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基于PI3K/AKT信号通路探讨当归红芪超滤物对放射性内皮细胞损伤的防护作用及机制

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基于PI3K/AKT信号通路探讨当归红芪超滤物对放射性内皮细胞损伤的...

作者：武兵兵甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:探究当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,并分析其潜在的机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,采用不同辐射剂量（0、2、4、6、8和10Gy）X射线辐射HUVEC... 详细信息

目的:探究当归红芪超滤物对X射线引起人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,并分析其潜在的机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,采用不同辐射剂量（0、2、4、6、8和10Gy）X射线辐射HUVECs和不同浓度（0、50、100、200、400、600、800和1000μg/L）当归红芪超滤物（ultra-filtration extract from Angelica Sinensis Radix and Hedysari Radix,UFE-AH）干预HUVECs;采用CCK-8法筛选出最佳辐射剂量（6Gy）和最佳药物干预浓度（100、200和400μg/L）;采用6Gy X射线辐射制造HUVECs损伤模型。实验随机设为空白组、模型组（单纯辐射）、辐射+UFE-AH低、中、高剂量（100、200和400μg/L）组,采用X射线辐射各组HUVECs后,通过CCK-8法检测各组HUVECs细胞活力并观察UFE-AH对X射线辐射损伤HUVECs细胞活性的影响。采用微量法测定各组HUVECs一氧化氮（NO）含量,酶联免疫吸附（Elisa）法测定内皮素（endothelin,ET）和血管性血友病因子（Von willebrand factor,v WF）含量;透射电子显微镜观察各组HUVECs细胞超微结构形态改变。流式细胞仪技术检测各组HUVECs细胞凋亡率;HE和Hoechst染色检测各组细胞的凋亡形态;采用q RT-PCR技术检测各组HUVECs中PI3K/AKT/VEGF（磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（Protein kinase B,AKT）/血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF））通路及miRNA-34a基因表达水平的影响;Western Blot技术检测各组凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（BCL-2）,BCL-2相关X蛋白（BAX）和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）及PI3K、AKT、磷酸化AKT（p-AKT）和VEGF蛋白表达水平的影响。结果:1.2、4、6、8和10Gy的X射线分别辐射HUVECs后24h,与正常组比较,2、6和8Gy对细胞的活性影响不明显（P＞0.05）,4和10Gy两组细胞抑制率为负值,有显著的差异性（P＜0.01）。48和72h,大于2Gy时,X射线对HUVECs细胞抑制率基本呈剂量依赖性增加,其中4、6、8和10Gy均可抑制细胞生长（P＜0.05）,6、8和10Gy对细胞生长抑制作用更显著（P＜0.01）,且6、8和10Gy各组HUVECs细胞抑制率之间没有统计学意义（P＞0.05）。同时辐射后48h和72h两时间点细胞抑制率相比较,在48h时,X线对HUVECs细胞生长抑制较为适中,因此本实验选择6Gy作为辐射造模剂量。2.50、100、200、400、600、800和1000μg/L的UFE-AH作用HUVECs 24,48和72h后,100、200、400和600μg/L UFE-AH各组的细胞生存率明显增加,具有显著性差异（P＜0.05）,而100、200和400μg/L UFE-AH在24、48和72h促增殖作用更显著（P＜0.01）。因此,本研究选择100、200和400μg/L的UFE-AH进行实验,并在辐射前干预24h,辐射后干预48h。3.6Gy X射线照射HUVECs后48h,与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低（P＜0.01）;与模型组相比,药物干预组中,中和高剂量组的细胞生存率明显升高（P＜0.01）,低剂量组无显著差异（P＞0.05）。各组HUVECs细胞功能指标变化:与正常组相比,模型组NO含量减少,ET、v WF含量增加,具有差异性（P＜0.01）,透射电观察见细胞肿胀明显,细胞膜不连续,线粒体出现肿胀、嵴模糊,且数量减少,胞内出现较多空泡区,细胞内少量自噬溶酶体;与模型组相比,药物干预组中,低、中、高剂量组的细胞NO升高,ET、v WF含量减少,具有差异性（P＜0.05）,透射电镜显示细胞肿胀减轻,细胞膜完整,线粒体肿胀减轻,数量增加,细胞内可见适量自噬溶酶体,但仍未恢复正常。4.与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）,HE和Hoechst染色检测出凋亡细胞较多,PI3K、AKT和VEGF基因表达水平降低（P＜0.01）,miRNA-34a基因表达水平增加（P＜0.01）,促凋亡蛋白BAX、caspase-3表达增加,抗凋亡蛋白BCL-2表达减少,BAX/BCL-2比例增加（P＜0.01）,PI3K、

