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DNA条形码技术在地方猪种质资源保护中的应用

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农业生物技术学报 2013年第3期21卷 348-354页

作者：欧阳解秀王立贤南昌大学医学实验教学部中国农业科学院畜牧研究所

本文先概述了动物DNA条形码技术的研究现状,统计分析了DNA条形码研究中所选用的基因序列和研究对象等,发现目前并没有DNA条形码技术应用于地方猪的研究报道;随后,分析我国地方猪种的系统发育研究现状表明,当前中国地方猪的分类体系在分... 详细信息

本文先概述了动物DNA条形码技术的研究现状,统计分析了DNA条形码研究中所选用的基因序列和研究对象等,发现目前并没有DNA条形码技术应用于地方猪的研究报道;随后,分析我国地方猪种的系统发育研究现状表明,当前中国地方猪的分类体系在分子上的证据还很匮乏,研究所涉及的品种较少,分子标记数量有限,分子系统发育学的研究才刚起步;最后,阐述和讨论了DNA条形码技术应用于中国地方猪种保护中的重要意义及其可行性。

关键词： DNA条形码地方猪种质资源保种

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微卫星标记对淡水蚌的适用性研究

生物技术 2013年第3期23卷 53-56页

作者：欧阳解秀吴小平欧阳珊李绍波徐贞刚南昌大学医学实验教学部南昌大学生命科学与食品工程学院江西南昌330031

目的:探讨淡水蚌的遗传多样性。方法:采用双壳类已开发出的11对微卫星引物,计算各物种的相关遗传多样性参数。结果:圆顶珠蚌、洞穴丽蚌和中国尖嵴蚌具有较高的观测杂合度(分别为0.558、0.533和0.497)及多态信息含量(各自为0.512、0.443... 详细信息

目的:探讨淡水蚌的遗传多样性。方法:采用双壳类已开发出的11对微卫星引物,计算各物种的相关遗传多样性参数。结果:圆顶珠蚌、洞穴丽蚌和中国尖嵴蚌具有较高的观测杂合度(分别为0.558、0.533和0.497)及多态信息含量(各自为0.512、0.443和0.429),遗传多样性丰富,其适应环境的能力较强。而橄榄蛏蚌的观测杂合度(0.467)和多态信息含量(0.351)都较低,其遗传多样性较低,需要重点保护。另外,鱼尾楔蚌、三角帆蚌、短褶矛蚌、椭圆背角无齿蚌这四种蚌的遗传多样性中等,属于较稳定的物种。同时,根据遗传距离建立物种间的分子系统树。结论:双壳类微卫星标记可用于研究淡水蚌物种的遗传多样性及系统发育关系。

关键词：淡水蚌微卫星DNA 遗传多样性蚌科

微卫星DNA标记在蚌科生物多样性保护中的应用

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生物技术通报 2010年第12期26卷 78-83页

作者：欧阳解秀吴小平欧阳珊李绍波南昌大学生命科学与食品工程学院南昌330031

蚌科动物是世界上最濒危的动物类群之一,对该类动物的生物多样性保护是非常有意义的。微卫星DNA标记的发展和利用将有利于蚌科动物的遗传多样性保护。从微卫星标记的特点、研究方法、研究结果等方面综述了微卫星DNA标记在蚌科动物中的... 详细信息

蚌科动物是世界上最濒危的动物类群之一,对该类动物的生物多样性保护是非常有意义的。微卫星DNA标记的发展和利用将有利于蚌科动物的遗传多样性保护。从微卫星标记的特点、研究方法、研究结果等方面综述了微卫星DNA标记在蚌科动物中的研究进展,并展望了中国蚌科微卫星DNA标记的研究方向。

关键词：微卫星标记蚌科生物多样性保护

DNA条形码与线粒体基因组在蚌科生物多样性研究中的应用

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基因组学与应用生物学 2017年第9期36卷 3742-3747页

作者：欧阳解秀苏金荟吴小平欧阳珊周春花南昌大学医学实验教学中心南昌330031 南昌大学生命科学学院南昌330031

蚌科是生活在淡水中的滤食性贝类。蚌能过滤、净化水体,且对水质变化反映敏感,是检测水质的指示生物之一。但由于栖息地缺失和破坏,过度商业捕捞以及环境污染等因素的影响,蚌科已被确定为世界上最濒危的动物类群之一。因此,对蚌科生物... 详细信息

