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miR-200a与foxl3的靶向调控及其在牙鲆性腺中的作用分析

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miR-200a与foxl3的靶向调控及其在牙鲆性腺中的作用分析

作者：武宁宁上海海洋大学

学位级别：硕士

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水经济鱼类,在其生长过程中,雌性比雄性个体大且生长快,因此对其性别分化与性腺发育的研究十分重要。foxl3作(Forkhead box L3)为foxl2(Forkhead box L2)的旁系同源基因,被认为是鱼类所特有... 详细信息

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水经济鱼类,在其生长过程中,雌性比雄性个体大且生长快,因此对其性别分化与性腺发育的研究十分重要。foxl3作(Forkhead box L3)为foxl2(Forkhead box L2)的旁系同源基因,被认为是鱼类所特有的副本基因,且在性腺中高表达,在多种鱼类的发育、胚胎发育、代谢等过程中发挥重要的作用。foxl3在不同鱼类中的表达情况和发挥的功能可能并不完全一致,因此其在牙鲆性腺发育的功能有待研究。本研究通过PCR克隆和测序验证了foxl3 c DNA的正确性,并利用各种生物信息学手段对foxl3分子特征进行了分析。采用实时荧光定量PCR技术检测foxl3在牙鲆不同组织中的表达情况,并利用亚细胞定位技术和化学原位杂交技术观察了foxl3的表达定位。之后,分别将foxl3干扰连和foxl3过表达质粒分别转染至牙鲆性腺原代细胞中,通过定量PCR检测了foxl3、fbxo47(减数分裂重组蛋白a)和sycp3(F-box蛋白47)的表达变化。并且通过靶基因预测网址筛选出与foxl3具有靶向关系的miRNAs(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429),利用绿色荧光蛋白以及双荧光素酶技术对其进行靶向关系验证,并将预测得到的结合位点进行定点突变后进一步对其进行靶向关系的验证。本研究主要结果为:1、牙鲆foxl3基因的鉴定及分子特征通过PCR克隆和测序得到牙鲆foxl3的c DNA序列,共1089 bp,包括750 bp的CDS区和289 bp的3’UTR区。共编码429个氨基酸,其中脯氨酸的含量最高;蛋白质质量为28.70 kDa,理论等电点、亲水系数和理论等电点分别为8.77、-0.842和63.85。牙鲆Foxl3二级结构包含一个FH结构域;三级结构则为20.48%α螺旋、15.26%延伸链以及64.26%无规则卷曲,不均匀分布在蛋白多肽链上。比较多种生物Foxl3氨基酸序列发现,牙鲆Foxl3与其他鱼类相似度较高,其中与大菱鲆(Scophthalmus maximus)同源性最高,达到91.97%,与斑马鱼(Danio rerio)的同源性最低,仅为66.27%。通过氨基酸序列比对发现,与Foxl2相比,Foxl3在不同物种之间的差异更为显著,说明foxl3的进化速度比foxl2快。系统进化树分析发现牙鲆Foxl3首先与大菱鲆聚为一类,再与大黄鱼(Larimichthys crocea)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)、青鳉(Oryzias latipes)和斑马鱼这些硬骨鱼类聚集。而牙鲆的Foxl2也是首先与大菱鲆聚为一支,再与青鳉、尼罗罗非鱼、黄鳝(Monopterusalbus)、半滑舌鳎和斑马鱼聚为一支,二者分属不同的分支。2、foxl3在牙鲆雌雄性腺中的表达及功能分析实时荧光定量PCR结果显示:foxl3在牙鲆精巢、卵巢、肠、肌肉、鳃、胃、脑、肝和心脏中均有表达,但在卵巢中表达最高,显著高于其他组织;亚细胞定位结果表明,Foxl3融合蛋白在细胞核和细胞质中均有表达;化学原位杂交结果显示foxl3在牙鲆精卵巢中均有表达,在卵巢中,阳性信号主要在Ⅱ-Ⅳ期卵母细胞中表达,同样在间质细胞中也检测到其表达。在精巢中,foxl3则在精原细胞和精子中表达,此外在间质细胞中也有少量阳性信号被检测到。fbxo47和sycp3这两个与减数分裂相关的基因在性腺发育中具有重要的作用。为进一步探究foxl3在牙鲆性腺中的作用,通过荧光定量检测其与fbxo47和sycp3共表达情况,并通过RNAi和过表达实验分析了foxl3对二者基因表达的影响,结果显示:与foxl3在牙鲆卵巢中的高表达相反,fbxo47和sycp3则在精巢中的表达量高于卵巢。牙鲆精巢和卵巢原代细胞经siRNA干扰36 h后,foxl3的表达量显著降低,与减数分裂相关的基因fbxo47和sycp3在精卵巢中的表达量均显著被抑制。当过表达foxl3后,精卵巢中的fbxo47和sycp3的表达量显著增加,表明foxl3基因可能直接或间接调控fbxo47和sycp3基因的表达,进而对牙鲆的性腺发育产生影响。3、miR-200家族与foxl3作用关系的预测与鉴定为了证实foxl3与miR-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-141和miR-429)之间的作用关系,构建了双荧光素酶报告系统质粒和绿色荧光报告质粒。双荧光素酶报告实验结果表明:和NC组相比,foxl3野生型重组质粒与miR-200a mimics共转染组的荧光活性显著降低,而与miR-200b mimics、miR-141 mimics和miR-429mimics共转染组则无显著变化。定点突变后,foxl3突

