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Interleukin-1 receptor antagonist eye drops promoting high-risk corneal allografts survival in rats

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Chinese Medical Journal 2004年第5期117卷 711-716页

作者：接英张文华潘志强武宇影王颖 Institute of Ophthalmology

Background Immune rejection is the main reason of grafts failure after corneal transplantation. This study was to determine whether interlerkin-1 receptor antagonist (IL-1ra) eye drops could prolong corneal allografts survival in high-risk corneal orthotopic allotransplantation in rat model and to study the effect of IL-1ra on the expression of CD 1-positive cells in the grafts Methods For all experiments, the Sprague-Dawley (SD) rats' corneas were transplanted into Wistar rats' eyes High-risk transplants included those that had been sutured into Wistar recipient beds with corneal neovascularization induced by placement of three interrupted sutures in the host cornea 7 days earlier All the animals were divided, in a masked fashion, into three treatment groups and one control group Each treatment group received IL-1ra eye drops of different concentrations (1 mg/ml, 3 mg/ml, or 5 mg/ml, respectively) four times a day for 30 days The control group received 0 9% normal saline (NS) eye drops in the same way as the treatment groups All allografts were evaluated for signs of rejection from the first day after surgery Ten days later, corneal specimens were processed to examine the expression of CD 1-positive cells and histopathological changes Results The survival time of the transplants was 5 80±0 79, 5 89±1 05, 6 78±0 83, and 9 00±2 36 days respectively in the control or three treatment groups Compared with the control group, 1 mg/ml IL-1ra eye drop did not prolong the survival time of the allografts ( t =0 210, P >0 05) However, 3 mg/ml and 5 mg/ml IL-1ra eye drop did prolong the survival time of the grafts ( t ≥2.627, P <0 05), with the latter showing more obvious effect Immunohistochemical examinations showed a significant decrease in inflammatory cell and CD 1-positive cell infiltration in IL-1ra treated groups compared with the control group Conclusions IL-1ra can promote corneal allograft surv

关键词： interleukin-1 receptor antagonist · corneal transplantation · allograft rejection · CD 1

培养角膜缘干细胞羊膜移植治疗碱烧伤动物的实验研究

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中华眼科杂志 2000年第1期36卷 32-35,I003页

作者：潘志强张文华武宇影北京市眼科研究所 100005

目的　观察培养生长于羊膜的角膜缘干细胞移植治疗角膜缘碱烧伤的效果。方法　将兔角膜缘干细胞原代培养后接种于羊膜 ,对新西兰大白兔角膜缘碱烧伤动物模型行角膜缘干细胞羊膜移植术 ,并对治疗后的角膜进行临床及病理学检查。结果　体... 详细信息

目的　观察培养生长于羊膜的角膜缘干细胞移植治疗角膜缘碱烧伤的效果。方法　将兔角膜缘干细胞原代培养后接种于羊膜 ,对新西兰大白兔角膜缘碱烧伤动物模型行角膜缘干细胞羊膜移植术 ,并对治疗后的角膜进行临床及病理学检查。结果　体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上继续增殖、分化为密集的角膜上皮细胞层 ;角膜缘干细胞移植术后兔角膜缘轻度充血、角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少。组织病理学染色证实 :角膜缘及其周边上皮细胞为多层结构 ,角膜新生血管消失及基质中炎性细胞浸润减轻。结论　角膜缘干细胞羊膜移植术治疗角膜碱烧伤可恢复其角膜上皮结构的完整性 ,减少角膜新生血管的形成 ,维持角膜缘的细胞屏障功能 ,为进一步行角膜移植创造条件。

关键词：角膜缘干细胞羊膜移植碱烧伤

Transplantation of corneal stem cells cultured on amniotic membrane for corneal burn: experimental and clinical study

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Chinese Medical Journal 2002年第5期115卷 767-769,158页

