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MCM5促进胶质母细胞瘤恶性进展及其机制研究

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中华神经医学杂志 2022年第3期21卷 217-225页

作者：冯如玥谢琳欧阳乐平何明亮刘家豪刘安民中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120

目的探究微小染色体维持蛋白5(MCM5)对胶质母细胞瘤的恶性进展促进作用及机制。方法(1)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2020年9月至2021年9月术中切除的3例非肿瘤患者脑组织与3例Ⅳ级胶质母细胞瘤组织进行质谱检测及蛋白质组学定... 详细信息

目的探究微小染色体维持蛋白5(MCM5)对胶质母细胞瘤的恶性进展促进作用及机制。方法(1)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2020年9月至2021年9月术中切除的3例非肿瘤患者脑组织与3例Ⅳ级胶质母细胞瘤组织进行质谱检测及蛋白质组学定量分析,筛选差异表达的蛋白并进行功能富集分析。(2)在蛋白质组学的基础上筛选出在胶质母细胞瘤中高表达的目标蛋白MCM5,利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库验证其在胶质母细胞瘤中表达情况,并在收集到的临床标本中进行mRNA水平的进一步验证。(3)通过siRNA转染将U251细胞分为阴性对照组、敲低组-1(si-1组)、敲低组-2(si-2组),采用CCK-8实验、平板克隆形成实验、EdU染色、Transwell实验及流式细胞术检测MCM5对胶质母细胞瘤恶性表型的调控作用。(4)利用TCGA数据库中胶质瘤患者的转录组数据,通过GSEA算法探究MCM5调控胶质母细胞瘤恶性进程可能的分子机制。结果(1)在胶质母细胞瘤临床样本中筛选出表达上调的蛋白322种,表达下调的蛋白94种,其中MCM5在3份胶质母细胞瘤样本中均呈现为高表达。(2)基于TCGA数据库163例胶质母细胞瘤和207例非肿瘤脑组织的分析显示MCM5在胶质母细胞瘤中表达上调,差异有统计学意义(t=3.340,P=0.001);针对临床收集的3份胶质母细胞瘤组织和3份非肿瘤脑组织的实时定量PCR(RT-qPCR)实验结果同样显示MCM5在胶质母细胞瘤中表达增高,差异有统计学意义(t=3.876,P<0.001)。(3)与阴性对照组比较,si-1组、si-2组细胞MCM5 mRNA及蛋白表达均显著下降,接种后第5天的增殖率显著降低,细胞克隆数量显著减少,EdU阳性细胞比例显著降低,G1期细胞比例显著上升,迁移能力明显受损,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)GSEA分析结果显示,MCM5高表达组mRNA在DNA损伤修复、E2F靶基因、MYC靶基因、上皮-间质转化(EMT)、白细胞介素6-Janus激酶-信号转导与转录活化因子3(IL6-JAK-STAT3)、干扰素、KRAS、NOTCH、转化生长因子-β(TGF-β)、Wnt/β-Catenin等特征基因集中富集。结论MCM5在胶质母细胞瘤中高表达,并通过包括E2F、MYC、EMT、Wnt/β-Catenin在内的多种机制调控其恶性进展。

关键词：微小染色体维持蛋白5 胶质母细胞瘤细胞增殖细胞周期

Circ-ZEB1对胶质瘤细胞生物学特性的影响

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中华神经外科杂志 2019年第7期35卷 722-728页

作者：谢琳黄佐於何明亮李凯舒欧阳乐平刘安民中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120

目的探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响。方法分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ... 详细信息

