检索结果-南通市图书馆

日本结缕草ZjERF1的克隆、转录激活活性、亚细胞定位及表达分析

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草业学报 2019年第6期28卷 56-65页

作者：滕珂张蕊檀鹏辉岳跃森范希峰武菊英北京草业与环境研究发展中心北京100097 北京林业大学草坪研究所北京100083

ERF转录因子是植物体内最大的一类转录因子之一,在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥着重要的作用。研究利用RACE技术,从日本结缕草中克隆到ZjERF1基因(GenBank登录号为MH294481),开放阅读框为630 bp,编码209个氨基酸残基,含有... 详细信息

ERF转录因子是植物体内最大的一类转录因子之一,在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥着重要的作用。研究利用RACE技术,从日本结缕草中克隆到ZjERF1基因(GenBank登录号为MH294481),开放阅读框为630 bp,编码209个氨基酸残基,含有1个高度保守的AP2结构域,属于典型的ERF转录因子。利用染色体步移技术,成功获得ATG上游1581 bp的启动子序列,生物信息学分析表明其中含有多个响应MeJA等激素和非生物胁迫的作用元件。为分析其转录激活特性,构建了pGBKT7-ZjERF1载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,结果表明其具有较强的转录激活活性。为探析其亚细胞定位情况,成功构建35S::ZjERF1:YFP载体,本生烟草瞬时表达结果证明ZjERF1定位于细胞核。为进一步研究ZjERF1的表达特征,利用实时荧光定量的方法进行了验证,结果表明:ZjERF1在日本结缕草茎中表达量最高,并且与叶片的衰老程度呈正相关性;此外ZjERF1的表达可受200μmol·L^-1 ET、10μmol·L^-1 MeJA和300 mmol·L^-1 NaCl处理的诱导,但受到20%PEG4000的抑制。研究表明ZjERF1是一个可参与多种信号转导途径的优良转录因子,为进一步探索ZjERF1基因的功能及其调控机制奠定了基础。

关键词：日本结缕草 ERF转录因子转录激活亚细胞定位表达分析

日本结缕草ZjNAC2转录激活验证及互作蛋白的初步筛选

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草地学报 2019年第3期27卷 567-573页

作者：姜红岩檀鹏辉滕珂尹淑霞武菊英北京林业大学草业与草原学院北京100083 北京草业与环境研究发展中心北京100097

为了进一步探究ZjNAC2在胁迫响应中的作用机制,本试验运用酵母双杂技术筛选与日本结缕草(Zoysia japonica)中的ZjNAC2转录因子相互作用的蛋白。通过克隆获得了日本结缕草ZjNAC2的基因序列并成功构建了诱饵载体pGBKT7-ZjNAC2,同时构建高... 详细信息

为了进一步探究ZjNAC2在胁迫响应中的作用机制,本试验运用酵母双杂技术筛选与日本结缕草(Zoysia japonica)中的ZjNAC2转录因子相互作用的蛋白。通过克隆获得了日本结缕草ZjNAC2的基因序列并成功构建了诱饵载体pGBKT7-ZjNAC2,同时构建高质量的日本结缕草的均一化酵母杂交全长文库。通过酵母双杂筛库的实验筛选到30个阳性菌落,其测序表明获得了20个与ZjNAC2互作的蛋白。NR(Non-redundant protein sequences)注释分析结果显示,20个注释基因NR同源物种比对到9个物种,其中比对到高粱(Sorghum bicolor)中的注释基因最多。GO(Gene Ontology)注释结果表明这些基因可分为细胞组分、分子功能和生化过程3大类。本研究初步筛选到4个与抗病、植物生长发育过程相关的候选互作蛋白,为进一步探究ZjNAC2在日本结缕草中的下游调控机制奠定了基础。

关键词： ZjNAC2 转录自激活酵母双杂交候选基因

草地早熟禾PpGA2ox基因启动子的克隆及功能分析

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中国草地学报 2018年第1期40卷 1-8页

作者：檀鹏辉滕珂李俊张兰尹淑霞北京林业大学林学院草坪研究所北京100083 北京草业与环境研究发展中心北京100097 中国农业科学院草原研究所内蒙古呼和浩特010010

为了研究草地早熟禾(Poa pratensis L.)GA2-氧化酶基因(PpGA2ox)的启动子,利用染色体步移的方法从草地早熟禾中克隆得到1109bp的PpGA2ox基因启动子序列。Plant CARE在线预测结果表明该启动子序列中存在CAAT-box、TATA-box等启动子基本... 详细信息