作者：潘志强张文华武宇影孙葆忱北京市眼科研究所北京100730

OBJECTIVE: To investigate the proliferation and differentiation of cultured corneal stem cells and determine the effect of corneal stem cells cultured on amniotic membranes on the limbal area for treating corneal burns. METHODS: The proliferation and differentiation of corneal stem cells in vitro had been examined using colony-forming efficiency and immunohistochemistry. The stem cells had been cultured on amniotic membranes and transplanted to the limbal area for treating corneal burns. RESULTS: Corneal stem cells had a high proliferation capacity in primary and first passage, cytokeratin 3 was not expressed in primary culture but partly in first passage. The stem cells could proliferate to form cell layer on an amniotic membrane. When transplanted, stem cells could survive on limbus. After transplantation, ocular inflammation resolved, the cornea re-epithelialized, the stromal opacity reduced, the superficial neovascularity was lessened and the conjunctival fornix re-established. CONCLUSIONS: Ocular surface conditions could be improved by allograft of corneal stem cells cultured on amniotic membranes.

关键词： Alkalies Amnion Animals Burns, Chemical Cell Culture Techniques Cell Differentiation Cell Division Cell Transplantation Cells, Cultured Epithelium, Corneal Eye Burns Graft Survival Humans Keratin Limbus Corneae Rabbits Stem Cells Treatment Outcome

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的研究

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中华眼科杂志 2005年第2期41卷 150-155页

作者：接英潘志强陈钰张文华徐亮武宇影彭虹首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科研究所 100730 北京同仁眼库解放军总医院免疫学教研室军事医学科学院五所

目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位(SEB)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用机制。方法实验供体为30只Fisher344和4只Lewis大鼠,受体为64只Lewis大鼠。将实验受体大鼠按随机数字表法随机分为4个治疗组和1个对照组,每组1... 详细信息

目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位(SEB)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用机制。方法实验供体为30只Fisher344和4只Lewis大鼠,受体为64只Lewis大鼠。将实验受体大鼠按随机数字表法随机分为4个治疗组和1个对照组,每组12只;同时设4只Lewis大鼠行同种同体移植。治疗组术前分别用02ml不同浓度的SEB(25、50、75、100μg/kg)腹腔注射诱导免疫耐受。对照组用02ml生理盐水腹腔注射。缝线法诱导受体角膜新生血管,然后行穿透性角膜移植术,术后观察记录植片的存活状况并对受体全身免疫状态进行免疫组化染色,流式细胞分析和淋巴细胞增殖能力检测。结果对照组大鼠角膜植片的平均存活时间为(730±067)d,SEB治疗组(25、50、75、100μg/kg)植片存活时间分别为(643±127)d、(1070±250)d、(1250±141)d、(883±194)d。免疫组织化学染色和流式细胞检测显示SEB治疗组大鼠角膜植片中淋巴细胞的浸润以及外周免疫器官中淋巴细胞亚群百分数较对照组明显降低。此外,SEB治疗组中受体淋巴细胞对供体抗原刺激的反应性降低,外周血中白细胞介素(IL)2浓度降低而IL10浓度升高,其中以SEB75μg/kg组作用最明显。结论在一定剂量范围内,SEB可以诱导大鼠免疫耐受形成,减少局部和全身淋巴细胞数量。

关键词：超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B亚单位防治大鼠角膜移植免疫排斥反应

中药菊花决明散防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的研究

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中国中西医结合杂志 2010年第2期30卷 178-181页

作者：王颖马东丽接英潘志强徐健武宇影首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科学与视觉科学重点实验室北京100730

目的探讨中药菊花决明散对大鼠高危角膜移植排斥反应的抑制作用。方法角膜缝线法诱导受体角膜新生血管,行穿透性角膜移植,建立大鼠高危角膜移植排斥反应模型。术后治疗组采用每天菊花决明散方0.1g/2mL灌胃,对照组采用生理盐水2mL灌胃,... 详细信息