关键词：牙鲆 foxl3 miR-200家族性腺发育

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S区税务局纳税服务管理研究

S区税务局纳税服务管理研究

作者：武宁宁哈尔滨工程大学

学位级别：硕士

纳税服务直接关系到国家的税收和合法权益和义务,本文以S区税务局纳税服务管理情况为研究对象,利用新公共管理理论、税收遵从理论、客户关系管理理论,从纳税服务需求和纳税服务满意度的角度出发,设计调查问卷,剖析目前S区税务局纳税服... 详细信息

纳税服务直接关系到国家的税收和合法权益和义务,本文以S区税务局纳税服务管理情况为研究对象,利用新公共管理理论、税收遵从理论、客户关系管理理论,从纳税服务需求和纳税服务满意度的角度出发,设计调查问卷,剖析目前S区税务局纳税服务存在的问题和内在成因,并构建纳税服务优化方案,并提出合理的纳税服务管理保障措施和建议。通过对纳税服务管理研究背景和研究意义进行阐述,对国内外关于纳税服务的相关研究现状进行梳理。然后对纳税服务的相关概念和理论基础进行界定,明确研究概念和主要理论。根据S区税务局当前纳税服务管理现状,对其机构设置、相关数据统计和纳税服务概况等情况进行说明,并对S区纳税服务管理存在的问题进行梳理,主要包括网上纳税服务平台利用率不高、税务人员服务水平有待提高、纳税服务体系不健全、纳税服务宣传及培训效果不佳等。然后,本文以调查目前S区纳税服务的现状为目的,面向纳税人和纳税服务人员下发800份调查问卷,从纳税服务管理需求和满意度两个方面对纳税服务的现状进行梳理,分析S区税务局当前纳税服务管理存在问题的成因。调研结果表明,纳税服务管理在纳税宣传、纳税培训和纳税流程方面均有待提升,且纳税人在纳税服务平台、纳税服务业务流程、纳税服务内容和纳税服务宣传等方面满意度尚可,但依然有待提升。目前造成S区纳税服务管理问题的成因主要包括网上纳税服务平台不够完善优化,纳税服务人员服务意识参差不齐,纳税服务与需求不够紧密,纳税宣传力度及透明度差。最后,本文对纳税服务管理优化框架进行设计,明确纳税机构、纳税人间的关系,确定整体优化思路。针对纳税服务平台、纳税业务流程、纳税服务内容、纳税服务宣传等方面提出优化方案和具体的实施策略。同时,从制度、组织、技术和宣传等方面对纳税服务管理的优化方案实施保障措施进行设计,保证纳税服务的效果。

关键词：纳税服务纳税服务平台纳税人需求服务体系优化

研发费用加计扣除政策与制造业企业升级 ——基于要素密集度的视角

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研发费用加计扣除政策与制造业企业升级 ——基于要素密集度的视角

作者：武宁宁厦门大学

学位级别：硕士

当前我国制造业急需转型升级,发展先进工业十分紧要,但是还要注重改造升级传统制造业,传统产业是我国工业体系的重要组成部分。“十四五”规划提倡实施更大力度的研发费用加计扣除等税收优惠政策,提高企业的研发积极性。2021年税务总局... 详细信息