为了研究草地早熟禾(Poa pratensis L.)GA2-氧化酶基因(PpGA2ox)的启动子,利用染色体步移的方法从草地早熟禾中克隆得到1109bp的PpGA2ox基因启动子序列。Plant CARE在线预测结果表明该启动子序列中存在CAAT-box、TATA-box等启动子基本顺式作用元件以及响应干旱胁迫和茉莉酸甲酯诱导的调控元件。构建PpGA2ox基因启动子与GUS报告基因融合的植物表达载体转化拟南芥,阳性植株GUS组织化学染色结果表明PpGA2ox基因启动子可以驱动GUS基因在拟南芥中表达并且表达具有组织特异性。与对照相比,激素处理及非生物胁迫下GUS基因表达量发生变化,推测PpGA2ox基因的表达可受到激素及非生物胁迫调控。

关键词：草地早熟禾 GA2-氧化酶基因启动子 GUS染色

沟叶结缕草八氢番茄红素基因ZmPSY的克隆、亚细胞定位及表达分析

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草业学报 2017年第11期26卷 69-76页

作者：董笛滕珂于安东檀鹏辉梁小红韩烈保北京林业大学草坪研究所北京100083 北京草业与环境研究发展中心北京100097

八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)是生物类胡萝卜素合成途径中的一个关键酶。本实验从沟叶结缕草中克隆得到ZmPSY基因(Genbank登录号为:KY264128)。该基因开放阅读框为1230bp,编码409个氨基酸残基。亚细胞定位结果显示,ZmPSY... 详细信息

八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)是生物类胡萝卜素合成途径中的一个关键酶。本实验从沟叶结缕草中克隆得到ZmPSY基因(Genbank登录号为:KY264128)。该基因开放阅读框为1230bp,编码409个氨基酸残基。亚细胞定位结果显示,ZmPSY定位于叶绿体中。实时荧光定量分析表明,ZmPSY基因在沟叶结缕草幼嫩的叶片中表达量最高。ZmPSY可受外施激素脱落酸(ABA)的诱导,但受外施激素水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)的抑制。本实验为深入研究沟叶结缕草八氢番茄红素合成酶基因的功能奠定了基础。

关键词：沟叶结缕草八氢番茄红素基因克隆亚细胞定位表达分析

日本结缕草衰老叶片全长cDNA文库构建及酵母单杂交筛选验证

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草地学报 2019年第6期27卷 1486-1493页

作者：滕珂檀鹏辉范希峰岳跃森姜红岩武菊英北京市农林科学院北京草业与环境研究发展中心北京100097 北京林业大学草业与草原学院北京100083

脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶(Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH)是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草(Zoysia japonica)PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿... 详细信息

脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶(Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH)是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草(Zoysia japonica)PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿期延缓衰老提供理论依据。本研究利用Clontech的SMRT cDNA合成技术构建一个日本结缕草衰老叶片的高质量全长cDNA文库,其滴度为2.0×106 cfu·mL-1,插入片段平均长度大于1 kb,cDNA片段插入重组率为100%。该文库的完整性较高,可涵盖绝大多数基因信息,为酵母单杂交筛选奠定了基础。利用酵母单杂交技术,筛选到可与ZjPPH1基因启动子片段结合的候选菌落42个,并对20个候选基因进行测序和生物信息学分析,初步筛选到6个参与细胞生长和衰老过程的重要候选基因,为进一步探索ZjPPH1基因在日本结缕草衰老和叶绿素降解中的上游调控机制提供了理论支撑。

关键词：日本结缕草全长cDNA文库酵母单杂交脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶基因

日本结缕草ZjHCT基因的克隆及转录自激活检测

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分子植物育种 2019年第14期17卷 4617-4622页

作者：董笛王焕英滕珂檀鹏辉晁跃辉韩烈保北京林业大学草坪研究所北京100083 包头市环境保护局昆区分局包头市014000 北京草业与环境研究发展中心北京100097

莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(shikimate/quinate hydroxycinnamoyl transferase,HCT)是木质素生物合成的关键酶之一,也是不同类型木质素相互转化的调控物质。日本结缕草(Zoysia japonica)是一种应用广泛的暖季型坪草。以日本结缕草... 详细信息

莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(shikimate/quinate hydroxycinnamoyl transferase,HCT)是木质素生物合成的关键酶之一,也是不同类型木质素相互转化的调控物质。日本结缕草(Zoysia japonica)是一种应用广泛的暖季型坪草。以日本结缕草为材料,利用PCR技术克隆日本结缕草ZjHCT基因完整编码区,结果显示,日本结缕草ZjHCT基因编码区全长1 284 bp,共编码428个氨基酸。生物信息学分析显示,ZjHCT蛋白组件中,随机线圈和α螺旋含量最多,其不具备信号肽,定位在细胞质内的概率最大。利用DNA重组技术,构建pBGKT7-ZjHCT载体并进行Y2H Gold酵母菌株转化及自激活检测,证明ZjHCT在Y2H酵母菌株中不具备自激活功能,可在日本结缕草中进行互作蛋白筛选实验,为深入研究日本结缕草木质素合成及提高日本结缕草草坪草耐践踏性,改善坪用质量提供帮助。

