。结果DLS分析显示SEB蛋白可溶性微针负载的重组SEB蛋白粒径与重组SEB蛋白溶液中的SEB蛋白粒径无明显差别,单片微针中重组SEB蛋白含量为(13.2±1.4)μg,活体成像实验显示相对于肌肉注射,重组SEB蛋白可溶性微针皮内给药后荧光蛋白在体内的停留时间延长,动物实验显示13.0μg的重组SEB蛋白可溶性微针即能引发免疫反应,并且在2LD50SEB攻毒剂量下能够产生很好保护效果。结论重组SEB蛋白可溶性微针能够刺激小鼠机体产生较好的免疫原性及免疫保护效果,为发展疫苗新型免疫途径提供了新策略。

关键词：重组金黄色葡萄球菌肠毒素B蛋白可溶性微针免疫效果评价

减毒猪流感病毒与灭活猪流感病毒的体液免疫及细胞免疫效果的观察

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中国人兽共患病学报 2012年第1期28卷 62-65页

作者：段跃强李晓楠曹东顾贵波罗小莉杨鹏辉邢丽王希良李培锋内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 辽宁省动物疫病预防控制中心沈阳110164 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的研究减毒A/California/07/2009ca流感病毒及A/California/07/2009灭活流感病毒之间的体液免疫及细胞免疫效果的差异。方法蔗糖密度梯度离心纯化减毒A/California/07/2009ca流感病毒经滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,以灭活病毒肌肉注射组... 详细信息

目的研究减毒A/California/07/2009ca流感病毒及A/California/07/2009灭活流感病毒之间的体液免疫及细胞免疫效果的差异。方法蔗糖密度梯度离心纯化减毒A/California/07/2009ca流感病毒经滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,以灭活病毒肌肉注射组为对照。应用ELISA的方法检测小鼠血清中IgG1、IgG2a及脾淋巴细胞上清液中的IL-6、IL-4和IFN-γ的效价。结果通过对小鼠血清中IgG1、IgG2a及脾淋巴细胞上清液中的IL-6、IL-4及IFN-γ细胞因子的检测,结果显示,灭活流感病毒的IgG1/IgG2a高于减毒流感病毒,同时灭活病毒产生的IL-6和IL-4高于减毒病毒,但IFN-γ低于减毒病毒。结论 A/California/07/2009灭活病毒能够刺激小鼠机体产生较好的体液免疫,但细胞免疫较差,而减毒A/California/07/2009ca流感病毒能够较好激发小鼠体内的体液免疫和细胞免疫反应。通过这些数据我们可以初步断定,A/California/07/2009ca减毒病毒具有较全面的免疫效果,这为流感喷鼻疫苗的研制提供了理论数据参考。

关键词： A/California/07/2009ca病毒细胞因子免疫效应

牛呼吸道疾病病原BVDV、IBRV、BPIV3和牛支原体的分离鉴定

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当代畜禽养殖业 2022年第5期 12-16页

作者：吴志强石悦萌寇曌婷王鑫黄素文段跃强内蒙古华希生物科技有限公司内蒙古呼和浩特010111

2021年12月,内蒙古、山西某肉牛场暴发呼吸道疾病。为了确诊病原,无菌采集发病牛血液、鼻拭子接种于MDBK细胞和Hayflick液体培养基进行病毒和细菌的分离鉴定,同时对分离培养物进行PCR鉴定。将分离毒株负染制样,在透射电镜下观察病毒形态... 详细信息

2021年12月,内蒙古、山西某肉牛场暴发呼吸道疾病。为了确诊病原,无菌采集发病牛血液、鼻拭子接种于MDBK细胞和Hayflick液体培养基进行病毒和细菌的分离鉴定,同时对分离培养物进行PCR鉴定。将分离毒株负染制样,在透射电镜下观察病毒形态;并对疑似支原体菌落进行吉姆萨染色、Dienes染色,观察菌体形态。根据病毒和细菌分离结果初步鉴定为多种病原混合感染所引起。从PCR检测以及电镜观察、染色结果可以得出,引起这次牛呼吸道疾病综合征的病原为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感病毒型(BPIV3)和牛支原体(Mycoplasma bovis)。

关键词：呼吸道疾病综合征牛病毒性腹泻病毒牛传染性鼻气管炎病毒牛副流感病毒3型牛支原体

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表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

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免疫学杂志 2019年第5期35卷 444-450页

作者：董锁花王立朋程晋霞杨晓岚孙芳段跃强王希良包金风杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院中国人民解放军66400部队医院普通外科军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室解放军总医院第五医学中心

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗... 详细信息

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA,与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu-muCTLA4。通过血凝试验、EID_(50)、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(MTS)细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果。结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为2~9～2^(10),且能够在鸡胚中稳定传代;EID_(50)为10^(-8)EID_(50)/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体,4天达到高峰值。MTS结果显示,rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力,呈现剂量依赖性。动物实验表明,重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积,提高动物存活率并延长存活时间。结论表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路。

关键词：溶瘤病毒免疫检查点抑制剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4

PS1基因突变敲入小鼠B免疫记忆细胞功能变化

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微生物学免疫学进展 2010年第1期38卷 14-17页

