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补肾调经方、逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠组织蛋白酶-L mRNA的影响

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中国中西医结合杂志 2011年第1期31卷 80-84页

作者：段彦苍杜惠兰贺明宋翠淼河北医科大学中西医结合学院石家庄050091 河北医科大学生理教研室石家庄050017

目的探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L(cathepsin-L,Cat L)mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reac... 详细信息

目的探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L(cathepsin-L,Cat L)mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测给予5IU人绒毛促性腺激素(humanchorionic gonadotropin,HCG)0、4、8、12h后Cat L mRNA在各组小鼠卵巢的表达强度。结果注射HCG0、4、8、12h后,Cat L mRNA在促性腺激素预处理小鼠对照组卵巢的表达逐渐升高,Cat L mRNA的相对表达含量分别为:0.066±0.005、0.383±0.045、0.737±0.024、1.036±0.073,各时间点比较差异有统计学意义(P0.05);注射HCG12h后与对照组比较,补肾调经方组Cat LmRNA表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾调经方通过使Cat L mRNA表达增强而达到促排卵的作用,消遥丸通过使Cat L mRNA表达高峰提前达到促排卵的目的。

关键词：补肾调经方逍遥丸排卵组织蛋白酶-L 反转录聚合酶链式反应

针药结合对乳腺增生大鼠血清及乳腺VEGF、bFGF含量的影响

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中成药 2010年第7期32卷 1217-1219页

作者：段彦苍杜惠兰靳亚慈河北医科大学中西医结合学院河北石家庄050091

目的:观察针药结合治疗乳腺增生的疗效,并分析血清和乳腺中血管生成因子VEGF和bFGF的变化,揭示乳腺增生病从微血管生成方面的部分发病机理。方法:通过复制乳腺增生大鼠模型,采用针药结合与中药、针灸以及西药三苯氧胺(TAM)相比较的方法... 详细信息

目的:观察针药结合治疗乳腺增生的疗效,并分析血清和乳腺中血管生成因子VEGF和bFGF的变化,揭示乳腺增生病从微血管生成方面的部分发病机理。方法:通过复制乳腺增生大鼠模型,采用针药结合与中药、针灸以及西药三苯氧胺(TAM)相比较的方法观察疗效。放射免疫法测定血清生殖激素雌二醇(E2)、孕酮(P)和催乳素(PRL)的含量;酶联免疫法测定VEGF、bFGF含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清E2和PRL含量明显升高,P含量明显降低(P<0.01)。经治疗后的各组E2和PRL含量均降低,P含量升高,针药组最明显,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。与正常组相比,模型组大鼠血清VEGF和bFGF含量明显升高(P<0.01),经治疗后的各组含量都降低,针药组最明显(P<0.01)。结论:针药结合通过调整某些生殖激素水平,下调血清血管生成因子水平,改善内分泌,改善微循环,达到治疗乳腺增生之目的。针药结合的方法与单纯服用中药、单纯应用针灸以及TAM相比较,疗效显著。

关键词：针药结合乳腺增生血管生成 VEGF bFGF

补肾调经方对雄激素诱导无排卵大鼠血清生殖激素及子宫、卵巢性激素受体水平的影响

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北京中医药大学学报 2004年第4期27卷 24-27页

作者：杜惠兰段彦苍宋翠淼河北医科大学中西医结合妇产科教研室河北050091 河北医科大学基础课部生理教研室河北050091

目的　探讨补肾中药治疗无排卵性疾病的作用机理、作用环节和作用部位。方法　建立雄激素致无排卵大鼠模型 ,分为中药组、模型组 ,并设正常对照组 ,观察血清生殖激素、卵巢和子宫重量指数及其形态学变化 ,分析雌激素受体 (ER)、孕激素受... 详细信息

目的　探讨补肾中药治疗无排卵性疾病的作用机理、作用环节和作用部位。方法　建立雄激素致无排卵大鼠模型 ,分为中药组、模型组 ,并设正常对照组 ,观察血清生殖激素、卵巢和子宫重量指数及其形态学变化 ,分析雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)在卵巢和子宫的表达强度。结果　补肾中药可升高卵泡刺激素 (FSH)、黄体生成素 (LH)、雌二醇 (E2 )水平 ,降低催乳素 (PRL)水平 ,改善病理状态下的卵巢及子宫的形态结构 ,使卵巢和子宫ER、PR表达增强。结论　提示补肾中药可通过对垂体、卵巢和子宫的调节而促进卵泡和子宫发育。

关键词：补肾中药无排卵大鼠模型生殖激素雌激素受体孕激素受体

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用

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北京中医药大学学报 2021年第6期44卷 510-518页

