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朊蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达及与临床进展的关系

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第6期36卷 666-670页

作者：魏炜刘欣武月章王永萍石琦北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所头颈外科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 贵州中医药大学基础医学院贵阳550025

目的分析朊蛋白在乳头状甲状腺癌组织中的表达及与相关临床因素的关系。方法分别收集60例经病理确诊的乳头状甲状腺癌以及60例甲状腺良性病变患者标本,应用免疫组织化学方法、免疫印迹方法及免疫荧光方法对患者样本中的朊蛋白进行检测... 详细信息

目的分析朊蛋白在乳头状甲状腺癌组织中的表达及与相关临床因素的关系。方法分别收集60例经病理确诊的乳头状甲状腺癌以及60例甲状腺良性病变患者标本,应用免疫组织化学方法、免疫印迹方法及免疫荧光方法对患者样本中的朊蛋白进行检测并进行分析,同时对朊蛋白的表达与患者相关临床因素的关系之间进行统计学分析。结果免疫组织化学检测显示乳头状甲状腺癌组织朊蛋白阳性高于甲状腺良性病变组织(χ^(2)=36.310、P<0.001)、免疫印迹以及免疫荧光的方法均显示朊蛋白在乳头状甲状腺癌组织中的表达明显高于甲状腺良性病变患者[免疫印迹:(1.288±0.153)U/L比(0.667±0.036)U/L,t=6.855,P<0.01;免疫荧光:[绿色荧光,20X:(12.911±1.947)U/L比(36.322±3.797)U/L,t=9.502,P<0.001;红色荧光,20X:(6.259±2.062)U/L比(28.229±2.611)U/L,t=11.437,P<0.001];并且朊蛋白在临床III级乳头状甲状腺癌组织中的表达明显高于I期及II期的患者,并均具有统计学差异(I期比III期:χ^(2)=6.301、P<0.05;II期比III期:χ^(2)=5.683、P<0.05);与是否具有淋巴转移无相关性,与患者的年龄、性别均无统计学差异。结论朊蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达增加,并且与肿瘤的临床分期具有相关性,该研究为朊蛋白作为乳头状甲状腺癌靶向诊断及治疗的分子标记奠定了实验基础。

关键词：朊蛋白乳头状甲状腺癌免疫组化免疫印迹

CXCL1/CXCR2在羊瘙痒因子感染小鼠脑组织中的分布特征研究

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疾病监测 2023年第3期38卷 344-350页

作者：周煜嘉陈嘉武月章石琦董小平陈操武瑞黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163316 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 中国科学院武汉病毒研究所/生物安全大科学研究中心湖北武汉430071 佳木斯大学黑龙江佳木斯154007

目的探究朊病毒感染小鼠脑组织CXC趋化因子配体1(CXCL1)与CXC趋化因子受体2(CXCR2)的分布特征。方法通过免疫组织化学、免疫组织荧光双染实验明确羊瘙痒因子139A及ME7感染终末期小鼠脑组织中CXCL1/CXCR2的分布特征,确定CXCL1/CXCR2的靶... 详细信息

目的探究朊病毒感染小鼠脑组织CXC趋化因子配体1(CXCL1)与CXC趋化因子受体2(CXCR2)的分布特征。方法通过免疫组织化学、免疫组织荧光双染实验明确羊瘙痒因子139A及ME7感染终末期小鼠脑组织中CXCL1/CXCR2的分布特征,确定CXCL1/CXCR2的靶细胞及与羊瘙痒因子样朊蛋白(PrPSc)沉积的关系。结果通过全脑区免疫组化染色发现,CXCL1/CXCR2在羊瘙痒因子139A及ME7感染终末期小鼠脑组织中的含量明显升高,主要分布在海马、皮层、丘脑、小脑及延髓5个脑区。CXCL1与小胶质细胞和神经元细胞存在共定位,而CXCR2与神经元细胞存在共定位。在羊瘙痒因子139A及ME7感染终末期小鼠脑组织中CXCL1、CXCR2和PrPSc三者存在明显共定位。结论CXCL1/CXCR2分布于朊病毒感染小鼠脑组织中朊病毒病理特征集中的脑区。

