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外泌体对毛乳头细胞生物学活性的影响

外泌体对毛乳头细胞生物学活性的影响

作者：曹丹霞南方医科大学

学位级别：硕士

背景和目的近年来人们的脱发发病率逐渐增长,严重影响患者的身心健康。治疗脱发方法包括自体毛囊移植术、口服非那雄胺、外用米诺地尔等,但存在副作用、停药后脱发进程会继续,因此探索新的有效的方法有必要。关于其实验研究包括组织工... 详细信息

背景和目的近年来人们的脱发发病率逐渐增长,严重影响患者的身心健康。治疗脱发方法包括自体毛囊移植术、口服非那雄胺、外用米诺地尔等,但存在副作用、停药后脱发进程会继续,因此探索新的有效的方法有必要。关于其实验研究包括组织工程毛囊重建、毛囊细胞克隆、毛囊细胞移植疗法等,其中得益于组织工程研究发展迅猛,毛囊重建在治疗脱发的研究中较有前景。毛囊的重建需要大量及具有生物学活性的种子细胞,包含有毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSC)及毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPC)。毛囊是皮肤附属器的器官,由真皮组分和表皮组分组成。DPC聚集在毛乳头(DP)内,DP在毛球部被毛母质细胞等包绕。HFSC与DPC相互作用形成新的毛囊,DPC被认为是毛囊形态发生和周期性生长必需的。但DPC在体外经过多次扩增培养,它的生物学活性逐渐消失,因此,改善或维持DPC在体外培育扩增后的诱导活性,是组织工程毛囊重建中重要一步。外泌体,为来源细胞通过旁分泌细胞外排形成的囊泡,直径约为30-150nm,其内携带有来源细胞的DNA、RNA、多种蛋白质等物质,可存在于细胞培养上清液、血液等。因此我们在本实验中通过使用低代数DPC来源的外泌体培养高代数DPC,尝试以其改善DPC的生物学活性,为毛囊重建提供有效的种子细胞,为脱发治疗提供新的研究思路。方法:1.鼠触须垫DPC的分离培养及外泌体的提取与鉴定通过显微解剖+酶消化法获取小鼠触须垫的DP,观察其形态、贴壁和迁出情况,并对细胞进行传代培养扩增。收集低代数DPC的培养上清液并通过超速离心法提取外泌体,并采用粒径检测、电镜观察和外泌体表面标志蛋白检测鉴定。2.外泌体培养DPC对其生物学活性的检测通过添加外泌体培养第3代(P3)和第8代(P8)的DPC,并通过CCK8、qRT-PCR、WB检测其生物学活性。3.经外泌体培养的DPC诱导毛囊再生的研究使用外泌体培养后的DPC及新生鼠的上皮细胞通过注射法进行毛囊重建,通过体视镜、组织切片H&E染色观察情况。结果:1.通过显微解剖+酶消化法能获取小鼠触须垫的DP,细胞正常迁出,扩增培养后DPC呈聚集性生长,但随着传代次数的增加,DPC逐渐失去聚集性生长的特性,且细胞增殖能力减弱。通过超速离心法能提取出直径30-150nm、表达特异性标志蛋白的外泌体。2.添加外泌体培养不同代数的DPC结果显示P3、P8实验组细胞增殖能量较对照组高,P3、P8实验组细胞的相对特异性标记物也较对照组的表达水平高。3.使用外泌体培养的P3和P8的DPC用于毛囊重建,可见P3实验组及对照组均能诱导毛囊再生,而P8组仅实验组能诱导毛囊重建,且再生毛囊数量少。结论:1.通过显微解剖+酶消化法可获取小鼠触须垫的DP,并未影响细胞迁出及DPC的形态、生长特性和增殖活性。通过粒径检测、电镜观察和外泌体表面标志蛋白检测鉴定使用超速离心法可提取出较纯丰富的外泌体。2.添加外泌体培养不同代数的DPC,可部分改善DPC的生物学活性。3.使用外泌体培养的高代数DPC仍能诱导毛囊再生。

关键词：毛囊重建毛乳头细胞外泌体诱导活性

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实时采集道路车流量信息的视频新方法

仪器仪表学报 2008年第1期29卷 158-166页

作者：檀甲甲张建秋复旦大学电子工程系上海200433

本文介绍了一种实时采集道路车流量信息的视频新方法。该方法采用2个新的视频参数作为道路车流量检测的参数,分别称它们为对比度失真和亮度失真参数。分析表明:以视频的对比度失真作为采集道路车流量信息的检测参数对阴影干扰有着很好... 详细信息

