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建立修饰碱基共有序列引物扩增方法同步检测三种猪病毒

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建立修饰碱基共有序列引物扩增方法同步检测三种猪病毒

中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：于晓璐陈茹高小博薛春宜宋长绪邱杨段燕喻中山大学生命科学大学院广东出入境检验检疫局国家人口计生委科学技术研究所广东省农业科学院兽医研究所

引言猪的繁殖障碍问题是制约我国生猪产业蓬勃发展的重要因素,猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)是引起猪繁殖障碍疾病的重要病原。临床已发现2种甚至多种病毒混合感染的情况,常规多重PCR技术已应用于多种病...

引言猪的繁殖障碍问题是制约我国生猪产业蓬勃发展的重要因素,猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)是引起猪繁殖障碍疾病的重要病原。临床已发现2种甚至多种病毒混合感染的情况,常规多重PCR技术已应用于多种病原临床检测,但多重核酸扩增常带来检测灵敏度和特异性下降等问题。本研究旨在建立一种基于锁核酸修饰碱基共有序列引物的新型多重核酸扩增方

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我国股权代持法律问题研究

我国股权代持法律问题研究

作者：段燕红云南师范大学

学位级别：硕士

股权代持是指隐名股东和名义股东就股权的代持问题达成合意,隐名股东向目标公司履行实际出资的义务,但一般股东名册记载或工商登记以及对外行使股东权利的却是名义股东的一种行为。随着市场经济的发展和营商环境的持续优化,股权代持在... 详细信息

股权代持是指隐名股东和名义股东就股权的代持问题达成合意,隐名股东向目标公司履行实际出资的义务,但一般股东名册记载或工商登记以及对外行使股东权利的却是名义股东的一种行为。随着市场经济的发展和营商环境的持续优化,股权代持在公司运作中屡见不鲜,也引发了一系列纠纷,其在学术界和司法实践中均受到了普遍关注。学者们围绕股权代持的概念界定、效力和法律性质等多个方面展开了详细的研究,这为完善股权代持相关制度,推动股权代持法治化、规范化治理奠定了良好的基础。但就目前来看,股权代持的理论研究仍有待进一步加强,如在涉及到股权代持的性质时,存在固化且单一的考量;对于股权代持协议的效力问题上,侧重于讨论判断合同效力的具体标准,但对协议无效后的权益处理等相关问题关注不够。在法律规范方面,我国关于股权代持的规定不够完善,《公司法》尚未明确股权代持的概念、法律性质等基础问题,即使《公司法司法解释(三)》对其部分内容作出了规定,但整体上较为抽象、可操作性不强,无法满足解决复杂代持问题的现实需要。在实践中,股权代持的案件数量众多,由于股权代持法律规范的不足,处理部分问题时有的法院对司法解释的理解和适用也存在偏差,导致司法裁判不统一,甚至出现矛盾的判决,损害了司法的公信力。因此,股权代持法律问题的研究符合当下的时代需求,且对构建规范的市场经济体系起着至关重要的作用。本文将结合股权代持的理论基础,并通过分析梳理股权代持的立法和司法现状,找出我国股权代持面临的问题并分析其深层次的原因,在此基础上,提出针对性的解决建议,从而更好地规范股权代持行为,维护市场秩序,构建包容普惠的股权代持生态环境。本论文共分为四个章节。第一章主要介绍了股权代持内涵、法律关系及性质,为后文进一步的写作奠定了基础。第二章围绕股权代持的立法现状展开论述,详细地介绍了我国涉及股权代持的相关规定。第三章重点分析我国股权代持司法实践现状,围绕我国股权代持司法裁判现状、存在的问题及原因来论述,即在对大量的司法裁判案例整理分析的基础上,得出股权代持纠纷主要集中于股权代持效力判定、股东资格认定及其显名化和隐名股东排除强制执行三方面,立足于对这三方面的案件逐一进行分析梳理,剖析出股权代持在司法实践中所存在的问题,并深入挖掘出其背后存在对公序良俗适用范围的理解有待加强、法律规定不够完善、名义股东与隐名股东及第三人的利益冲突以及股权代持协议性质不明确等深层次原因。第四章则针对股权代持存在的问题提出相应的完善建议,即准确把握公序良俗的适用范围、完善相关法律法规、完善股权变动的规范模式以及明晰股权代持性质的建议,以此来更好地规范股权代持行为。