作者：佟雪梁潇宿滋闫梦璇段彦苍河北中医学院中西医结合学院河北050091 河北中医学院基础医学院河北050091 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室

目的研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系。方法给6~8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清。将3~4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组... 详细信息

目的研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系。方法给6~8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清。将3~4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组灌胃蒸馏水,B组序贯灌胃补肾调经系列方(Ⅱ号方和Ⅲ号方),各灌胃12 d。第11天腹腔注射孕马血清促性腺激素(5 IU/只),48 h后剥离卵巢,取出卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养。将A组COCs分为空白对照组和抑制剂组(25μmol/L LY294002),B组分为补肾组(10%补肾调经Ⅲ号方含药血清)和补肾加抑制剂组(10%补肾调经Ⅲ号方含药血清+25μmol/L LY294002)。体外培养18 h后,在显微镜下统计各组第一极体排出量并计算排出率。收集COCs, RT-PCR法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3K、AKT、mTOR mRNA的表达,免疫荧光染色法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3K、AKT、mTOR、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达。结果第一极体排出率补肾组高于空白对照组(P0.05);与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05)。与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05)。结论补肾调经系列方可通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路、上调Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达的比值、抑制COCs凋亡从而促进小鼠卵母细胞成熟。

关键词：补肾调经系列方卵丘-卵母细胞复合体磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路小鼠大鼠

基于基因表达综合数据库对反复移植失败患者子宫内膜免疫细胞浸润模式的分析

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中华中医药杂志 2021年第4期36卷 1984-1988页

作者：梁潇段彦苍杜惠兰河北中医学院中西医结合学院石家庄050091 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心石家庄050091 河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室石家庄050091

目的:研究反复移植失败(RIF)患者子宫内膜局部免疫细胞的浸润模式,分析RIF患者可能的免疫学病因及其免疫调节机制。方法:从基因表达综合(GEO)数据库中下载正常女性及RIF患者子宫内膜的基因表达谱芯片数据集,通过CIBERSORT软件计算22种... 详细信息

目的:研究反复移植失败(RIF)患者子宫内膜局部免疫细胞的浸润模式,分析RIF患者可能的免疫学病因及其免疫调节机制。方法:从基因表达综合(GEO)数据库中下载正常女性及RIF患者子宫内膜的基因表达谱芯片数据集,通过CIBERSORT软件计算22种浸润性免疫细胞的相对比例,采用SPSS、R、perl软件比较两组之间免疫细胞相对比例的差异,并计算RIF患者子宫内膜组织中免疫细胞之间的相关系数。结果:下载基因表达谱芯片数据集GSE103465和GSE111974,共得到样本54例,包含正常女性的子宫内膜组织27例,RIF患者的子宫内膜组织27例。数据矫正后通过CIBERSORT软件得到22种浸润性免疫细胞的相对比例,采用P<0.05筛选样本,得到正常女性的子宫内膜组织2例,RIF患者的子宫内膜组织15例。RIF患者子宫内膜组织中浸润水平较高的免疫细胞包括:活化的自然杀伤细胞(NK)[(23.63±10.57)%]、M0型巨噬细胞[(15.44±19.16)%]、γδT细胞[(10.04±6.54)%]。构成比相关系数较大的免疫细胞包括:调节性T细胞(Tregs)与静息的树突状细胞(DCs)(r=0.95,P<0.05),M2型巨噬细胞与浆细胞(r=0.81,P<0.05),活化的CD_(4)^(+)记忆性T细胞与M0巨噬细胞(r=0.71,P<0.05),活化的NK细胞与单核细胞(r=0.69,P<0.05),M1型巨噬细胞与静息的树突状细胞(r=0.66,P<0.05),活化的NK细胞与M0型巨噬细胞(r=-0.67,P<0.05),M2型巨噬细胞与Tregs(r=-0.67,P<0.05),活化的NK细胞与静息的CD_(4)^(+)记忆性T细胞(r=-0.66,P<0.05)。与正常女性比较,RIF患者的子宫内膜组织中滤泡辅助性T细胞(Tfh)、静息状态DCs浸润程度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RIF患者的子宫内膜组织免疫细胞浸润模式与正常女性的相比具有一定的特异性,临床上可以此为基础研究RIF患者可能的发生机制及探索药物靶标。Tfh和静息状态DCs可能成为临床上免疫治疗的疗效预测指标。

关键词：反复移植失败免疫细胞浸润 GEO数据库子宫内膜滤泡辅助性T细胞树突细胞自然杀伤细胞巨噬细胞

补肾法对控制性超促排小鼠卵丘扩展分级及相关因子HAS2、TNFAIP6的影响

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北京中医药大学学报 2020年第1期43卷 35-42页