关键词：日本结缕草 HCT基因转录自激活生物信息学

日本结缕草滞绿基因ZjSGR对烟草的转化及功能分析

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草业学报 2017年第5期26卷 155-162页

作者：檀鹏辉袁丽丽樊波于安东董笛滕珂晁跃辉北京林业大学草坪研究所北京100083 深圳市国艺园林建设有限公司广东深圳518038

SGR基因是植物体内调控叶绿素降解的关键基因之一,在调控植物衰老以及响应非生物胁迫等方面也发挥着重要的作用。本研究利用DNA重组技术,构建35S::ZjSGR:YFP植物表达载体,并通过农杆菌介导的方法成功转化烟草。PCR和qRT-PCR结果显示日... 详细信息

SGR基因是植物体内调控叶绿素降解的关键基因之一,在调控植物衰老以及响应非生物胁迫等方面也发挥着重要的作用。本研究利用DNA重组技术,构建35S::ZjSGR:YFP植物表达载体,并通过农杆菌介导的方法成功转化烟草。PCR和qRT-PCR结果显示日本结缕草滞绿基因ZjSGR已整合到烟草基因组中,并能够在转基因烟草中高效表达。在正常生长环境下,转基因烟草表现出黄化的表型。与对照相比叶绿素含量较低,光合速率下降。亚细胞定位实验证明ZjSGR定位在叶绿体,透射电镜观察结果表明过表达ZjSGR基因使叶绿体发育异常,且有加速降解的趋势。qRT-PCR结果发现转ZjSGR基因的烟草中SAG113,SAG12,NCED和AAO_3的表达量明显高于野生型,衰老进程明显加快。本研究证明ZjSGR可在调控叶绿素降解和衰老的进程中发挥重要作用。

关键词：日本结缕草滞绿基因转基因烟草叶绿素衰老

草地早熟禾PpGA2ox基因的克隆、亚细胞定位及表达分析

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中国草地学报 2017年第3期39卷 8-14,30页

作者：檀鹏辉李俊陈小云张兰滕珂尹淑霞北京林业大学林学院草坪研究所北京100083 中国农业科学院草原研究所内蒙古呼和浩特010010 深圳市国艺园林建设有限公司深圳518038

利用RACE技术从草地早熟禾中克隆赤霉素合成代谢的关键酶GA2-氧化酶基因(PpGA2ox),提交到GenBank,登录号为KX254272。其开放阅读框为1047bp,编码348个氨基酸。系统进化分析表明,PpGA2ox与大麦、小麦及二穗短柄草中的GA2ox亲缘关系较近... 详细信息

利用RACE技术从草地早熟禾中克隆赤霉素合成代谢的关键酶GA2-氧化酶基因(PpGA2ox),提交到GenBank,登录号为KX254272。其开放阅读框为1047bp,编码348个氨基酸。系统进化分析表明,PpGA2ox与大麦、小麦及二穗短柄草中的GA2ox亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示,其编码的蛋白定位于细胞核和细胞质中。实时荧光定量分析表明,PpGA2ox在幼嫩叶片中的表达量最高,且受GA3、MeJA及IAA三种激素的诱导。

关键词：草地早熟禾 GA2-氧化酶基因克隆亚细胞定位表达分析

日本结缕草ZjNAC3基因的克隆与功能分析

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中国草地学报 2021年第9期43卷 14-22页

作者：姜红岩刘凌云檀鹏辉尹淑霞滕珂北京林业大学草业与草原学院北京100083 北京市农林科学院/北京草业与环境研究发展中心北京100097

从日本结缕草中克隆获得ZjNAC3基因,编码区全长1167bp,并获得含1622bp的启动子序列。保守结构域分析表明,克隆的ZjNAC3基因属于NAC转录因子家族。启动子分析表明,启动子中含有多个激素、胁迫响应元件。脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、茉莉酸甲... 详细信息

从日本结缕草中克隆获得ZjNAC3基因,编码区全长1167bp,并获得含1622bp的启动子序列。保守结构域分析表明,克隆的ZjNAC3基因属于NAC转录因子家族。启动子分析表明,启动子中含有多个激素、胁迫响应元件。脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、茉莉酸甲酯(MeJA)、氯化钠(NaCl)、甘露醇(Mannitol)均能够负调控ZjNAC3启动子活性,水杨酸(SA)能够正调控ZjNAC3启动子活性。ZjNAC3在日本结缕草根、茎、叶中均有表达,叶中表达量较高,且衰老叶片中的表达水平显著高于其他时期。激素和胁迫处理后,ZjNAC3表达水平受ABA、MeJA、ETH和干旱、高盐胁迫的调控。亚细胞定位结果显示,ZjNAC3定位于细胞核中。转录自激活验证表明,ZjNAC3具有转录自激活活性,进一步分析发现其N端不具有转录激活活性,其C端具有转录激活活性。

关键词：日本结缕草 ZjNAC3 启动子活性基因表达亚细胞定位转录自激活