目的探讨中药菊花决明散对大鼠高危角膜移植排斥反应的抑制作用。方法角膜缝线法诱导受体角膜新生血管,行穿透性角膜移植,建立大鼠高危角膜移植排斥反应模型。术后治疗组采用每天菊花决明散方0.1g/2mL灌胃,对照组采用生理盐水2mL灌胃,观察植片存活状况;应用组织病理学、免疫荧光组织化学,流式细胞仪等方法对受体局部和全身免疫状态进行检测。结果治疗组大鼠角膜植片存活时间为(14.50±3.55)天,明显长于生理盐水组的(8.25±0.71)天(P<0.01);治疗组术后虹膜铺片Fas、FasL的表达低于对照组;术后14天外周血中CD4+CD2+5FOXP3+阳性细胞治疗组[(14.81±2.58)%]高于对照组[(5.11±3.92)%],差异有统计学意义(P<0.01);治疗组房水中IL-2浓度低于对照组而IL-10浓度高于对照组。结论菊花决明散方对高危角膜移植排斥反应模型大鼠术后免疫排斥反应具有一定抑制作用。

关键词：高危角膜移植免疫排斥菊花决明散方

自然杀伤T细胞结膜下注射防治大鼠角膜移植免疫排斥反应的初步研究

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眼科 2007年第3期16卷 175-178页

作者：刘颖接英潘志强武宇影首都医科大学附属北京同仁医院眼科中心北京市眼科研究所 100730

目的探讨自然杀伤T细胞（NKT）对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验性研究。研究对象8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体。方法无菌取Lewis大鼠脾脏中淋巴细胞，RPMI1640培养基体外培养三周后，流式细胞仪分选出... 详细信息

目的探讨自然杀伤T细胞（NKT）对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验性研究。研究对象8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体。方法无菌取Lewis大鼠脾脏中淋巴细胞，RPMI1640培养基体外培养三周后，流式细胞仪分选出NKT细胞（浓度5×10^4／ml）。取8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体行穿透性角膜移植术。将受体大鼠随机分为治疗组和对照组，每组各8只。治疗组在手术结束时结膜下注射0．1ml上述浓度的NKT细胞，对照组注射相同体积生理盐水。术后观察记录植片的存活情况，术后第10天，每组2只大鼠取材，行组织病理学、免疫组织化学和流式细胞仪检测。主要指标角膜植片平均存活时间，组织病理学及免疫组织化学染色检查淋巴细胞浸润情况。结果对照组角膜植片平均存活时间为（8．00±1．58）天，NKT细胞治疗组为（26．00±1．34）天。组织病理学检查可见对照组大鼠角膜植片重度水肿，角膜基质纤维板层排列紊乱，大量炎性细胞浸润，新生血管长入植片。而治疗组植片仅表现为轻度水肿，少量炎性细胞浸润。免疫组织化学染色可见对照组植片中大量CD4＋和CD8＋淋巴细胞浸润，治疗组中仅见少量CD4＋和CD8＋淋巴细胞浸润。流式细胞仪检查结果表明在治疗组脾脏中NKT细胞为（3．90±0．32）％，明显高于对照组（1．85±0．21）％；外周血中治疗组NKT细胞为（1．34±0．12）％，对照组为（3．59±0．23）％。结论NKT细胞结膜下注射可延长角膜移植片存活时间，为防治角膜移植免疫排斥反应提供新的思路。

关键词：自然杀伤T细胞角膜移植免疫耐受

基质金属蛋白酶抑制剂治疗碱烧伤后兔角膜融解的研究

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中华眼科杂志 2002年第9期38卷 539-542页

作者：刘海霞张文华潘志强武宇影首都医科大学北京同仁眼科中心 100730

目的　研究基质金属蛋白酶抑制剂 (GM 6 0 0 1)在治疗兔角膜碱烧伤后角膜融解中的作用。方法　将 2 8只兔随机分为A、B组 ,将浸有 2mol/L(16只 )及 1mol/L(12只 )氢氧化钠的滤纸片分别置于A、B组兔右眼角膜上制备角膜重和中度碱烧伤模... 详细信息