本文介绍了一种实时采集道路车流量信息的视频新方法。该方法采用2个新的视频参数作为道路车流量检测的参数,分别称它们为对比度失真和亮度失真参数。分析表明:以视频的对比度失真作为采集道路车流量信息的检测参数对阴影干扰有着很好的抑制作用,从而可利用它来很好地解决传统道路车流量视频检测方法中存在的阴影干扰问题;亮度失真非常适合于实时更新道路背景的视频图像模板,以作为对比度失真参数的补充来提高道路车流量视频检测的准确性;此外,利用这2个参数还可以在很大程度上缓解困扰传统视频检测方法的车距过近问题。大量不同道路、不同车流量和天气情况的实验结果表明:本文提出的视频方法采集车流量的准确率可以达到97.27%。

关键词：对比度失真亮度失真阴影干扰车距过近实时背景更新

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基于NDN架构的车联网内容检索协议

北京理工大学学报 2021年第6期41卷 619-628页

作者：李丹霞杨雅婷黄婉莹北京理工大学计算机学院北京100081 延安大学数学与计算机学院陕西延安716000 北京理工大学信息与电子学院北京100081

在已有的基于NDN架构的车联网(vehicular named data networking,VNDN)内容检索协议中,对于地理位置无关应用的内容检索通常是以洪泛方式获得内容提供者的位置,这种方式不仅开销大且不能适应内容提供者位置的高度动态变化.本文提出了一... 详细信息

在已有的基于NDN架构的车联网(vehicular named data networking,VNDN)内容检索协议中,对于地理位置无关应用的内容检索通常是以洪泛方式获得内容提供者的位置,这种方式不仅开销大且不能适应内容提供者位置的高度动态变化.本文提出了一种基于分簇和预测机制的VNDN内容检索协议CPCoR(content retrieval protocol based on clustering and prediction mechanism).CPCoR通过车辆和路边单元的协同交互,建立了动态的网络内容索引表,在街道内转发机制中选择链路稳定性较好的簇头进行转发,在街道间转发机制中利用街道的路由性能来选择最优的转发街道.实验结果表明,与已有的Navigo和CCVN协议相比,CPCoR协议提高了21.5%和51.3%的内容获取成功率,且有效降低了22.6%和28.4%的内容获取成本.

关键词：命名数据网络车联网簇预测

基于最优簇头数的LEACH协议的分析与改进

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基于最优簇头数的LEACH协议的分析与改进

作者：罗丹霞湖南大学

学位级别：硕士

本文首先介绍了该课题的来源以及研究意义，通过对国内外研究现状的分析，用以支撑自己改进后的协议的创新性。接下来对无线传感器网络的概念以及体系结构做出了定义。为了给改进LEACH协议作铺垫，本文阐述了WSN中几种主要的节能策略以... 详细信息

本文首先介绍了该课题的来源以及研究意义，通过对国内外研究现状的分析，用以支撑自己改进后的协议的创新性。接下来对无线传感器网络的概念以及体系结构做出了定义。为了给改进LEACH协议作铺垫，本文阐述了WSN中几种主要的节能策略以及关键技术。并且对现有的无线传感器网络路由协议进行了综述及分析，并着重地研究与分析了无线传感器网络中典型分簇路由协议——LEACH的运行机制及其优缺点。针对LEACH协议存在的缺陷，本文提出了一种新的路由协议LEACH-EN。该协议的改进主要集中在四个方面：簇头没有均匀分布、每轮簇头数量随机、簇头的选取没有考虑剩余能量、另外簇头与基站通信采取单跳方式。为了让簇头能均匀分布，本文采用了传统的九宫格对网络区域进行了等面积的划分。通过基于压缩比的得到最优簇头目来有效控制簇头数量，控制原理是一个区域内只能有一个簇头出现。原LEACH算法的阀值公式中每一个节点是以相同的概率竞选簇头的，虽然看似公平，但是却不能有效均衡全网的能量，引入节点剩余能量的概念，让剩余能量高的节点当选的机会更大才能真正公平。对于簇头节点在原LEACH算法中于基站是直接通信的，这样忽视了距离对通信代价的影响，本文利用各个区域内的簇头，制定了简单的多跳传播通信路径，避免了计算最短路径的通信开销。改进后的路由协议LEACH-EN采用MATLAB进行了网络仿真实验，并和LEACH协议进行了比较，通过对仿真结果的分析，验证了改进后的LEACH-EN性能上的优越。实验结果证明，改进后的路由协议在节点生存时间等方面有了较好的改善。有效地提高了网络能耗的均衡性，延长了网络的生存时间。