蚌科是生活在淡水中的滤食性贝类。蚌能过滤、净化水体,且对水质变化反映敏感,是检测水质的指示生物之一。但由于栖息地缺失和破坏,过度商业捕捞以及环境污染等因素的影响,蚌科已被确定为世界上最濒危的动物类群之一。因此,对蚌科生物多样性的研究显得尤为重要。随着测序技术的不断发展,DNA测序成本越来越低、速度不断加快、准确度不断提高。而作为物种鉴定和发现隐存种的DNA序列工具,DNA条形码已被广泛应用于生物多样性的研究。线粒体基因组是动物唯一的核外基因组,也是遗传多样性重要的组成部分,并为生物多样性研究提供了丰富的信息。同时,蚌科线粒体DNA特殊的双重单亲遗传方式更受到广大研究者的高度重视。本综述对DNA条形码和线粒体基因组用于蚌科生物多样性研究中的特点、研究现状和应用范围等方面进行了总结和分析,并展望了蚌科生物多样性的研究趋势,旨在为蚌科生物多样性研究、保护蚌类和科学利用蚌类资源提供参考。

关键词： DNA条形码线粒体基因组蚌科生物多样性

水稻OsHSP40基因可变剪接体鉴定及表达分析

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华北农学报 2021年第3期36卷 1-6页

作者：喻锦莉刘长爱符霖王鑫欧阳解秀南昌大学生命科学学院江西省分子生物学与基因工程重点实验室江西南昌330031

综合运用生物信息学、RT-PCR和TA克隆技术对水稻热激蛋白基因OsHSP40的可变剪接体进行鉴定,并分析剪接体的表达。首先,利用生物信息学分析发现,该基因存在4种可变剪接体。根据不同可变剪接体的序列信息设计特异性引物进行RT-PCR扩增,结... 详细信息

综合运用生物信息学、RT-PCR和TA克隆技术对水稻热激蛋白基因OsHSP40的可变剪接体进行鉴定,并分析剪接体的表达。首先,利用生物信息学分析发现,该基因存在4种可变剪接体。根据不同可变剪接体的序列信息设计特异性引物进行RT-PCR扩增,结合TA克隆,成功鉴定到OsHSP40的4种可变剪接体。随后,提取野生型植株的根、茎、叶、幼穗和不同发育时期的籽粒,进行不同组织部位的表达分析,RT-PCR结果显示:可变剪接体4(OsHsp40.4)与OsHsp40.1234在不同组织部位的表达模式存在差异。最后,分析在高盐和高温条件下不同剪接本的表达,结果发现,高盐条件下OsHsp40.4和OsHsp40.1234表达上升,但OsHsp40.4上升幅度较低;高温处理后,OsHsp40.1234在处理后2 h表达变化不显著,处理后4 h其表达显著上升,而OsHsp40.4则在处理后2 h表达显著上升。综上,成功鉴定到OsHSP40基因的4种可变剪接体,发现可变剪接体OsHsp40.4和OsHsp40.1234在高盐和高温胁迫过程中的表达存在差异。上述结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。

关键词：水稻热激蛋白 OsHSP40 可变剪接表达分析

水稻OsFRK1与OsFRK2基因CRISPR敲除突变体的构建

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2020年第6期46卷 679-685,741页

作者：张宗飞刘媛媛欧阳解秀李绍波王鑫南昌大学生命科学学院江西南昌330031

为揭示水稻果糖激酶(OsFRK)家族基因的生物学功能,采用CRISPR/Cas9技术,成功创建了2个已鉴定了的水稻OsFRK家族基因的敲除突变体;获得28株OsFRK1的T0代转基因植株,其转基因阳性率、突变率与纯合突变率分别为100%、46.43%和10.71%;获得14... 详细信息

为揭示水稻果糖激酶(OsFRK)家族基因的生物学功能,采用CRISPR/Cas9技术,成功创建了2个已鉴定了的水稻OsFRK家族基因的敲除突变体;获得28株OsFRK1的T0代转基因植株,其转基因阳性率、突变率与纯合突变率分别为100%、46.43%和10.71%;获得14株OsFRK2的T0代转基因植株,其转基因阳性率、突变率与纯合突变率分别为92.86%、92.86%和21.43%;T0代敲除纯合突变体中目的蛋白质的功能结构域均发生不同程度的破坏。