当前我国制造业急需转型升级,发展先进工业十分紧要,但是还要注重改造升级传统制造业,传统产业是我国工业体系的重要组成部分。“十四五”规划提倡实施更大力度的研发费用加计扣除等税收优惠政策,提高企业的研发积极性。2021年税务总局加强了对制造业企业的加计扣除优惠力度,增强企业进行研究开发的动力,推动产业升级。产业升级离不开单个企业的升级。本文研究研发费用加计扣除政策对制造业企业升级的影响。该政策适用范围逐步扩大,相关研究多以所有适用群体、中小企业、高新技术企业作为研究对象,本文选择研究制造业企业。目前关于该政策的研究多聚焦于企业创新、企业绩效上,本文评估该政策对制造业企业升级的影响。结合制造业企业现状及近期加大了对制造业企业加计扣除比例,以制造业企业作为研究对象具有现实意义,研究该政策对企业升级的影响丰富了对政策效果的解读。本文以2008-2020年制造业上市企业作为样本数据,通过构建PSM-DID模型,评估政策效果。基于要素密集度将制造业企业分为两类,包括劳动密集型企业和非劳动密集型企业,接着从资产结构、技术结构、员工结构、企业绩效四个维度构建了不同类型企业以及制造业整体企业升级的衡量指标体系。研究发现,该政策促进不同类型企业资产结构、技术结构、员工结构、绩效水平的升级,且对制造业整体企业的影响也是显著正向的。接着本文基于异质性研究发现该政策对国有企业的效果更强,对于规模较小企业的绩效水平升级效果更强。最后,本文替换了企业升级的衡量方法,再次验证该政策对制造业企业升级的积极影响。

关键词：研发费用加计扣除制造业企业升级要素密集度

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用于工业模具制造的机器人高精度抓取仿真

计算机仿真 2023年第3期40卷 431-435页

作者：武宁宁李杨青岛理工大学机械与汽车工程学院山东临沂273400

在制造业转型升级中,工业模具智能制造机器人是智能制造生产线的重要组成部分。以智能制造中最具有代表性的设备即工业机器人为研究对象,提出新的机器人高精度抓取方法。标定相机,通过校正相机镜头获得工业模具智能制造机器人和目标点信... 详细信息

在制造业转型升级中,工业模具智能制造机器人是智能制造生产线的重要组成部分。以智能制造中最具有代表性的设备即工业机器人为研究对象,提出新的机器人高精度抓取方法。标定相机,通过校正相机镜头获得工业模具智能制造机器人和目标点信息,规划工业模具智能制造机器人的抓取轨迹,并确定抓取点位置。基于此,构建自适应协调控制器,结合抓取轨迹和目标抓取点,构建自适应协调控制模型,实现工业模具智能制造机器人的高精度抓取。仿真结果表明,对于机器人的不同关节点,提出方法的抓取精度均较高,且机器人末端抓取路径较短,验证了提出方法具有更高的效率。

关键词：工业模具智能制造机器人相机标定抓取轨迹自适应协调控制器高精度抓取

牙鲆foxl3的分子特征、亚细胞定位及组织表达

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中国水产科学 2023年第4期30卷 406-414页

作者：武宁宁刘翠汪惟超张俊玲上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海海洋大学水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心上海海洋大学国家海洋生物科学国际联合研究中心

为明确牙鲆(Paralichthys olivaceus)foxl3的结构和功能,通过PCR克隆和测序获得了牙鲆foxl3的编码区(coding sequence, CDS)和3’非编码区(untranslated region, UTR),共1089 bp,其中开放阅读框(open reanding frame,ORF) 750 bp,编码249个氨基酸。Foxl3二级结构包含一个FH (Forkhead)结构域;三级结构则包含20.48%的α螺旋、15.26%的延伸链和64.26%的无规则卷曲,不均匀分布在蛋白多肽链上。比较多种生物Foxl3氨基酸序列发现,牙鲆Foxl3与其他鱼类相似度较高,其中与大菱鲆(Scophthalmus maximus)同源性最高,达到91.97%,与斑马鱼(Danio rerio)的同源性最低,仅为66.27%。通过氨基酸序列比对发现,与Foxl2相比, Foxl3在不同物种之间的差异更为显著,说明foxl3的进化速度比foxl2快。亚细胞定位显示,Foxl3细胞融合蛋白在细胞核和细胞质中表达。实时荧光定量PCR检测结果显示foxl3在牙鲆卵巢中表达量最高,显著高于精巢等其他组织,暗示foxl3可能在牙鲆卵巢发育与分化中具有重要意义。

关键词：牙鲆 foxl3 分子特征亚细胞定位组织表达

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产后护理对孕妇产后乳汁分泌的促进作用分析

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第2期 126-129页

作者：武宁宁苏州市立医院本部江苏苏州215000

分析产后护理对孕妇产后乳汁分泌的促进作用。方法研讨对象一共80例在我院生产的孕妇,本次对象选择入组时间于2019年3月开始,于2022年8月截止,分组策略根据数字特点划分(患者录入系统随机标号),划分组别参照组(奇数=40)、试验组(偶数=... 详细信息