作者：梁潇佟雪杜惠兰段彦苍河北中医学院中西医结合学院河北050091 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室

目的研究补肾调经Ⅱ号方、Ⅲ号方序贯给药对小鼠卵丘卵母细胞复合物(COCs)卵丘扩展分级情况及卵丘扩展相关因子透明质酸合成酶2(HAS2)、肿瘤坏死因子α刺激因子-6(TNFAIP6)表达的影响。方法将120小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组。... 详细信息

目的研究补肾调经Ⅱ号方、Ⅲ号方序贯给药对小鼠卵丘卵母细胞复合物(COCs)卵丘扩展分级情况及卵丘扩展相关因子透明质酸合成酶2(HAS2)、肿瘤坏死因子α刺激因子-6(TNFAIP6)表达的影响。方法将120小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组。模型组、补肾组第1~9天腹腔注射醋酸丙氨瑞林(GnRHa),第9天同时注射血清促性腺激素(PMSG),48 h后注射绒毛膜促性腺激素(hCG),正常组注射等体积生理盐水;补肾组第1~9天灌胃补肾调经Ⅱ号方,第10~11天灌胃补肾调经Ⅲ号方,正常组与模型组灌胃等体积蒸馏水。注射生理盐水或hCG 6、9、12 h后在体式显微镜下取出卵丘卵母细胞复合物(COCs),观察卵丘扩展分级并计数,收集COCs,免疫荧光染色、实时荧光定量PCR检测卵丘扩展相关因子蛋白及mRNA的表达。结果与正常组相比,模型组的卵丘扩展分级情况及卵丘扩展相关因子的mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与正常组和模型组相比,补肾组的卵丘扩展分级呈现低级别扩展率降低、高级别扩展率升高的特点(P0.05);注射生理盐水或hCG 9、12 h,与正常组和模型组相比,补肾组HAS2 mRNA的表达水平升高(P<0.05);注射生理盐水或hCG6、9、12 h,补肾组TNFAIP6 mRNA的表达水平升高(P<0.05)。结论补肾调经Ⅱ号方、Ⅲ号方序贯给药可促进小鼠COCs的卵丘扩展,推测其可能的机制与上调卵丘扩展相关因子HAS2、TNFAIP6 mRNA的表达有关。

关键词：补肾调经方Ⅱ号方补肾调经Ⅲ号方卵丘卵母细胞复合物卵丘扩展透明质酸合成酶2 肿瘤坏死因子α刺激因子-6 小鼠

月经病虚寒证患者T细胞亚群与生殖激素的变化

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中国中医基础医学杂志 2013年第7期19卷 796-798页

作者：刘艳芹段彦苍杜惠兰河北医科大学中西医结合学院石家庄050091

目的:通过分析虚寒型月经病患者外周血T细胞亚群与生殖激素水平的变化及二者的相关关系,探讨妇科虚寒证的内分泌-免疫学发病机理。方法:分别采用放射免疫分析法和流式细胞技术检测虚寒型月经病患者、正常人各30例生殖激素与T细胞亚群的... 详细信息

目的:通过分析虚寒型月经病患者外周血T细胞亚群与生殖激素水平的变化及二者的相关关系,探讨妇科虚寒证的内分泌-免疫学发病机理。方法:分别采用放射免疫分析法和流式细胞技术检测虚寒型月经病患者、正常人各30例生殖激素与T细胞亚群的变化,分析其相关性。结果:虚寒组较正常组E2、T、LH、FSH、及Th2、Th2/Th1、Tc2、Tc1、Tc2/Tc1降低,Th1升高,均有统计学意义。Th2、Th2/Th1与E2呈正相关,Th1与E2呈负相关;Th2、Tc2、Th2/Th1与T呈正相关;Th1与FSH呈负相关。结论:月经病虚寒证患者生殖激素分泌减少,Th2、Tc2、Tc1细胞水平下降,Th1细胞水平上升,机体内分泌-免疫调节功能紊乱而发生月经病。

关键词：月经病虚寒证 T细胞亚群生殖激素

逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠卵巢COX-2 mRNA及其蛋白的影响

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逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠卵巢COX-2 mRNA及其蛋白的影响

愈肾合剂对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及Fas、Fas-L表达的影响

2016全国中西医结合妇产科研究进展学术研讨会暨2016年第一届江浙沪中西医结合妇产科高峰论坛

作者：段彦苍河北中医学院

目的排卵过程极其复杂,前列腺素(PG)在排卵中是必须的。研究发现缺乏PGE2受体EP2的小鼠存在卵丘扩张受损、低排卵率、不孕,提示PGE2参与卵丘膨胀和排卵过程。COX-2是合成PG的限速酶,在排卵前颗粒细胞中,COX-2主要由卵丘细胞和卵泡壁细...