关键词：水稻 OsFRK家族基因 CRISPR/Cas9技术载体构建敲除突变体

1个组培特性优良的籼稻品种的发现及其农杆菌转化体系的建立

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2016年第3期42卷 225-230页

作者：童普国欧阳解秀阎新李绍波廖鹏飞南昌大学生命科学学院/江西省分子生物学与基因工程重点试验室

对生产上广泛应用的4个优质籼型杂交水稻保持系中9B、金23B、Ⅱ–32B和川香29B,2个恢复系9311和明恢63的组培特性进行系统研究,发现川香29B愈伤组织的诱导率、继代培养增殖率、耐继代能力及分化再生能力均高于其他籼稻品种,其愈伤诱导... 详细信息

对生产上广泛应用的4个优质籼型杂交水稻保持系中9B、金23B、Ⅱ–32B和川香29B,2个恢复系9311和明恢63的组培特性进行系统研究,发现川香29B愈伤组织的诱导率、继代培养增殖率、耐继代能力及分化再生能力均高于其他籼稻品种,其愈伤诱导率和分化再生率分别为96%和82%,说明川香29B是1个具有优良组培特性的籼稻品种;进一步对川香29B的农杆菌遗传转化体系进行优化,并初步建立了川香29B稳定的农杆菌介导的转化体系,即农杆菌EHA105菌液浓度OD600 nm为0.1,浸染液AAM中乙酰丁香酮浓度为200μmol/L,浸染时间30 min,黑暗条件下共培养72 h,共培养温度为19℃,抗性植株转化率为19.6%。

关键词：籼稻植物组织培养川香29B 遗传转化农杆菌

利用CRISPR/Cas9技术创建OsGPRP家族基因突变体

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分子植物育种 2018年第15期16卷 4943-4949页

作者：王鑫刘丹阳欧阳解秀彭辉李绍波阎新南昌大学生命科学学院南昌330031 南昌大学医学实验教学中心南昌330031

本研究利用CRISPR/Cas9技术对水稻OsGPRP家族基因进行敲除,在3个水稻OsGPRP基因的第一个外显子PAM序列区域各设计一个靶位点,并将3个靶位点的sg RNA进行串连,成功构建了3个OsGPRP基因同时敲除的CRISPR/Cas9载体;采用根癌农杆菌介导的遗... 详细信息

本研究利用CRISPR/Cas9技术对水稻OsGPRP家族基因进行敲除,在3个水稻OsGPRP基因的第一个外显子PAM序列区域各设计一个靶位点,并将3个靶位点的sg RNA进行串连,成功构建了3个OsGPRP基因同时敲除的CRISPR/Cas9载体;采用根癌农杆菌介导的遗传转化获得了60株T0代CRISPR转基因植株;通过PCR扩增和测序分析,我们获得了2种不同类型的OsGPRP3单基因突变材料;6种不同类型的OsGPRP2/OsGPRP3两基因突变植株;1种类型的OsGPRP1/OsGPRP3两基因纯合突变植株和4种不同类型的OsGPRP1/OsGPRP2/OsGPRP3三基因突变材料,为进一步研究OsGPRP家族基因的生物学功能及其相互关系提供遗传材料。

关键词：水稻 OsGPRP家族基因 CRISPR/Cas9 载体构建

利用CRISPR/Cas9技术创建OsIPCS家族基因突变体

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分子植物育种 2018年第11期16卷 3556-3562页

作者：彭威廖鹏飞阎新欧阳解秀李绍波王鑫南昌大学生命科学学院江西省分子生物学与基因工程重点实验室南昌330031

肌醇磷酸神经酰胺合酶(inositol phosphoryl ceramide synthase,IPCS)是植物鞘脂合成途径中的一种关键酶,在植物生长发育和逆境适应中具有重要作用。本研究在OsIPCS基因外显子区域设计带有PAM序列的靶位点,利用PCR扩增获得OsIPCS基因sg ... 详细信息

肌醇磷酸神经酰胺合酶(inositol phosphoryl ceramide synthase,IPCS)是植物鞘脂合成途径中的一种关键酶,在植物生长发育和逆境适应中具有重要作用。本研究在OsIPCS基因外显子区域设计带有PAM序列的靶位点,利用PCR扩增获得OsIPCS基因sg RNA表达盒,并成功构建CRISPR/Cas9敲除载体;采用根癌农杆菌介导的遗传转化获得3个OsIPCS基因的T0代CRISPR转基因植株;通过PCR扩增和测序确定突变类型,其中2株不同突变类型的OsIPCS1突变单株,27株不同突变类型的OsIPCS2突变单株,9株不同突变类型的OsIPCS3突变单株,为进一步开展OsIPCS基因功能的研究提供科学依据。

关键词：水稻 OsIPCS家族基因 CRISPR 载体构建