关键词：当归红芪超滤物人脐静脉内皮细胞 X射线 PI3K/AKT 细胞凋亡

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20例肝性胸水的临床分析

第三军医大学学报 1990年第6期12卷 555-556页

作者：武兵兵陈东风冷恩仁大坪医院消化内科

1963年～1989年我科收治失代偿期肝硬化491例,其中20例(4.07％)合并胸水,现报告如下。 1 临床资料 1.1 一般情况男性13例,女性7例,年龄30岁～72岁,平均42.3岁。均经临床表现、实验室与影像学或病理检查确诊肝硬化,并经X线与超声检查和... 详细信息

1963年～1989年我科收治失代偿期肝硬化491例,其中20例(4.07％)合并胸水,现报告如下。 1 临床资料 1.1 一般情况男性13例,女性7例,年龄30岁～72岁,平均42.3岁。均经临床表现、实验室与影像学或病理检查确诊肝硬化,并经X线与超声检查和胸腔穿刺证实有胸水存在。7例(35％)表现有胸痛、胸闷、气促。

关键词：肝性胸水肝硬变胸腔积液

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类癌综合征1例报告

陆军军医大学学报 1989年第2期11卷 155-156页

作者：陈东风武兵兵冷恩仁大坪医院消化内科

类癌综合征(carcinoid syndrome,CS)临床少见,易漏诊误诊。现报告1例,以引起临床医生的重视。病历摘要患者女,37岁。因发作性颜面潮红,腹痛腹泻3年,加重伴目涩流泪7月,于1987年10月23日入院。 1984年10月,出现面部阵发性潮热、发红,... 详细信息

类癌综合征(carcinoid syndrome,CS)临床少见,易漏诊误诊。现报告1例,以引起临床医生的重视。病历摘要患者女,37岁。因发作性颜面潮红,腹痛腹泻3年,加重伴目涩流泪7月,于1987年10月23日入院。 1984年10月,出现面部阵发性潮热、发红,伴气促、腹痛、稀便,每日发作1～3次。87年3月症状加重,每日发作5～6次,甚则整日面部潮红、热感,伴目涩流泪、头昏痛。食欲下降,曾4次“昏倒”,30

关键词：类癌危象类癌综合征赛庚啶阑尾

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45例次医源性肝性脑病临床分析

中国急救医学 1993年第1期13卷 32-33页

作者：武兵兵陈东风第三军医大学大坪医院消化内科

肝性脑病(hepatic encephalopathy,HEP)是肝硬化的常见并发症,可由多种因素诱发,其中因临床处置不当而诱发者并非少见。现将45例次医源性 HEP 报告如下,以期引起临床工作者的重视。

关键词：医源性疾病肝性脑病

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利钠激素与肝硬化

国外医学（生理病理科学与临床分册） 1991年第1期11卷 41-44页

作者：武兵兵陈东风

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肝硬化患者血浆胃动素水平的研究

基础医学与临床 1992年第1期12卷 49-50页

作者：武兵兵陈东风第三军医大学附属三院消化内科第三军医大学附属三院消化内科重庆 630012

胃动素(motilin,MTL)是参与胃肠道运动功能调节的一种多从类激素,临床观察已证实血浆MTL水平的改变可见于多种胃肠道疾病,并与其运动功能失调有密切关系。目前对MTL在肝硬化中的变化尚无详细研究,本文报告在这方面的初步研究结果,并探... 详细信息

胃动素(motilin,MTL)是参与胃肠道运动功能调节的一种多从类激素,临床观察已证实血浆MTL水平的改变可见于多种胃肠道疾病,并与其运动功能失调有密切关系。目前对MTL在肝硬化中的变化尚无详细研究,本文报告在这方面的初步研究结果,并探讨其临床意义。

关键词：肝硬化患者血浆肝、肾功能对照组 MTL 肝硬化组大量腹水

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B超诊断肝癌心脏转移二例报告

癌症 1991年第1期 82-83页

作者：武兵兵陈东风刘顺冲周毅第二军医大学大坪医院B超室第二军医大学大坪医院消化内科

原发性肝癌主要经血道转移至肺或经淋巴道向邻近脏器和淋巴结转移,经下腔静脉转移至心脏甚为少见,现将所见两例报告如下。例1 患者男性,70岁。因腹胀,消瘦入院。体查:心肺未见异常,腹部膨隆,腹水征阳性,肝肋缘下3cm,剑突下7cm,质硬,表... 详细信息

原发性肝癌主要经血道转移至肺或经淋巴道向邻近脏器和淋巴结转移,经下腔静脉转移至心脏甚为少见,现将所见两例报告如下。例1 患者男性,70岁。因腹胀,消瘦入院。体查:心肺未见异常,腹部膨隆,腹水征阳性,肝肋缘下3cm,剑突下7cm,质硬,表面不平,触痛明显。实验室检查:AFP1760ng/ml,CEA20ng/ml,ESR95mm/h,r-GTlslu,腹水为血性。ECG正

关键词：心脏转移癌下腔静脉阻塞回声反射声纵切肝癌肝脏肿瘤