目的排卵过程极其复杂,前列腺素(PG)在排卵中是必须的。研究发现缺乏PGE2受体EP2的小鼠存在卵丘扩张受损、低排卵率、不孕,提示PGE2参与卵丘膨胀和排卵过程。COX-2是合成PG的限速酶,在排卵前颗粒细胞中,COX-2主要由卵丘细胞和卵泡壁细胞合成,COX-2缺陷小鼠表现为卵丘膨胀受损和明显的低排卵率,是影响排卵的关键因素之一。临床上疏肝法治疗不孕症、月经不调等疾病疗效显著。逍遥丸为疏肝法的代表方剂,在妇科临床广泛应用于肝郁所致的上述疾病。本研究目的是探讨逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠卵巢排卵重要控制信号COX-2 mRNA及其蛋白的影响。方法选择体重16-1 8g未成年小鼠48只随机分为正常组、对照组、逍遥丸组超促排卵,试验第1、2、3天,疏肝组小鼠灌服逍遥丸高剂量以促进卵泡发育,正常组、对照组灌服蒸馏水,共3天;试验第3天8:00,对照组、疏肝组小鼠腹腔注射PMSG(5 IU/只),48h后腹腔注射hCG(5 IU/只),正常组在相同时间注射等剂量生理盐水;试验第4、5天,疏肝组小鼠灌服逍遥丸低剂量以诱发排卵,正常组、对照组灌服蒸馏水,共2天。各组小鼠均在注射hCG后0h、4h、8h、12h快速取卵巢保存备检。采用RT-PCR、免疫组化方法检测。结果与正常组比较,对照组各时间点COX-2 mRNA及其蛋白表达增强。与对照组比较,逍遥丸组小鼠卵巢COX-2 mRNA及其蛋白注射hCG后0 h表达增强(P<0.05),注射hCG后4 h表达下降(P<0.01),注射hCG后8、12h表达增强(P<0.01,P<0.05)。结论逍遥丸可上调排卵重要控制信号COX-2 mRNA及其蛋白的表达。本实验RT-PCR及免疫组化结果表明,正常组未成年小鼠未排卵,COX-2 mRNA及其蛋白表达很低,促性腺激素预处理小鼠能诱发排卵,在注射hCG后0、4、8 h卵巢COX-2 mRNA及其蛋白的表达逐渐增强,12h时COX-2 mRNA及其蛋白表达下降,提示COX-2在排卵过程中起重要作用。12h时COX-2 mRNA及其蛋白表达下降可能与超促排卵小鼠在注射hCG 12h左右开始排卵有关,在实验各时间点卵巢组织HE染色显微镜下观察,发现注射hCG后12h、16h部分成熟卵泡已经排到输卵管中,这可能是导致此时卵巢COX-2mRNA及其蛋白表达降低的原因,有待于进一步研究。促性腺激素预处理小鼠灌服逍遥丸后,0、4、8、12h卵巢COX-2 mRNA及其蛋白表达趋势与促性腺激素预处理小鼠一致,并且在注射hCG后0、8、12h COX-2 mRNA及其蛋白的表达均较对照组增强,提示逍遥丸可使排卵前COX-2 mRNA及其蛋白表达增强,其机理可能是放大了LH信号并使卵丘膨胀促进了排卵。其作用机制值得进一步研究。

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国老年学杂志 2006年第12期26卷 1643-1645页

作者：成秀梅常风云段彦苍张学红张雪静河北医科大学中西医结合学院河北石家庄050091

目的探讨愈肾合剂对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法诱发糖尿病肾病模型大鼠,每日灌喂愈肾合剂,8 w后检测肾脏细胞凋亡情况。结果愈肾合剂能够明显干预细胞周期G0/G1期和S期的进程,降低PI,抑制细胞的过度增殖。下调Fas及Fas-L表达,... 详细信息

目的探讨愈肾合剂对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法诱发糖尿病肾病模型大鼠,每日灌喂愈肾合剂,8 w后检测肾脏细胞凋亡情况。结果愈肾合剂能够明显干预细胞周期G0/G1期和S期的进程,降低PI,抑制细胞的过度增殖。下调Fas及Fas-L表达,减少肾脏细胞凋亡的数目。结论愈肾合剂能够有效的抑制肾脏细胞的凋亡。

关键词：愈肾合剂糖尿病肾病大鼠细胞凋亡