关键词：无线传感器网络分簇算法最优簇头数 MATLAB

NSCs移植对全横断脊髓损伤大鼠运动功能及NTFs表达的影响

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NSCs移植对全横断脊髓损伤大鼠运动功能及NTFs表达的影响

作者：秦丹霞昆明医学院

学位级别：硕士

[目的]：探讨神经干细胞移植对全横断脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能及其脊髓内神经营养因子表达的影响。 [方法]：取成年雌性SD大鼠(180-220g)30只，随机分为：假手术组，脊髓全横断损伤(于T8，9椎骨之间全横断脊髓)7天和14天组和神经... 详细信息

[目的]：探讨神经干细胞移植对全横断脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能及其脊髓内神经营养因子表达的影响。 [方法]：取成年雌性SD大鼠(180-220g)30只，随机分为：假手术组，脊髓全横断损伤(于T8，9椎骨之间全横断脊髓)7天和14天组和神经干细胞移植(在T8，9椎骨之间全横断脊髓后用明胶海绵吸附神经干细胞填充到全横断处)7天和14天组共5组，每组6只动物。分别于7天和14天对大鼠行运动功能的Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分。取每组6只动物中的1只灌注，固定，切片，观察干细胞移植后在脊髓内的存活迁移情况。每组6只动物中另5只动物用Western Blot分析脊髓内NGF，BDNF，NT-3，NT-4的表达变化，用生物凝胶成像系统成像及Synaptic Gene Tool软件进行分析，测定阳性染色区带4种营养因子的光密度值。采用单因素的方差分析及LSD-q检验进行显著性检验。 [结果]1．大鼠的BBB评分在手术后7天组和干细胞移植7天组分别为0.8和2.2分;而，14天手术组和干细胞移植组分别达到3.0和6.6分。即神经干细胞移植组大鼠的BBB评分较脊髓全横断组有明显提高，运动功能得到明显改善。2、移植后的NSCs在脊髓内存活，并有迁移。*** Blot结果显示：全横断术后7天、14天，NGF，BDNF，NT-4的表达和假手术组相比较都没有明显差异(P=0.549，0.958，0.183，0.868，0.374，0.685)，但NT-3的表达比假手术组明显降低(P=0.000，0.001)。NSCs移植7天后，NGF的表达比对应的手术组明显升高(P=0.001);BDNF的表达有所下降，但结果没有显著性差异(P=0.153);NT-3和NT-4的表达都没有明显变化(P=0.521，0.621)。NSC移植后14天，NGF的表达还是比对应的手术组高，但结果没有显著性差异(P=0.078);BDNF的表达明显降低，结果有显著性差异(P=0.032);NT-3和NT-4的表达没有显著变化(P=0.108，0.621)。 [结论]1．神经干细胞移植入大鼠全横断损伤脊髓能明显改善动物后肢运动功能。 2．移植的干细胞在损伤部位能存活，迁移。 3．神经干细胞移植促进NGF上调，BDNF下调，而对NT-3，NT-4无明显影响，提示神经干细胞移植改善大鼠后肢运动功能可能与NGF，BDNF的表达变化有关。

关键词：神经干细胞脊髓全横断神经营养因子 BBB评分

轮状病毒抗原蛋白VP4基因重组载体疫苗研究

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轮状病毒抗原蛋白VP4基因重组载体疫苗研究

作者：冉丹霞重庆医科大学

学位级别：硕士

轮状病毒(rotavirus,RV)感染是引起婴幼儿重症腹泻最重要的因素之一,也是造成发展中国家儿童死亡的重要原因。在世界各国,90%以上的婴儿在3岁之前均受到了RV的感染,在5岁以下腹泻住院患儿中,RV感染病例占20%--70%,5岁以上的儿童几乎全... 详细信息

