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新型水包油佐剂SP01的安全性评价

中国生物制品学杂志 2014年第7期27卷 885-889页

作者：姜佳琪于姝邢丽段跃强孟和宝力高牛燕王希良额尔敦内蒙古医科大学基础医学院免疫学教研室内蒙古呼和浩特010021 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第253医院免疫中心内蒙古呼和浩特010021

目的通过动物实验评价新型水包油佐剂SP01的安全性。方法通过昆明小鼠安全药理试验、昆明小鼠急性毒性试验、Hartley豚鼠过敏反应试验、溶血性试验、日本大白兔局部刺激性试验、SD大鼠长期毒性试验及BALB/c小鼠致突变、致畸、致瘤试验,... 详细信息

目的通过动物实验评价新型水包油佐剂SP01的安全性。方法通过昆明小鼠安全药理试验、昆明小鼠急性毒性试验、Hartley豚鼠过敏反应试验、溶血性试验、日本大白兔局部刺激性试验、SD大鼠长期毒性试验及BALB/c小鼠致突变、致畸、致瘤试验,对水包油佐剂SP01的安全性进行全面评价。结果水包油佐剂SP01对昆明小鼠的自主活动无明显影响;急性毒性试验中可观察到水包油佐剂SP01组昆明小鼠给药后无死亡,体重明显增加,且各组织器官无病理变化;水包油佐剂SP01注射豚鼠未见任何过敏反应及症状;溶血性试验结果显示,水包油佐剂SP01在体外对兔红细胞无溶血作用,不引起红细胞凝聚;将水包油佐剂SP01经日本大白兔耳缘静脉注射连续刺激5 d后,佐剂组与氯化钠注射液组家兔耳缘静脉给药部位肉眼观察均无明显变化,病理切片显微镜观察均未见炎性浸润、血管周围组织出血及坏死等刺激现象;将水包油佐剂SP01经肌肉连续注射大鼠1个月,佐剂组大鼠体重明显增加,精神状态、食欲、睡眠情况与氯化钠注射液组无明显差异,停药后连续观察3个月,大鼠精神状态、食欲、睡眠情况均良好;将水包油佐剂SP01连续经BALB/c小鼠腿部肌肉注射14 d后,其肌肉组织病理切片显示,与氯化钠注射液组小鼠的肌肉组织无明显差异。结论水包油佐剂SP01对实验动物无急性毒性、过敏反应、局部性刺激、长期毒性及致突变、致畸、致瘤作用,是安全、可应用的油类佐剂,本研究为该系列水包油佐剂的临床应用提供了实验依据。

关键词：水包油佐剂动物实验安全性评价

EV71型vP1蛋白表达、纯化及免疫原性的初步评价

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免疫学杂志 2010年第3期26卷 187-190,196页

作者：李晓楠赵忠鹏段跃强赵晓燕王希良李培锋内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达新肠道病毒EV71 vP1蛋白(EV71vP1),并对EV71 vP1蛋白的免疫原性进行初步评价。方法利用RT-PCR技术获得EV71 vP1基因,将基因序列克隆到载体pFastBac HTA,通过转座反应,与Bacmid DNA重组,重组后转... 详细信息

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达新肠道病毒EV71 vP1蛋白(EV71vP1),并对EV71 vP1蛋白的免疫原性进行初步评价。方法利用RT-PCR技术获得EV71 vP1基因,将基因序列克隆到载体pFastBac HTA,通过转座反应,与Bacmid DNA重组,重组后转染Sf9昆虫细胞。采用透射电镜观察法、SDS-PAGE、Western-blot方法对vP1蛋白进行验证,利用ELISA、微量中和抗体方法对蛋白的免疫原性进行初步评价。结果 EV71 vP1蛋白相对分子量约为33KD,表达量约10mg/L;ELISA抗体效价为1∶900;中和抗体效价1∶800。结论利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功的表达了EV71 vP1蛋白,并对其免疫原性做了初步评价,为今后EV71 vP1亚单位疫苗的研究提供参考。

关键词： EV71 vP1蛋白 Bac—to—Bac表达系统中和抗体实验免疫原性

以病毒样颗粒为载体的小儿肾母细胞瘤新型疫苗的研制

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中华普通外科杂志 2008年第6期23卷 457-459页

作者：王政段跃强罗德炎王希良刘洲禄中国人民解放军总医院小儿外科北京100853 军事医学科学院微生物流行病学研究所免疫室

目的对小儿肾母细胞瘤以病毒样颗粒为载体的新型疫苗进行初步研究，为该肿瘤的治疗以及替代手术后放疗和化疗提供新的切入点。方法采用基因重组技术分别克隆编码小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A＊2402、HLA-A＊2402x，将其融合到乙型肝炎... 详细信息