关键词：羊瘙痒因子朊病毒 CXC趋化因子配体1 CXC趋化因子受体2

朊蛋白体外扩增技术对不同种属朊病毒检测敏感性分析

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病毒学报 2023年第2期39卷 372-383页

作者：刘楚眸杨微肖康武月章陈冬冬董小平石琦中国疾病预防控制中心、病毒病预防控制所、传染病预防控制国家重点实验室北京102206

朊蛋白体外扩增技术包括实时震动诱导蛋白扩增(Real-time quaking-induced conversion,RT-QuIC)技术及蛋白错误折叠循环扩增(Protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术。为了分析朊蛋白体外扩增技术与传统的蛋白免疫印迹技术... 详细信息

朊蛋白体外扩增技术包括实时震动诱导蛋白扩增(Real-time quaking-induced conversion,RT-QuIC)技术及蛋白错误折叠循环扩增(Protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术。为了分析朊蛋白体外扩增技术与传统的蛋白免疫印迹技术对于朊病毒毒株检测敏感性的差异,应用此三种方法对朊病毒小鼠适应株139A、ME7和S15以及仓鼠适应株263K毒株进行了检测及对比分析。结果显示,应用RT-QuIC方法以及三轮PMCA扩增方法,均可检测到10-9稀释度139A小鼠脑匀浆中的朊病毒,比Western blot方法敏感度提高了106倍;应用RT-QuIC方法以及三轮PMCA扩增方法,分别可检测到10-7稀释度及10-8稀释度ME7小鼠脑匀浆中的朊病毒,分别比Western blot方法敏感度提高了104倍及105倍;应用RT-QuIC方法以及三轮PMCA扩增方法,分别可检测到10-8稀释度及10-9稀释度S15小鼠脑匀浆中的朊病毒,分别比Western blot方法敏感度提高了105倍及106倍;应用RT-QuIC方法可检测到10-9稀释度263K仓鼠脑匀浆中的朊病毒,比Western Blot方法敏感度提高了106倍,但三轮PMCA扩增方法可检测到10-3稀释度的263K小鼠脑匀浆中的朊病毒,与Western Blot方法比较敏感度没有明显提高。本实验为优化朊蛋白体外扩增技术的检测条件、检测敏感性及该技术的临床应用提供了实验数据参考。

关键词：朊病毒实时震动诱导蛋白扩增蛋白错误折叠循环扩增蛋白免疫印迹

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喉鳞状细胞癌组织中朊蛋白分子特征的分析

疾病监测 2022年第2期37卷 176-179页

作者：魏炜武月章陈冬冬宋韫韬徐国辉石琦北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所头颈外科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的观察喉鳞状细胞癌组织中朊蛋白的分子特征。方法采用免疫印迹法检测朊蛋白的带型特征,采用免疫组织化学法检测朊蛋白在组织细胞中的分布特征,采用基因测序分析的方法检测分析朊蛋白基因特征。结果免疫印迹的方法显示,喉鳞状细胞... 详细信息

目的观察喉鳞状细胞癌组织中朊蛋白的分子特征。方法采用免疫印迹法检测朊蛋白的带型特征,采用免疫组织化学法检测朊蛋白在组织细胞中的分布特征,采用基因测序分析的方法检测分析朊蛋白基因特征。结果免疫印迹的方法显示,喉鳞状细胞癌组织中,朊蛋白呈现3种糖基化形式;免疫组织化学法显示,朊蛋白在喉鳞状细胞癌中可出现阳性表达,主要分布在细胞膜及胞浆。随着肿瘤恶性程度的增加,朊蛋白的表达呈逐渐增加的趋势;基因测序显示,纳入样本朊蛋白均无突变,朊蛋白129位密码子均为甲硫氨酸纯合子,219位均为谷氨酸纯合子。结论喉鳞状细胞癌组织中,朊蛋白特征有别于中枢神经系统,如脑组织;其表达与肿瘤的恶性程度相关,有可能成为早期分析诊断喉鳞状细胞的分子靶标。

关键词：喉鳞状细胞癌朊蛋白分子特征

BCG免疫小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关基因表达的相关性研究

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BCG免疫小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关基因表达的相关性研究

作者：武月章吉林农业大学

学位级别：硕士

目的:接种卡介苗(Bacillus Calmettee-Guerin,BCG)是人类预防结核病(tuberculosis,TB)的主要手段之一。BCG是世界上唯一一种得到许可的结核病疫苗,然而近些年,它的多种弊端正逐渐显现。因此,人们需要深入了解BCG诱导机体产生免疫效应的... 详细信息