分析产后护理对孕妇产后乳汁分泌的促进作用。方法研讨对象一共80例在我院生产的孕妇,本次对象选择入组时间于2019年3月开始,于2022年8月截止,分组策略根据数字特点划分(患者录入系统随机标号),划分组别参照组(奇数=40)、试验组(偶数=40)。2组经对照分析研究(参照组=常规护理、试验组=产后护理)。围绕乳汁分泌量,并发症发生率,护理满意度,生活质量评分,不良情绪改善情况进行对照研究。结果 2组行不同护理后,于试验组对照分析后得知,乳汁分泌量统计中参照组较差,对照结果P<0.05,并发症统计中得知参照组发生率较高,对照结果P<0.05,护理满意度调研中参照组不高,对照结果P<0.05,生活质量评分统计中参照组分值不高,对照结果P<0.05,参照组患者的不良情绪改善情况较差,对照结果P<0.05。结论孕妇进行产后护理可以提高乳汁分泌量,减少并发症,提高护理满意度,改善患者生活质量和不良情绪,有利于产妇和胎儿健康发展。

关键词：产后护理孕妇产后乳汁分泌促进作用

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试论舞台音响系统设计

电声技术 2022年第2期46卷 1-3页

作者：武宁宁江汉大学音乐学院湖北武汉430000

现代舞台的表现力和感染力需要有音响的衬托才能发挥出最大的效益,因此,音响是现代舞台不可或缺的一部分。对于音响设备来说,调试是使其发挥效用的重要手段,也是专业舞台音响系统设计的核心部分。音响系统是多学科的综合性技术,与其他... 详细信息

现代舞台的表现力和感染力需要有音响的衬托才能发挥出最大的效益,因此,音响是现代舞台不可或缺的一部分。对于音响设备来说,调试是使其发挥效用的重要手段,也是专业舞台音响系统设计的核心部分。音响系统是多学科的综合性技术,与其他技术有所不同,其具有很强的艺术性。音响系统的调试是舞台音响工作的核心,不仅是音响技术的一种实践,更是一个艺术创作的过程。本文对此展开讨论,期望能帮助读者更好地理解舞台音响系统。

关键词：舞台音响设备调试音响设计音响系统应用

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Gating技术与汉语听觉词汇加工

心理学报 2003年第5期35卷 582-590页

作者：武宁宁舒华北京师范大学心理学院北京100875

尝试对Gating技术的实施和运用 ,对数据进行探索性分析。被试为 47名北京师范大学本科学生。实验中被试听到依次加长的单字词语音片段 ,每听完一个语音片段要尽快判断该语音是什么字音 ,并迅速写出想到的第一个符合该读音的汉字 ,同时... 详细信息

尝试对Gating技术的实施和运用 ,对数据进行探索性分析。被试为 47名北京师范大学本科学生。实验中被试听到依次加长的单字词语音片段 ,每听完一个语音片段要尽快判断该语音是什么字音 ,并迅速写出想到的第一个符合该读音的汉字 ,同时在七点量表上评定作出判断的确定性等级。结果显示 ,Gating技术作为探讨汉语听觉词汇加工的一条途径可以提供丰富的信息 ,它不仅能得到词汇的语音识别点 (IsolationPoint ,IP) ,也揭示出它与声调存在一定关系。对错误反应的分析还表明 :声调信息可以独立于音段信息而被识别 ;即时影响声调识别的因素不一定局限于区别性特征 ;听觉词汇识别受到听觉语言特有的方向性特点的影响 ,这种影响不仅体现在音段信息。

关键词： Gating 听觉词汇汉语声调

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句子语境中汉语词类歧义词的意义激活

心理学报 2002年第5期34卷 454-461页

作者：武宁宁舒华北京师范大学心理学院北京100875

以单字词为实验材料 ,采用跨通道启动真假字判断任务 ,在句子语境中考察汉语词类歧义词不同意义激活的特点。被试为 134名北京师范大学本科学生。实验时向被试听觉呈现含有歧义词的句子 ,且句子语境分别支持歧义词的主要或次要意义 ,以... 详细信息

以单字词为实验材料 ,采用跨通道启动真假字判断任务 ,在句子语境中考察汉语词类歧义词不同意义激活的特点。被试为 134名北京师范大学本科学生。实验时向被试听觉呈现含有歧义词的句子 ,且句子语境分别支持歧义词的主要或次要意义 ,以不同的ISI分别呈现与歧义词两种意义有关的视觉目标词。结果发现 ,当探测目标词在最短的ISI出现时 ,与语境支持的意义有关的目标词反应时较短 ,表明语境在歧义词加工早期促进合适意义的激活 ,同时限制不合适意义的激活。

关键词：汉语意义激活词类歧义词句子语境语言歧义