目的探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响。方法分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ-ZEB1的表达。采用si-circ-ZEB1转染A172和U251细胞以敲低circ-ZEB1。按照si-circ-ZEB1的种类分为si-1组和si-2组(分别转染si-circ-ZEB1-1、si-circ-ZEB1-2),并设立对照组(siRNA-NC阴性组,转染siRNA-NC)。以CCK-8法检测circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖的影响。分别采用划痕实验和Transwell实验观察circ-ZEB1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响。应用CircNet数据库分析评价circ-ZEB1的circRNA-miRNA的基因调控网络,以双荧光素酶报告基因实验验证circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p的互作关系。结果Circ-ZEB1在胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织(12.16±1.31对比6.84±0.56,P=0.001);相对于低级别胶质瘤[世界卫生组织(WHO)分级为Ⅰ~Ⅱ级],高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级)组织中的circ-ZEB1表达更高(13.77±3.27对比7.50±1.82,P=0.001);且A172和U251的circ-ZEB1相对于HA1800的表达水平分别为2.91±0.30和3.32±0.20(均P<0.01)。CCK-8实验结果表明,与对照组相比,si-1组和si-2组的生长均明显受到抑制,A172细胞的增殖能力分别降低了40.0%和57.1%(均P<0.01),U251细胞的增殖能力分别降低了35.3%和48.5%(均P<0.01)。划痕实验中,si-1组和si-2组的迁移能力较对照组均明显受到抑制(均P<0.05);Transwell实验结果显示,si-1组和si-2组细胞的侵袭能力均低于对照组(均P<0.01)。CircRNA-miRNA的基因调控网络检测结果显示,circ-ZEB1可与多种miRNA相互作用,调节其表达并影响其下游蛋白的功能。双荧光素酶报告基因实验结果提示,circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p存在互作关系。结论Circ-ZEB1在胶质瘤组织和细胞株中呈高表达,下调circ-ZEB1能抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭以及迁移能力,circ-ZEB1能通过与多种miRNA相互作用而发挥其功能。

关键词：神经胶质瘤环状RNA ZEB1 细胞迁移分析侵袭

过表达TAP1上调人胶质瘤细胞株U251 HLA-Ⅰ的表达

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中国病理生理杂志 2013年第3期29卷 425-429页

作者：欧阳乐平张善义李军亮许新科翁胤仑郑眉光王圣文李方成中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广东广州510120

目的:探讨抗原提呈相关转运蛋白1(TAP1)过表达对人胶质瘤细胞株U251人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法:培养U251细胞,构建慢病毒载体并转染U251细胞,获得稳定高表达TAP1的细胞株并设立转染空载体对照组,分别收集U251细胞组、空... 详细信息

目的:探讨抗原提呈相关转运蛋白1(TAP1)过表达对人胶质瘤细胞株U251人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法:培养U251细胞,构建慢病毒载体并转染U251细胞,获得稳定高表达TAP1的细胞株并设立转染空载体对照组,分别收集U251细胞组、空载体对照组和TAP1基因转染细胞组细胞的蛋白和RNA,行real-time PCR和Western blotting分析过表达的TAP1对U251细胞HLA-Ⅰ表达的影响,并用流式细胞术分析U251细胞HLA-Ⅰ表面呈现的变化。结果:成功建立TAP1高表达U251细胞株,TAP1 mRNA和蛋白分别升高(8.73±1.07)倍和(11.71±0.83)倍。高表达的TAP1促进U251细胞HLA-A、HLA-B、HLA-C(重链)和β2微球蛋白(轻链)mRNA表达上调,分别升高(3.51±0.36)倍、(4.78±0.85)倍、(2.94±0.28)倍和(3.23±0.24)倍,HLA-Ⅰ蛋白表达升高(3.14±0.53)倍,同时U251细胞HLA-Ⅰ的表面呈现明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达TAP1能促进U251细胞HLA-Ⅰ表达及其在细胞表面呈现的提高。

关键词：神经胶质瘤 U251细胞抗原提呈相关转运蛋白1 人类白细胞抗原Ⅰ

MiR-125a-3p通过MAPK信号通路影响胶质瘤细胞的增殖及凋亡的实验研究

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中华神经医学杂志 2018年第12期17卷 1203-1209页

作者：谢琳黄佐於欧阳乐平何明亮刘家豪刘安民中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120

目的探讨miR-125a-3p对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用.方法 (1)比较肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中565例胶质瘤组织和10例正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(2)收集中山大学孙逸仙纪念医院... 详细信息