轮状病毒(rotavirus,RV)感染是引起婴幼儿重症腹泻最重要的因素之一,也是造成发展中国家儿童死亡的重要原因。在世界各国,90%以上的婴儿在3岁之前均受到了RV的感染,在5岁以下腹泻住院患儿中,RV感染病例占20%--70%,5岁以上的儿童几乎全都感染过RV。美国每年与轮状病毒感染有关的医疗费用高达3—10亿元,可见轮状病毒腹泻不仅影响了全球儿童的健康,而且造成严重的经济负担。有效的疫苗接种可以显著减少由RV引起的儿童重症腹泻,也是唯一可行的预防控制RV较高发病率和死亡率的方法[1-2]。轮状病毒颗粒由3层组成:外部衣壳、内部衣壳和核心。外部衣壳由VP7和VP4组成。VP7形成相对光滑的外表面,VP4组成钉状突起,二者都是中和抗原,可诱导机体产生中和抗体。VP4还在病毒感染过程中扮演重要的作用,作为一种细胞结合蛋白,VP4经胰酶切割后可增强轮状病毒对宿主的感染性。因此,以轮状病毒外壳蛋白基因VP4基因,将其重组到原核表达载体上,以研究病原基因在宿主菌中的表达情况,为新型口服疫苗的研究奠定基础[3-5]。目的:构建携带轮状病毒外壳蛋白VP4基因的重组质粒(即pBEX/VP4),检测重组质粒的表达,并对重组载体表达蛋白的安全性进行验证。方法:(1)根据Genbank中鼠源VP4的基因序列设计34对引物,通过重叠PCR合成VP4基因。以pGEX-5x-1为基础,构建穿梭表达载体pBEX,并将合成的VP4基因重组入pBEX,得到重组质粒pBEX/VP4。(2)将其转化大肠杆菌,SDS-PAGE验证蛋白的表达。通过肠袢实验验证表达蛋白的安全性。结果:(1)测序表明,合成的VP4基因正确,并成功构建了穿梭载体pBEX/VP4。(2)VP4蛋白在大肠杆菌中成功表达,其表达蛋白经肠袢实验证实是无毒的。结论:(1)在没有模板的情况下,重叠PCR法可以用来合成目的基因;(2)VP4蛋白在大肠杆菌中的表达,说明穿梭载体的构建是成功的,而肠袢实验验证了表达蛋白的安全性,为以后将重组穿梭载体转入宿主菌,作为新型口服疫苗的研究奠定了基础。

关键词：轮状病毒抗原基因VP4 重叠PCR 穿梭载体pBEX/VP4 肠袢实验口服疫苗

考虑服役退化影响的高速列车关键部件载荷谱编制研究

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考虑服役退化影响的高速列车关键部件载荷谱编制研究

作者：蒋丹霞西南交通大学

学位级别：硕士

中国高速列车的运行速度与铁路运营里程的持续发展在带来便利与经济的同时，车辆各结构部件的服役条件恶化，威胁车辆的安全性和乘坐舒适性。高速列车长期运营由于轮轨作用力不可避免将导致轨道不平顺性显著增加，不断地起动与制动会导... 详细信息

中国高速列车的运行速度与铁路运营里程的持续发展在带来便利与经济的同时，车辆各结构部件的服役条件恶化，威胁车辆的安全性和乘坐舒适性。高速列车长期运营由于轮轨作用力不可避免将导致轨道不平顺性显著增加，不断地起动与制动会导致车轮踏面变形与磨损，悬挂部件随车辆服役时间增长其性能逐渐退化等对车辆的安全运行具有重要影响。本文以高速列车为研究对象，针对高速列车动车组关键部件的载荷谱进行了研究。建立了考虑柔性构架的车辆刚柔耦合动力学模型，分析单因素退化下载荷的变化规律，并综合考虑多因素复合影响编制更加贴合实际的退化载荷谱，对提高结构可靠性设计与疲劳寿命预测具有重要意义。本文的主要研究工作如下：　　首先，基于刚性多体动力学理论，建立高速列车刚性车辆动力学模型，根据柔性多体动力学与模型缩减理论完成构架柔性化建模工作。对比构架主自由度缩减前后模态频率与振型验证了柔性构架主自由度选择的合理性，并替换多刚体模型中的构架模型，实现了考虑柔性构架的车辆刚柔耦合动力学模型的建立。对刚柔耦合模型的各项动力学性能指标进行了计算并与参考文献结果对比，说明了所建模型的有效性。　　其次，以中国高速实测轨道谱作为轨道激励输入刚柔耦合车辆模型中，计算得到车辆载荷时间历程。采用雨流计数法对载荷进行了统计分析，得到载荷均值服从正态分布，幅值服从威布尔分布，符合工程经验，说明了仿真载荷与实际的一致。基于京沪高速铁路实际线路分布特征设置不同速度直曲线工况，编制得到了正常服役工况下的车体与构架载荷谱。　　然后，分别研究了不同空气弹簧刚度、车轮多边形阶数与磨耗幅值、车轮扁疤长度和轨道不平顺幅值下对载荷的影响。结果表明：承载部件载荷幅值随空气弹簧刚度和轨道不平顺幅值退化呈线性变化，且变化比例与其退化程度一致;随车轮扁疤长度增加载荷幅值有小幅增大;随车轮多边形阶数增大，承载部件载荷幅值呈先增大后减小的趋势以及磨耗幅值越大载荷幅值越大。　　最后，考虑实际服役映射，研究多种因素共同在轻度、中度和重度退化下载荷谱的编制。并对退化载荷谱进行了统计分析，结果得到随退化程度增加各承载部件的载荷幅值增大，大载荷幅值对应的频数也随之增加，说明了服役性能退化对结构损伤的影响不可忽视。