关键词：股权代持隐名股东名义股东股权信托

病毒性出血性败血症病毒RNA标准物质的研制

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中国兽医杂志 2018年第3期54卷 15-19页

作者：刘志玲陈茹朱道中吴晓薇林志雄田纯见罗琼段燕喻广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室广东广州510623

利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选... 详细信息

利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20℃~25℃(相对湿度20%~25%)7 d,2℃~8℃保存1个月及-20℃保存6个月的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为(6.625±0.149)×10~8copies/μL,可用作VHSV核酸检测的标准质控品。

关键词：病毒性出血性败血症实时定量RT-PCR 标准物质

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红色档案资源叙事化开发策略研究

红色档案资源叙事化开发策略研究

作者：段燕鸽郑州航空工业管理学院

学位级别：硕士

红色档案资源记载了中国共产党和军民英勇无畏、浴血奋战的历史,蕴含着党的初心使命,是党史教育的优质资源。叙事理论作为文学领域的重要研究方向,现已与多领域相结合开展研究并形成较成熟的理论体系,能够促进红色档案资源叙事化开发,... 详细信息

红色档案资源记载了中国共产党和军民英勇无畏、浴血奋战的历史,蕴含着党的初心使命,是党史教育的优质资源。叙事理论作为文学领域的重要研究方向,现已与多领域相结合开展研究并形成较成熟的理论体系,能够促进红色档案资源叙事化开发,使红色档案资源开发成果更加生动、鲜活、具有生命力,进而推进红色文化的传播。本文主要采用文献研究法、实地调研法与跨学科研究法开展研究。首先,明确了红色档案资源叙事化开发的相关概念和理论基础。其次,选取河南新县红色档案资源作为案例,并根据调研的资源概况分析出了红色档案资源开发存在着缺乏协作型开发团队、资源开发程度有限、开发成果形态单一的困境。再次,为打破红色档案资源开发困境,引入多个叙事理论并提出了红色档案资源叙事化开发。为了更加科学有效地开展红色档案资源叙事化开发,运用结构化理论从宏观视角明确了红色档案资源叙事化开发要素。最后,在红色档案资源叙事化开发要素指导下,以河南新县红色档案资源为例,理清了多元协同开发主体及其责权关系,通过资源数字化收集、资源知识化处理、资源本体构建和资源知识图谱构建四个路径实现了红色档案资源的关联可视化呈现,并在资源关联可视化基础上从以空间叙事打造生态农文旅带、以互动叙事设计游戏及文创产品、以跨媒介叙事打造红色故事世界、以数字叙事打造数字传播平台、以道德叙事发展红色教育五个方面分析了叙事化开发的具体行动。红色档案资源叙事化开发要素与策略的探讨为红色档案资源开发带来新范式,提供更加科学、合理和实用的红色档案资源开发理论和具体策略,继而推动我国红色档案资源潜在价值的转化与挖掘、红色文化的传承与弘扬,也可为后续相关红色资源的开发提供借鉴。

关键词：红色档案资源叙事理论结构化理论本体知识图谱

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

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动物医学进展 2016年第6期37卷 1-6页

作者：陈茹于晓璐高小博薛春宜宋长绪邱杨刘志玲王莹段燕喻广东出入境检验检疫局技术中心广东广州510623 广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室广东广州510623 中山大学生命科学大学院广东广州510275 国家卫生计生委科学技术研究所北京100081 广东省农业科学院动物卫生研究所广东广州510640

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球... 详细信息

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均<10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 xMAP液相芯片