目的探讨miR-125a-3p对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用.方法 (1)比较肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中565例胶质瘤组织和10例正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(2)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2015年4月至2018年4月手术切除并经病理检查证实的胶质瘤标本30例,其中低级别脑胶质瘤7例,高级别胶质瘤23例.另外收集同期因手术入路需要和颅脑外伤切除的正常脑组织标本8例.应用反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(3)体外培养正常胶质细胞HA1800及人脑胶质瘤细胞U251、U373、U87、U138、T98G,72 h后应用RT-qPCR检测6组细胞miR-125a-3p的表达;(4)取对数生长期的U251、U373细胞,分为无义序列组和miR-125a-3p模拟物组,应用LipofectamineTM 2000分别转染无义序列和miR-125a-3p模拟物.转染后72 h应用RT-qPCR检测2组细胞miR-125a-3p的表达,克隆形成实验检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测2组细胞的凋亡情况,Western blotting检测2组细胞凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达.结果 (1)TCGA数据库中,胶质瘤组织中miR-125a-3p的表达低于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05).(2)临床收集的正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤标本中miR-125a-3p的表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与HA1800细胞比较,U251、U373、U87、U138、T98G细胞中miR-125a-3p的表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中U251和U373细胞中miR-125a-3p表达下降得最明显.(4)与无义序列组比较,miR-125a-3p模拟物组U251和U373细胞中miR-125a-3p的表达增加,克隆形成率降低,凋亡率增加,凋亡相关蛋白活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-7的表达均增加,磷酸化(p)-P38/MAPK蛋白的表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-125a-3p在脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞中表达水平较低,过表达miR-125a-3p可以通过MAPK信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,其有望为胶质瘤的治疗提供新的潜在靶点.

关键词：神经胶质瘤 miR-125a-3p 细胞增殖细胞凋亡丝裂原活化蛋白激酶

SNX10在神经胶质瘤中的表达及其对预后的影响

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中华神经医学杂志 2016年第3期15卷 237-240页

作者：何明亮罗铭欧阳乐平蔡望青翁胤仑刘安民中山大学附属孙选仙纪念医院神经外科广州510120

目的研究分选连接蛋白10（SNX10）在神经胶质瘤组织中的表达及其与患者预后的关系。方法收集中山大学附属孙逸仙纪念医院神经外科自2007年1月至2012年12月手术切除并经病理确诊的神经胶质瘤标本30例，其中WHO分级低级别（Ⅰ级和Ⅳ级）9... 详细信息

目的研究分选连接蛋白10（SNX10）在神经胶质瘤组织中的表达及其与患者预后的关系。方法收集中山大学附属孙逸仙纪念医院神经外科自2007年1月至2012年12月手术切除并经病理确诊的神经胶质瘤标本30例，其中WHO分级低级别（Ⅰ级和Ⅳ级）9例、高级别（Ⅲ级和Ⅳ级）21例。另取30例因脑外伤行内减压术的正常脑组织作为对照组。免疫组化染色检测标本中SNX10的表达，分析其与患者各项临床病理指标及预后的关系。Cox比例风险模型分析胶质瘤患者术后死亡的危险因素。结果胶质瘤组标本中SNX10高表达12例，低表达18例；对照组标本中SNX10高表达25例，低表达5例；胶质瘤组标本中SNX10高表达率低于对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。高级别胶质瘤标本中SNX10高表达率低于低级别胶质瘤标本，差异有统计学意义（P〈0.05）。SNX10高表达胶质瘤患者的中位生存期为（22.50±8.27）个月，而SNX10低表达患者的中位生存期为（15.50±0.99）个月。SNX10低表达组胶质瘤患者术后生存率低于SNX高表达组胶质瘤患者（34% vs 65%），差异有统计学意义（P〈0.05）。Cox比例风险模型分析结果显示SNX10表达和肿瘤WHO分级是神经胶质瘤患者术后死亡的独立危险因素，SNX10表达减弱，患者发生术后死亡的风险便增加1.983倍（95%可信区间1.602-2.314，P=0.000）。结论SNX10蛋白表达减弱与神经胶质瘤的发生发展有关，对患者的术后生存时间有显著影响，SNX10蛋白表达减弱可能是神经胶质瘤患者术后预后不良的重要指标。