目的　研究基质金属蛋白酶抑制剂 (GM 6 0 0 1)在治疗兔角膜碱烧伤后角膜融解中的作用。方法　将 2 8只兔随机分为A、B组 ,将浸有 2mol/L(16只 )及 1mol/L(12只 )氢氧化钠的滤纸片分别置于A、B组兔右眼角膜上制备角膜重和中度碱烧伤模型 ;每组均设治疗和对照组 ,A、B治疗组术眼分别滴浓度为 4 0 0及 2 0 0mg/L的GM 6 0 0 1滴眼液 ,对照组滴药物基质液 ;均治疗 30d ,然后处死动物。观察其角膜融解及混浊等情况 ,并进行病理组织学检查。结果　A组 :对照组 8只兔眼角膜自伤后 (13± 5 )d开始全部发生融解 ,2只兔眼发生角膜穿孔 ;治疗组 ,仅有 2只兔眼烧伤后 (19± 4 )d发生角膜融解 ,无角膜穿孔 ;两组角膜融解发生率及角膜穿孔率比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。治疗组角膜融解开始的时间亦明显迟于对照组 (P <0 0 5 )。B组 :对照组 6只兔角膜自伤后 (14± 6 )d全部融解 ,1只兔眼角膜穿孔 ;治疗组 2只兔眼角膜自伤后 (19± 4 )d融解 ,无角膜穿孔 ;两组角膜融解发生率间比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;治疗组角膜混浊程度明显低于对照组 (P <0 0 1)。病理检查结果显示治疗组角膜胶原纤维破坏轻 ,炎性细胞浸润明显少于对照组。结论　GM 6 0 0 1可抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展 ,降低角?

关键词：角膜化学烧伤二肽类金属蛋白酶类组织抑制剂治疗

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多聚酶链反应快速检测衣原体

中国人兽共患病杂志 1994年第2期10卷 8-10页

作者：范俊张文华武宇影金秀英北京市眼科研究所

应用沙眼衣原体内源性质粒引物和鹦鹉热衣原体１６ｓｒＲＮＡ基因引物，对沙眼衣原体眼部感染和尿道感染进行快速检测。４９份临床诊断为沙眼的标本经ＰＣＲ检测，阳性３１份，阴性１８份；２８份临床诊断为非淋菌性尿道炎的标本，经Ｐ... 详细信息

应用沙眼衣原体内源性质粒引物和鹦鹉热衣原体１６ｓｒＲＮＡ基因引物，对沙眼衣原体眼部感染和尿道感染进行快速检测。４９份临床诊断为沙眼的标本经ＰＣＲ检测，阳性３１份，阴性１８份；２８份临床诊断为非淋菌性尿道炎的标本，经ＰＣＲ检测，阳性１１份；阴性１７份。以上结果分别与国际公认的免疫荧光试剂盒（ＩＦＡ）和酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）试剂盒对同一标本的检测结果进行了比较，表明多聚酶链反应技术远较ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ灵敏，是快速检测沙眼衣原体感染的有力手段。

关键词：沙眼衣原体聚合酶链反应检测

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母婴沙眼衣原体感染追踪观察

中华眼科杂志 1994年第5期30卷 357-359页

作者：张文华武宇影樊尚荣董悦曲萱北京市眼科研究所

用直接免疫荧光单克隆抗体法，对１３０例患外阴尖锐湿扰的孕产妇宫颈粘膜及１０２例婴幼儿眼结膜进行沙眼衣原体检测。结果发现，孕妇宫颈感染率为４．９２％，新生儿为８．５７％。产后２～６个月母婴衣原体感染率明显下降，分别为１... 详细信息

用直接免疫荧光单克隆抗体法，对１３０例患外阴尖锐湿扰的孕产妇宫颈粘膜及１０２例婴幼儿眼结膜进行沙眼衣原体检测。结果发现，孕妇宫颈感染率为４．９２％，新生儿为８．５７％。产后２～６个月母婴衣原体感染率明显下降，分别为１．４５％和０％。认为沙眼衣原体感染是现代围产医学面临的一个新课题，应予以重视。同时对预防母婴传播问题进行了探讨。

关键词：沙眼衣原体尖锐湿疣妊娠新生儿