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匹配变换和线性变换融合的水下图像增强

实验室研究与探索 2024年第7期43卷 23-27,182页

作者：段燕北程航南昌工学院实验实训中心南昌330108 南昌工学院教务处南昌330108

为了有效地改善水下图像的颜色和对比度,提出了匹配变换和线性变换融合的水下图像增强方法。对强度最大的通道图像进行对比度限制的自适应直方图均衡化,根据均衡化后的通道图像直方图,对另外两通道图像分别进行直方图匹配,最后得到颜色... 详细信息

为了有效地改善水下图像的颜色和对比度,提出了匹配变换和线性变换融合的水下图像增强方法。对强度最大的通道图像进行对比度限制的自适应直方图均衡化,根据均衡化后的通道图像直方图,对另外两通道图像分别进行直方图匹配,最后得到颜色校正的图像。在HSV颜色空间中,对颜色校正图像的明度分量进行自适应分段线性变换,得到对比度增强的图像。分别计算2张增强图像的对比度权重、显著性权重、亮度分布权重和饱和度权重,根据权重对2张增强图像进行多尺度金字塔加权融合,得到最后的增强图像。实验结果表明,该方法对水下图像增强后的视觉效果优于现有方法,对应的平均梯度、水下彩色图像质量评价(UCIQE)指标和水下图像质量(UIQM)指标比现有方法分别提高30.0%、7.29%和16.0%。

关键词：水下图像增强直方图匹配自适应分段线性变换金字塔加权融合

3种猪腹泻相关病原核酸液相芯片检测方法的建立

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中国口岸科学技术 2023年第5期5卷 60-65页

作者：刘志玲梅明珠吴晓薇段燕喻曾潇陈茹广州海关技术中心广州510623

为建立同步检测猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪Delta冠状病毒(porcine delta coronavirus,PDCoV)3种腹泻相关病原体的快速高通量检测方法,本研究利用Lumeinex技术原理,建立三重液相芯片方法。结果显示,该方法可准确检出TGEV、PEDV和PDCoV 3种猪腹泻病原,与猪轮状病毒、口蹄疫病毒、水疱性口炎病毒、非洲猪瘟病毒等常见猪病病原无交叉反应;三重液相芯片方法对TGEV、PEDV和PDCoV核酸的检测灵敏度分别为33.2 pg/μL、163 pg/μL和12.1 pg/μL。应用该方法与荧光RT-PCR方法对52份临床样品同时检测,结果符合率为100%。研究结果表明,所建立的三重液相芯片方法可准确检测TGEV、PEDV和PDCoV,具有良好的特异性和敏感性。

关键词：液相芯片猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪Delta冠状病毒(PDCoV)

利用类病毒脂质体抗原检测H5N1亚型禽流感病毒抗体ELISA方法的建立

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动物医学进展 2015年第1期36卷 5-10页

作者：杨倩朱道中薛春宜李晓明曹永长段燕喻王莹吴晓薇刘志玲中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室广东广州510006 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东广州510623

利用昆虫杆状病毒表达系统制备了H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白、类病毒脂质体和病毒样颗粒,分别作为包被抗原,建立了相应的检测H5N1亚型禽流感病毒抗体的ELISA方法。特异性试验、敏感性试验、重复性试验和稳定性试验结果表明,利用3种... 详细信息

利用昆虫杆状病毒表达系统制备了H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白、类病毒脂质体和病毒样颗粒,分别作为包被抗原,建立了相应的检测H5N1亚型禽流感病毒抗体的ELISA方法。特异性试验、敏感性试验、重复性试验和稳定性试验结果表明,利用3种抗原包被所建立的ELISA方法均具有良好的重复性和稳定性,批间和批内变异系数均小于10%,但单独表达的HA蛋白和类病毒脂质体特异性更好,而且类病毒脂质体有更高的免疫反应性,与灭活全病毒相比安全性更高,故在H5N1亚型AIV抗体水平检测方面更具有应用前景。

关键词：昆虫杆状病毒表达系统禽流感病毒类病毒脂质体抗体检测

病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备

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中国动物检疫 2018年第2期35卷 102-107页

作者：段燕喻陈茹吴晓薇朱道中林志雄田纯见刘志玲广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室广东广州510623

利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至... 详细信息

利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。

关键词：病毒性神经坏死病实时定量RT-PCR 标准物质