关键词：分选连接蛋白10 神经胶质瘤:预后

以颞叶囊性变为主的放射性脑病手术方式的探讨

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中华神经外科杂志 2019年第12期35卷 1254-1257页

作者：黄凯敏谢琳欧阳乐平刘家豪黄佐於何明亮刘安民中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120 中山大学附属第五医院神经外科珠海519000

目的探讨不同手术方式对以颞叶囊性变为主的放射性脑病的临床治疗效果。方法回顾性分析2010年1月至2016年12月中山大学孙逸仙纪念医院神经外科行手术治疗的56例以颞叶囊性变为主的放射性脑病患者的临床资料。其中,24例采用单纯病灶切除... 详细信息

目的探讨不同手术方式对以颞叶囊性变为主的放射性脑病的临床治疗效果。方法回顾性分析2010年1月至2016年12月中山大学孙逸仙纪念医院神经外科行手术治疗的56例以颞叶囊性变为主的放射性脑病患者的临床资料。其中,24例采用单纯病灶切除术(对照组);32例采用病灶切除及脑池解剖术(观察组)。根据患者的术后疗效、Karnofsky功能状态评分(KPS)、磁共振成像中病灶体积的大小及随访结果,比较两组患者的临床手术效果及预后。结果对照组中术后主诉症状完全缓解率为29.2%(7/24),观察组为71.9%(23/32),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组术后的KPS为(70.13±19.10)分,观察组为(84.16±13.47)分,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组术后的病灶体积为(32.35±20.85)cm^3,观察组为(13.31±6.44)cm^3,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者均随访1年,观察组的再次入院率低于对照组,分别为18.7%(6/32)、75.0%(18/24),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于以颞叶囊性为主的放射性脑病,手术方式除了单纯病灶切除之外,进一步解剖环池、脚间池,防止有占位效应的孤立囊腔形成,可达到更好的治疗效果。

关键词：颞叶放射性脑病神经外科手术治疗结果

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鞍结节脑膜瘤的显微外科治疗

中华显微外科杂志 2013年第5期36卷 436-439页

作者：许新科李军亮张善义翁胤仑欧阳乐平李方成中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120

目的探讨鞍结节脑膜瘤的显微外科治疗策略。方法对2005年1月至2013年7月应用显微外科手术治疗的鞍结节脑膜瘤35例进行回顾性分析，通过分析其手术入路、手术切除程度、手术效果及并发症等，总结鞍结节脑膜瘤显微外科治疗经验。结果所有... 详细信息

目的探讨鞍结节脑膜瘤的显微外科治疗策略。方法对2005年1月至2013年7月应用显微外科手术治疗的鞍结节脑膜瘤35例进行回顾性分析，通过分析其手术入路、手术切除程度、手术效果及并发症等，总结鞍结节脑膜瘤显微外科治疗经验。结果所有患者均接受显微外科治疗，单侧额下入路20例，纵裂入路4例，翼点或扩大翼点入路10例，翼点及额下联合入路1例。肿瘤切除程度按Simpson分级评估，Ⅱ级26例，Ⅲ级4例，Ⅳ级5例，肿瘤全切除率达85．7％。术前合并不同程度视力视野障碍的28例，术后视力较术前好转20例，无明显变化5例，恶化3例。视力改善率71．4％。无死亡病例。结论鞍结节脑膜瘤周围毗邻结构重要，显微外科手术是其治疗的主要方法。应根据肿瘤大小、生长方式、视力受损程度及术者习惯等选择不同的手术入路。熟悉的显微解剖知识，娴熟的显微外科技巧是手术成功的关键。