目的:接种卡介苗(Bacillus Calmettee-Guerin,BCG)是人类预防结核病(tuberculosis,TB)的主要手段之一。BCG是世界上唯一一种得到许可的结核病疫苗,然而近些年,它的多种弊端正逐渐显现。因此,人们需要深入了解BCG诱导机体产生免疫效应的机制,这样才能在此基础上研发更为有效的新型结核疫苗。本研究在以BCG免疫小鼠后,观察不同时间点的血清特异性抗体效价、脾脏免疫相关细胞因子表达以及脾脏免疫相关受体分布情况,分析其变化规律及相关性,为探究BCG的免疫机制及研发新型结核疫苗奠定基础。方法:利用BCG免疫小鼠,采集不同时间点的外周血和脾脏样本。应用间接ELISA方法检测血清中特异性抗体效价,实时荧光定量PCR方法检测脾脏中免疫相关细胞因子IL-2、IL-10、IL-4、IL-12、IFN-γ的表达水平,直接免疫荧光组化方法检测脾脏中免疫相关受体TLR2、TLR9的表达分布情况。结果:BCG免疫小鼠后,成功检测到血清中特异性抗体水平随着时间延续呈现一种缓慢上升-明显上升-缓慢上升-明显上升的趋势,而总体呈上升趋势,证实BCG可以诱导机体产生体液免疫。成功检测到脾脏中IL-2、IL-10、IL-4、IL-12、IFN-γ的表达量发生不同程度的变化,IL-2,INF-γ两种Th1型细胞因子的表达水平在接种后期显著升高,而Th1型细胞因子IL-4的表达水平却发生明显下降。脾脏中的TLR2受体在BCG免疫小鼠的前期阶段表达显著上升,在免疫的后期则下降为普通表达水平。TLR9受体则在BCG免疫小鼠的中期阶段表达显著上升,而在免疫的后期会下降为普通表达水平。结论:在BCG诱导机体产生免疫效应的过程中,机体内的血清特异性抗体、免疫相关细胞因子和免疫相关受体之间存在着相互联系。在免疫的后期,机体中Th1型细胞因子和体液免疫效应呈正相关,而一些Th2型细胞因子则与体液免疫效应呈负相关性。

关键词：卡介苗免疫特异性抗体免疫相关细胞因子免疫相关受体相关性

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青藏高原岩羊朊蛋白基因及氨基酸序列分析

疾病监测 2022年第2期37卷 167-171页

作者：伍晶星高利萍陈冬冬肖康武月章董小平石琦中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的分析岩羊的朊蛋白基因(PRNP)序列,评估岩羊对羊瘙痒病的易感性。方法参照GenBank上已经发表的绵羊PRNP序列设计引物,对岩羊的PRNP序列进行扩增,基因测序后与GenBank上的11种哺乳动物的PRNP序列比对和分析。结果测序结果显示岩羊P... 详细信息

目的分析岩羊的朊蛋白基因(PRNP)序列,评估岩羊对羊瘙痒病的易感性。方法参照GenBank上已经发表的绵羊PRNP序列设计引物,对岩羊的PRNP序列进行扩增,基因测序后与GenBank上的11种哺乳动物的PRNP序列比对和分析。结果测序结果显示岩羊PRNP由771个核苷酸构成,编码256个氨基酸。序列分析结果显示4只岩羊朊蛋白(PrP)氨基酸序列完全同源,并且与野生型绵羊PrP氨基酸序列完全一致。此外,岩羊PrP氨基酸序列与山羊(99.2%)、驯鹿(98.0%)、牛(97.7%)也具有较高的同源性。结论本次测定的4只岩羊可能和野生型绵羊一样对羊瘙痒病中度易感,岩羊和绵羊种群之间存在相互传播羊瘙痒病的可能。

关键词：岩羊羊瘙痒病朊蛋白基因多态性序列分析

喉鳞状细胞癌中α-烯醇化酶蛋白的表达及其与人乳头瘤病毒感染的关系

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中华实验和临床病毒学杂志 2021年第6期35卷 626-630页

作者：魏炜武月章宋韫韬徐国辉石琦北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所头颈外科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室100042 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的观察α-烯醇化酶(α-enolase)蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达、临床意义以及与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法采用免疫组织化学方法检测98例病例α-enolase蛋白的表达并分析其与临床分期之间的关系;采用PCR... 详细信息