目的对小儿肾母细胞瘤以病毒样颗粒为载体的新型疫苗进行初步研究，为该肿瘤的治疗以及替代手术后放疗和化疗提供新的切入点。方法采用基因重组技术分别克隆编码小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A＊2402、HLA-A＊2402x，将其融合到乙型肝炎核蛋白基因片段上，运用棒状杆菌表达系统对融合蛋白进行表达。结果细胞病变显示病毒重组，SDS-PAGE显示目的蛋白的表达，电镜下可观察到目的蛋白。结论小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A＊2402、HLA-A＊2402x融合到乙型肝炎核蛋白基因片段上可以产生融合病毒样颗粒，该融合蛋白的制备将为小儿肾母细胞瘤的免疫治疗提供新的思路。

关键词：肾母细胞瘤病毒融合蛋白质类疫苗,DNA

减毒流感病毒A/California/07/2009ca疫苗候选株在雪貂上的保护性研究

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中国免疫学杂志 2011年第S1期27卷 1167-1170页

作者：段跃强李晓楠曹东魏澍杨鹏辉邢丽王希良李培锋内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 辽宁省动物疫病预防控制中心沈阳110164 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室北京100071

目的:评价减毒A/California/07/2009ca流感病毒在雪貂上的减毒性及免疫保护性。方法:减毒A/California/07/2009ca流感病毒和BJ501病毒滴鼻免疫雪貂。应用TCID50的方法检测雪貂不同时间点的各个器官的病毒载量。结果:减毒A/California/07... 详细信息

目的:评价减毒A/California/07/2009ca流感病毒在雪貂上的减毒性及免疫保护性。方法:减毒A/California/07/2009ca流感病毒和BJ501病毒滴鼻免疫雪貂。应用TCID50的方法检测雪貂不同时间点的各个器官的病毒载量。结果:减毒A/California/07/2009ca流感病毒初次免疫后雪貂的精神状态、死亡率、体重没有变化,一免4天后雪貂鼻腔内无病毒复制,A/California/07/2009ca流感病毒二免14天免疫BJ501病毒,BJ501病毒在鼻腔、肺中的毒力(TCID50)显著降低。结论:实验证明减毒A/California/07/2009ca病毒在雪貂上无致病性,是减毒的流感病毒株。通过雪貂免疫保护性实验证明,减毒A/California/07/2009ca病毒具有一定的免疫保护效果,这些实验结论的获得为今后流感减毒喷鼻疫苗的研制提供了有力的数据支持。

关键词： A/California/07/2009ca病毒雪貂 TCID50

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乙型流感病毒单克隆抗体的制备与评价

免疫学杂志 2012年第12期28卷 1077-1080页

作者：张培瑞段跃强张德玺张绍庚李志伟王希良杨鹏辉中国人民解放军第三○二医院肝胆外科北京100039 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京阿斯可来生物工程有限公司 101500

目的制备抗乙型流感单克隆抗体,为建立特异、灵敏、简便的乙型流感病毒快速检测方法奠定基础。方法应用鸡胚接种法、ELISA方法、免疫扩散法、血凝抑制法筛选能稳定分泌抗乙型流感病毒单抗的杂交瘤细胞,并对分泌的单抗的安全性,有效性、... 详细信息

目的制备抗乙型流感单克隆抗体,为建立特异、灵敏、简便的乙型流感病毒快速检测方法奠定基础。方法应用鸡胚接种法、ELISA方法、免疫扩散法、血凝抑制法筛选能稳定分泌抗乙型流感病毒单抗的杂交瘤细胞,并对分泌的单抗的安全性,有效性、抗体亚型,特异性及灵敏性进行了全面评价。结果获得了3株能稳定分泌抗乙型流感病毒单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为3G11、4F9、8G6;制备的抗乙型流感病毒单克隆抗体无鼠源病毒污染;抗体亚型为IgG2a亚型,轻链均为κ链;对乙型流感病毒具有高度特异性,而与甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、呼吸道腺病毒等无交叉反应。结论制备的乙型流感病毒单克隆抗体具有特异性强、灵敏性高,为临床乙型流感的早期快速诊断及流行病调查奠定了实验基础。

关键词：流感乙型流感单克隆抗体

小鼠可溶性IL-5α受体在Bac-to-Bac系统中的表达及其鉴定

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 611-615页

作者：张悦鸣段跃强罗德炎姚惠娟王希良李志奎第四军医大学西京医院呼吸内科陕西西安710054 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学实验室北京100071

目的应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠可溶性IL-5α受体(Soluble IL-5 receptorα,sIL-5Rα)蛋白,并对其抗原性进行鉴定。方法应用Vector NTI AdvanceⅡ软件优化小鼠IL-5Rα基因胞外区密码子后合成序列,将sIL-5Rα克隆至pFastbac... 详细信息

目的应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠可溶性IL-5α受体(Soluble IL-5 receptorα,sIL-5Rα)蛋白,并对其抗原性进行鉴定。方法应用Vector NTI AdvanceⅡ软件优化小鼠IL-5Rα基因胞外区密码子后合成序列,将sIL-5Rα克隆至pFastbacI中,构建重组穿梭质粒pFastbacI-sIL-5Rα,转化感受态大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα,转染sf9细胞,通过异源基因重组获得杆状病毒,采用Reed-Muench法检测扩增后病毒滴度;将P3、P4代病毒以0.05 MOI感染sf9细胞,SDS-PAGE鉴定sIL-5Rα蛋白的表达,表达产物应用阳离子交换层析法进行纯化,并对纯化的sIL-5Rα蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果重组杆粒Bacmid-sIL-5Rα经PCR鉴定,证明构建正确;P3代重组杆状病毒的病毒滴度为1.7×107pfu/ml;表达及纯化的sIL-5Rα蛋白在相对分子质量约43 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠IL-5Rα多克隆抗体发生特异性反应。结论Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠可溶性IL-5Rα受体蛋白,为进一步研究其生物学功能及在哮喘模型动物中的治疗作用奠定了实验基础。