关键词：高速列车关键部件载荷谱编制服役退化

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教育传播理论视阈下的高校德育实效性研究

教育传播理论视阈下的高校德育实效性研究

作者：吉丹霞河南大学

学位级别：硕士

“育人为本,德育为先”,作为高校素质教育的一个重要方面,具有不可替代的特殊地位和作用。由于受经济全球化和文化多元化的影响,大学生的传统观念受到前所未有的挑战,其德育的实效性也受到削弱。主要表现在,部分大学生在道德认知与道德... 详细信息

“育人为本,德育为先”,作为高校素质教育的一个重要方面,具有不可替代的特殊地位和作用。由于受经济全球化和文化多元化的影响,大学生的传统观念受到前所未有的挑战,其德育的实效性也受到削弱。主要表现在,部分大学生在道德认知与道德行为选择上的“知行背离”,这从侧面反映出当前高校德育的实际效果不佳。如何从一个新的理论角度来重新审视这个问题,如何将影响高校德育的各个要素发挥出最大的作用,是切实增强高校德育实效性的关键。随着传播技术的迅速发展,教育传播理论的日趋成熟,将教育传播的理论思想和各种创新方法、技巧作为增强高校德育实效性研究的出发点,从问题的根源追溯,帮助大学生解决问题,树立正确的价值观念,是一种新的管理方法和重要途径。本文通过回顾以往高校德育实效性的研究和对教育传播理论的解读基础之上,主要运用问卷调查法和文献分析法,从大学生对高校德育现状的看法、德育工作者和大学生的维度、德育方法和手段的维度、德育媒介环境和德育内容五个方面,具体分析和阐述了河南省高校德育的现状,并总结出存在的主要问题:德育宣传工作注重单向传播,缺乏与学生互动;德育工作者缺乏权威性,使用信息技术的水平不高;大学生普遍存在遵从性心理,缺乏主见;传统的德育传播媒体应用普遍,而当前的网络媒体使用不足;高校德育内容空大且抽象,学生难以理解;德育传播方法多是照本宣科,缺乏实践。具体归因为:(一)德育传播模式单一,学生的个体差异被忽视;(二)德育传播主体的自身素质不高;(三)德育传播媒介没得到合理的应用;(四)高校德育内容陈旧,不符合学生的认知经验;(五)德育传播途径简单,甚至过于呆板。在此基础上,针对高校德育调查结果及归因分析,从教育传播的视角提出了增强高校德育实效性的尝试性策略:(一)提高德育工作者的传播素质是关键。(二)重视受教育者自身的研究是提高德育传播实效性的根本;(三)加强高校德育传播媒介、环境的建设是保障;(四)创新德育内容,满足大学生的需要是前提;(五)合理运用教育传播技巧,拓展德育传播方法是重点。

关键词：教育传播理论高校德育实效性

双脚演奏技术在电子管风琴作品中的作用及实践

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双脚演奏技术在电子管风琴作品中的作用及实践

作者：巫丹霞上海音乐学院

学位级别：硕士

双脚演奏技术是一种管风琴的常规演奏技术,通常用来表现作品中低音声部旋律或伴奏。而在电子管风琴作品中,特别是流行音乐作品,会经常在脚键盘上演奏炫技性较强的低音声部。笔者在本文中结合个人为电子管风琴所创作的流行音乐作品,深入... 详细信息

双脚演奏技术是一种管风琴的常规演奏技术,通常用来表现作品中低音声部旋律或伴奏。而在电子管风琴作品中,特别是流行音乐作品,会经常在脚键盘上演奏炫技性较强的低音声部。笔者在本文中结合个人为电子管风琴所创作的流行音乐作品,深入探讨双脚演奏技术在电子管风琴演奏中的表现作用及实际运用。

关键词：双脚演奏技术古典管风琴电子管风琴低音声部流行音乐作品脚键盘脚尖脚跟