关键词：脑膜瘤鞍结节显微外科手术

血红素氧化酶Ⅰ型蛋白在胶质瘤中的表达及其临床意义

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中华神经医学杂志 2017年第6期16卷 559-563页

作者：欧阳乐平李凯舒刘家豪何明亮蔡望青邓跃飞刘安民中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120 清远市人民医院神经外科 511515

目的研究血红索氧化酶Ⅰ型（HO-1）在胶质瘤组织中的表达及意义。方法（1）选择中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2010年1月至2015年1月采用手术治疗的胶质瘤患者56例。其中WHO分级Ⅰ级4例，Ⅱ级16例，Ⅲ级10例，Ⅳ级26例。将Ⅰ、Ⅱ级... 详细信息

目的研究血红索氧化酶Ⅰ型（HO-1）在胶质瘤组织中的表达及意义。方法（1）选择中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2010年1月至2015年1月采用手术治疗的胶质瘤患者56例。其中WHO分级Ⅰ级4例，Ⅱ级16例，Ⅲ级10例，Ⅳ级26例。将Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤分为低级别胶质瘤组，将Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤分为高级别胶质瘤组。免疫组化染色检测胶质瘤中HO-1的表达。（2）采用R语言survival工具包分析癌症基金组图谱（TCGA）数据库中1107例胶质瘤患者的预后与HO-1蛋白表达的关系。结果（1）免疫组化染色结果显示高级别胶质瘤中HO-1高表达率（75％）高于低级别胶质瘤（30％），差异有统计学意义（P〈0．05）。高级别胶质瘤中HO-1的表达水平高于低级别胶质瘤．差异有统计学意（P〈0．05）。用HO-1评分绘制ROC曲线，曲线下面积为0．747（P=0．002），说明HO-1的表达水平对胶质瘤分级的判断有参考价值。Log-rank检验显示HO-1低表达组患者的累积生存率高于HO-1高表达组，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）TCGA数据库中HO-1低表达组患者的同期生存率高于HO-1高表达组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胶质瘤中H0-1蛋白表达水平与胶质瘤恶性程度及预后相关，有望作为反映胶质瘤诊断及治疗的新生物学指标，并成为胶质瘤治疗和研究的新靶点。

关键词：血红素氧化酶Ⅰ型神经胶质瘤恶性程度预后

血卟啉单甲醚光动力治疗处理人胶质瘤细胞长链非编码RNA差异表达及其意义

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中华实验外科杂志 2015年第9期32卷 2071-2073页

作者：张善义王圣文李军亮欧阳乐平许新科陈伟陈程李方成中山大学孙逸仙纪念医院神经外科广州510120

目的探讨血卟啉单甲醚光动力治疗（HMME-PDT）处理后人胶质瘤U251细胞长链非编码RNA（lncRNA）表达谱的变化.方法使用HMME-PDT处理人胶质瘤U251细胞,提取RNA,体外反转录制备并标记为双链cDNA,在标准条件下与含有33 045条lncRNA及30215... 详细信息

目的探讨血卟啉单甲醚光动力治疗（HMME-PDT）处理后人胶质瘤U251细胞长链非编码RNA（lncRNA）表达谱的变化.方法使用HMME-PDT处理人胶质瘤U251细胞,提取RNA,体外反转录制备并标记为双链cDNA,在标准条件下与含有33 045条lncRNA及30215条mRNA的芯片杂交,计算机扫描荧光信号图像,分析lncRNA和mRNA表达谱的变化.结果在HMME-PDT处理的人U251细胞中,lncRNA表达上调l 121条,表达下调1 025条;mRNA表达上调1 111条,表达下调935条（变化＞2倍且P＜ 0.05）.结论 HMME-PDT处理后人胶质瘤细胞lncRNA/mRNA发生明显变化,lncRNA与光动力处理后抗原呈递元件（APM）表达变化密切相关.

关键词：胶质瘤光动力处理长链非编码RNA 抗原转运相关蛋白