关键词：白介素-5 受体杆状病毒表达系统

绵羊肺炎支原体鹦鹉热衣原体二联灭活疫苗的免疫效力研究

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中国兽医科学 2021年第9期51卷 1155-1162页

作者：张静李敏高强杨茹刘少蓉张伟段跃强内蒙古华希生物科技有限公司内蒙古呼和浩特010111

为了评价本项目组自制的绵羊肺炎支原体鹦鹉热衣原体二联灭活疫苗的免疫效力,取制备的绵羊肺炎支原体SH-01株及鹦鹉热衣原体重组MOMP蛋白抗原等体积混合后与ISA201佐剂乳化制成灭活疫苗(至少含SH-01株2×10^(8)CCU/m L;重组MOMP蛋白0.3 ... 详细信息

为了评价本项目组自制的绵羊肺炎支原体鹦鹉热衣原体二联灭活疫苗的免疫效力,取制备的绵羊肺炎支原体SH-01株及鹦鹉热衣原体重组MOMP蛋白抗原等体积混合后与ISA201佐剂乳化制成灭活疫苗(至少含SH-01株2×10^(8)CCU/m L;重组MOMP蛋白0.3 mg/m L),在配种前15 d免疫健康母绵羊,免疫21 d后采血分离血清分别测定抗绵羊肺炎支原体和抗鹦鹉热衣原体的特异抗体效价;免疫45 d后用绵羊肺炎支原体SH-01株和鹦鹉热衣原体CG1株进行攻毒试验。结果显示,免疫后绵羊肺炎支原体血凝抗体效价高达1∶64,鹦鹉热衣原体ELISA抗体效价高达1∶4850;绵羊肺炎支原体和鹦鹉热衣原体强毒株攻毒后保护率均可达到100%,表明此绵羊肺炎支原体鹦鹉热衣原体二联灭活疫苗具有良好的免疫保护效果。

关键词：绵羊肺炎支原体鹦鹉热衣原体二联灭活疫苗免疫保护

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胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒

免疫学杂志 2012年第11期28卷 981-984页

作者：张绍庚段跃强张德玺张培瑞李志伟王希良杨鹏辉中国人民解放军第302医院肝胆外科北京100039 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京阿斯可来生物工程有限公司 101500

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒感染的方法。方法通过对乙型流感病毒核蛋白单克隆抗体进行胶体金标记,成功研制了乙型流感病毒免疫层析检测试纸条。结果该试纸条操作简单,肉眼于10～15 min内判定结果,... 详细信息

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒感染的方法。方法通过对乙型流感病毒核蛋白单克隆抗体进行胶体金标记,成功研制了乙型流感病毒免疫层析检测试纸条。结果该试纸条操作简单,肉眼于10～15 min内判定结果,对乙型流感病毒具有高度特异性,与甲型H1N1、H3N2亚型流感病毒等其他重要呼吸道病毒无交叉反应。试纸条在室温保存12个月、2～8℃保存18个月,其特异性和灵敏度无明显变化。对从内蒙自治区医院收集的流感样症状病人的702份鼻咽部分泌物进行检测,与美国Quidel公司同类产品的符合率为95%。结论建立的乙型流感病毒免疫层析检测方法具有简便、快速、特异、敏感和稳定等特点,对乙型流感病毒感染疾病的临床检测与早期诊断具有重要意义。

关键词：乙型流感病毒免疫层析试纸条单克隆抗体

DNA免疫激发针对肾母细胞瘤CTL效应初步研究

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 252-254,259页

作者：王政段跃强罗德炎王希良刘贵麟中国人民解放军总医院小儿外科北京100853 军事医学科学院微生物流行病学研究所免疫室北京100071

目的将鼠源肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的针对肾母细胞瘤CTL效应。方法人工合成WT1基因一段序列,含有HLA-A*2402锚定残基的9个氨基酸。构建重组真核表达质粒pC... 详细信息

目的将鼠源肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的针对肾母细胞瘤CTL效应。方法人工合成WT1基因一段序列,含有HLA-A*2402锚定残基的9个氨基酸。构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/WT1y。免疫Balb/c小鼠,通过ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8;将分离的脾淋巴细胞与小鼠肾母细胞瘤细胞共培养,检测其体外溶解组织相容性抗原型别一致的外源性靶细胞能力。结果构建的重组质粒经测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(P强溶解靶细胞的功能。结论WT1基因的DNA疫苗初步研究具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路。

关键词： WT1 小儿肾母细胞瘤 DNA疫苗