作者：贾卫红段跃强李晓楠罗德炎李志奎王希良第四军医大学西京医院呼吸科西安710032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室北京100071

探讨PS1基因突变敲入小鼠B免疫记忆细胞功能变化。OVA免疫PS1基因突变敲入小鼠,通过ELISA抗体检测观察B细胞免疫记忆功能;分离小鼠脾淋巴细胞,检测脾淋巴细胞增殖实验、B细胞表面抗原表达情况。痘苗病毒免疫正常和基因突变敲入小鼠两次... 详细信息

探讨PS1基因突变敲入小鼠B免疫记忆细胞功能变化。OVA免疫PS1基因突变敲入小鼠,通过ELISA抗体检测观察B细胞免疫记忆功能;分离小鼠脾淋巴细胞,检测脾淋巴细胞增殖实验、B细胞表面抗原表达情况。痘苗病毒免疫正常和基因突变敲入小鼠两次,在免疫后的一年进行痘病毒腹腔攻毒实验,观察PS1基因突变敲入小鼠存活情况。通过分离中枢和外周淋巴细胞进行体外功能检测表明,PS1基因突变敲入小鼠细胞增殖功能明显降低(P<0.0001);B记忆细胞表面蛋白表达有差异(P=0.045);痘苗攻毒实验结果表明,PS1基因突变敲入小鼠死亡率明显增高(P<0.0001)。研究结果表明,PS1基因在调控B记忆细胞功能方面发挥重要作用,但是通过调控T细胞功能而发挥间接还是直接针对B细胞发挥调控作用,还需要进一步研究结果确认。

关键词： PS1基因 B细胞免疫记忆的维持

重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫效力评价

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中国预防兽医学报 2023年第4期45卷 429-433页

作者：赵晓军王美玲段跃强谭美玲石悦萌陈千林郭庆勇内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010110 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 内蒙古华希生物科技有限公司内蒙古呼和浩特010110

为探究重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫保护效力,本研究构建了含产气荚膜梭菌α毒素基因的重组质粒pVL1393-CPA,并通过BD BaculoGoldTM转染试剂盒转染Sf9细胞后,经噬斑纯化获得单克隆重组病毒,将其感染High 5细胞进行表达,... 详细信息

为探究重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫保护效力,本研究构建了含产气荚膜梭菌α毒素基因的重组质粒pVL1393-CPA,并通过BD BaculoGoldTM转染试剂盒转染Sf9细胞后,经噬斑纯化获得单克隆重组病毒,将其感染High 5细胞进行表达,表达的重组蛋白经SDS-PAGE和western blot检测,结果显示均获得了45 ku的目的蛋白,即为重组α毒素。将重组α毒素用0.1%甲醛溶液灭活脱毒后与ISA 206 VG佐剂乳化制备亚单位疫苗(抗原含量为20μg/mL),以40μg/只肌肉注射体质量1.5 kg~2.0 kg的家兔,同时设PBS对照组,注射后连续观察7 d,结果显示实验兔临床观察无异常,该疫苗对家兔的安全性良好。随后以20μg/只肌肉注射家兔,免疫21 d后以相同剂量加强免疫一次,同时设佐剂对照组和α毒素对照组,首免21 d、二免14 d时采血分离血清,采用ELISA方法检测免疫兔血清IgG抗体效价,同时进行二免血清小鼠体内毒素中和试验以及家兔攻毒免疫保护试验,以评价该疫苗对家兔的免疫保护效力。结果显示,疫苗免疫组家兔血清IgG抗体效价比佐剂对照组和毒素对照组均极显著增高(P<0.001),二免血清对A型产气荚膜梭菌毒素小鼠体内的中和效价为32,疫苗免疫组家兔攻毒后均健活,攻毒保护率达100%,佐剂对照组和毒素对照组家兔攻毒后死亡率则为100%。上述结果表明制备的重组产气荚膜梭菌α毒素疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫保护效力,本研究为开发其他各型梭菌亚单位疫苗提供了重要借鉴。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素疫苗中和效价攻毒保护

串珠素小干扰RNA对结直肠癌细胞增殖的影响

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解放军医学院学报 2014年第6期35卷 617-619,622页

作者：刘洪金赵忠鹏付艳杨鹏辉段跃强门丽赵晖杜楠王希良解放军总医院第一附属医院肿瘤二科北京100048 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的评估串珠素小干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞增殖的影响。方法体外培养HCT15和HT29结直肠癌细胞,将构建好的串珠素siRNA载体转染培养细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,qRT-PCR法检测串珠素mRNA表达,Western blot法检测串珠素蛋白表达,MT... 详细信息

目的评估串珠素小干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞增殖的影响。方法体外培养HCT15和HT29结直肠癌细胞,将构建好的串珠素siRNA载体转染培养细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,qRT-PCR法检测串珠素mRNA表达,Western blot法检测串珠素蛋白表达,MTS法检测串珠素siRNA对肿瘤细胞增殖的影响。结果串珠素siRNA转染肿瘤细胞48 h后,肿瘤细胞串珠素mRNA、蛋白水平均出现降低(P<0.05)。串珠素siRNA对肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01)。结论串珠素siRNA对结直肠癌肿瘤细胞增殖具有显著的抑制效果。

关键词：结直肠癌 HCT15 HT29 串珠素 siRNA