目的观察α-烯醇化酶(α-enolase)蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达、临床意义以及与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法采用免疫组织化学方法检测98例病例α-enolase蛋白的表达并分析其与临床分期之间的关系;采用PCR、测序以及免疫组织化学方法检测病例标本中HPV16/18的表达情况,并分析其与α-enolase蛋白表达之间的关系。结果98例病例中免疫组织化学结果显示α-enolase蛋白的总阳性率为89.8%,HPV基因及蛋白检测总阳性率达到40.8%,纳入病例随着临床Ⅰ期到Ⅳ期的逐渐发展以及HPV16/18的感染,α-enolase蛋白的定位出现由胞质和胞核表达逐渐转移至更多的仅在胞质表达的倾向。结论α-enolase蛋白的表达随着病例临床病程的进展以及HPV16/18的感染,呈现了逐渐向胞质定位的趋势,α-enolase蛋白的检测可为喉癌的早期诊断和治疗提供实验室数据的参考。

关键词：喉癌 α-烯醇化酶人乳头瘤病毒免疫组织化学

SMB-S15细胞中朊病毒PMCA方法的建立及对白藜芦醇抗朊病毒作用的评价

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病毒学报 2019年第2期35卷 183-188页

作者：周冬花王晶肖康武月章石琦董小平中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增(Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA)是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞... 详细信息

朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增(Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA)是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞中朊病毒的PMCA体系,并探索PMCA技术在评价白藜芦醇抗朊病毒作用的意义,本研究以朊病毒感染细胞系SMB-S15细胞匀浆为种子,健康小鼠脑组织匀浆为底物,建立PMCA技术平台。将不同浓度的白藜芦醇导入PMCA体系,通过Western Blot方法检测PMCA产物中异常朊蛋白(PrPSc)的生成和变化。结果显示:SMB-S15细胞中PrPSc可以在建立的PMCA体系有效地复制。新生成的PrPSc分子的糖基化特征与原始细胞中的PrPSc不同,其双糖基化分子比例明显增加。同时也有别于羊瘙痒因子139A和ME7感染小鼠脑组织中的PrPSc分子。加入白藜芦醇后,PrPSc在PMCA体系中的复制明显被抑制,呈现出剂量依赖效应,其EC50约为4.616μM。这些结果表明:SMB-S15细胞中的PrPSc可以通过PMCA大量扩增,建立的PMCA技术可有效地反映白藜芦醇对PrPSc在体外复制的抑制作用。

关键词：朊病毒病朊病毒 SMB-S15细胞蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA) 异常朊蛋白(PrPSc) 白藜芦醇

BCG免疫对小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关细胞因子表达的影响

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吉林农业大学学报 2015年第6期37卷 726-730页

作者：武月章安潇潇张文慧张林波吉林农业大学生命科学学院长春130118

为深入了解卡介苗诱导机体产生免疫效应的分子机制,对卡介苗(Bacillus calmettee-guerin,BCG)免疫后小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关细胞因子表达变化及相关性进行了研究。利用BCG免疫C57BL/6小鼠,采集不同时间点的外周血和脾脏样本... 详细信息

为深入了解卡介苗诱导机体产生免疫效应的分子机制,对卡介苗(Bacillus calmettee-guerin,BCG)免疫后小鼠血清特异性抗体与脾脏免疫相关细胞因子表达变化及相关性进行了研究。利用BCG免疫C57BL/6小鼠,采集不同时间点的外周血和脾脏样本。应用间接ELISA方法检测血清中特异性抗体效价,实时荧光定量PCR方法检测脾脏中免疫相关细胞因子表达水平。结果表明:在BCG接种的后期,血清中抗体效价呈极显著的上升趋势(P<0.01);脾脏中Th1型细胞因子白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)、γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的表达水平与对照组相比呈显著性上升(P<0.05),但Th2型细胞因子白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达水平则明显下降(P<0.05)。这说明BCG免疫后,机体会同时产生细胞免疫应答和体液免疫应答,但免疫后期Th1型细胞因子与体液免疫效应呈正相关,某些Th2型细胞因子则与体液免疫效应呈负相关性。

关键词：卡介苗免疫特异性抗体 Th1型细胞因子 Th2型细胞因子相关性