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三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

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中国家禽 2024年第4期46卷 113-119页

作者：郭婷婷赵佳马爽陈杨樊鹏程毕涛旭楚电峰郭梦娇吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院江苏扬州225009 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、... 详细信息

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

关键词：鸡滑液囊支原体血凝抑制试验血清平板凝集试验酶联免疫吸附试验 qPCR

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一例犬艾迪森病的诊断与治疗

中国动物检疫 2024年第2期41卷 113-116页

作者：张倩楚电峰赵修龙阮国宏王秀妮胡潇青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266113 青岛厚德初心动物医院有限公司山东青岛266109

2023年1月22日,1只4岁雌性比熊犬出现呕吐、吐黄水、食欲减退、体质量下降等症状。通过临床观察、血常规检查、生化检测、电解质检测和促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激试验进行诊断。血常规检查结果显示,红细胞压积和红细胞数目升高,提示患... 详细信息

2023年1月22日,1只4岁雌性比熊犬出现呕吐、吐黄水、食欲减退、体质量下降等症状。通过临床观察、血常规检查、生化检测、电解质检测和促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激试验进行诊断。血常规检查结果显示,红细胞压积和红细胞数目升高,提示患犬严重脱水;生化检测结果显示,肌酐、尿素氮含量增加,提示患犬肾功能异常;电解质检测结果显示,患犬出现低钠、高钾与低氯血症,为艾迪森特征性血症;ACTH刺激试验结果显示,肾上腺皮质机能减退。综合上述结果,确诊该犬患有艾迪森病。通过止吐,纠正低血压和低血容量,调节电解质平衡,纠正低血糖,增强食欲以及皮下注射地塞米松磷酸钠注射液或口服波尼松龙片等进行治疗,患犬预后良好。本病例为犬艾迪森病的诊断分析与治疗方案制定提供了参考。

关键词：艾迪森病犬肾上腺皮质机能减退诊断治疗

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猪细小病毒分子生物学研究进展

中国畜禽种业 2023年第1期19卷 17-21页

作者：夏娜黄凯王瑜楚电峰青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266032

猪细小病毒(PPV)被认为是猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一,其缩写为SMEDI(死胎、木乃伊、胚胎死亡和不孕)。该文对该病毒的生物学、病毒结构、致病力以及由该病毒引起的改变进行了综述。

关键词：猪细小病毒分子结构分子生物学

诱导猪肺泡巨噬细胞CD163受体表达的细胞因子筛选

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动物医学进展 2022年第4期43卷 12-18页

作者：刘源马卓媛樊港楚电峰张仕强王妍西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 动物基因工程疫苗国家重点实验室/青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266000

猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞,因此其表达调控的研究备受关注。为了探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)、白介素3(IL-3)和地塞米松(dexamethasone)及其组合对PAM中CD163受体表达的促进作用,通过RT-qPCR和免疫荧光染色在原代PAM中从mRNA和蛋白水平对不同因子及其组合中CD163受体的表达情况进行检测。结果显示,M-CSF、GM-CSF、TGF-β1、IL-10、IL-3和dexamethasone都能在一定范围内促进CD163受体的表达,通过组合发现dexamethasone+IL-10对于CD163受体表达的促进作用最为显著,为进一步开展CD163的表达调控研究奠定了基础。

关键词：肺泡巨噬细胞 CD163 地塞米松白介素10 猪

三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

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中国家禽 2023年

作者：郭婷婷赵佳马爽陈杨樊鹏程毕涛旭楚电峰郭梦娇吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体（MS）活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果，研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测，其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗（MS-H株... 详细信息

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体（MS）活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果，研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测，其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗（MS-H株），B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示：三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致，HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似，但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性，qPCR可以最早发现MS野毒感染，且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示：在条件允许的情况下，qPCR可以作为MS首选的监测方法；当检测条件受限时，上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况，但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响，在结果判断时应进行综合分析。

关键词：鸡滑液囊支原体血凝抑制试验血清平板凝集试验酶联免疫吸附试验 qPCR

新城疫病毒La Sota株的纯化和免疫原性分析

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新城疫病毒La Sota株的纯化和免疫原性分析

作者：楚电峰扬州大学

学位级别：硕士

新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒引起的一种禽类急性、高度接触性传染病,该病发病急、致死率高,自1926年首次暴发于印尼的爪哇和英国的新城以来,该病已经传播到世界许多国家和地区,一直是危害养禽业发展的主要禽病之一,被... 详细信息

新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒引起的一种禽类急性、高度接触性传染病,该病发病急、致死率高,自1926年首次暴发于印尼的爪哇和英国的新城以来,该病已经传播到世界许多国家和地区,一直是危害养禽业发展的主要禽病之一,被OIE列为A类疫病,我国农业部将其列为一类疫病。NDV在分类地位上属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Rubulavirus)的成员之一,为单股不分节段的负链RNA病毒。整个基因组长度约为15kb,包含6个功能基因:3′-NP-P-M-F-HN-L-5′,分别编码6个主要蛋白质(NP蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、HN蛋白和L蛋白)。目前国内外仍无有效药物和健全的方案来治疗此类疾病,接种新城疫疫苗仍是我国各地以及国外预防该类传染病暴发与流行的主要手段。本试验针对实验室保存的新城疫La Sota病毒株作为疫苗用生产种毒的血凝效价、病毒含量以及稳定性下降导致疫苗质量下降的现象,通过蚀斑纯化技术,结合终点稀释法对现有的疫苗用种毒进行连续纯化、筛选,选择蚀斑大小主要在1.0～2.0mm左右,出斑整齐、性状均一、产斑时间一致,均在接毒后60～72h产生大小均一的病毒蚀斑,连续蚀斑纯化三代后,采用极限稀释法,将稀释度最大且血凝效价较高的尿囊液作为传代接种物,继续终点稀释操作,连传五代后。最终得到一株血凝效价高、病毒含量高且稳定的疫苗用生产种毒,接种鸡胚死亡时间较集中,主要在96～117h死亡。该纯化株相对于原毒株,血凝价HA从9log2提高到11log2,鸡胚半数感染量(EID50)从10-9.1/0.1mL提高到10-9.5/0.1mL,且连续传代均较稳定。经血清学鉴定、分子生物学鉴定结果显示,该纯化株融合蛋白F基因与血凝素和神经氨酸酶的HN基因较原毒株同源性达到99.5%和98.6%,说明该纯化株仍为La Sota病毒株,并未在筛选传代的过程中发生变异。经免疫原性试验、安全试验和效力试验,结果表明:该纯化株安全性高、免疫原性好、效力强,对雏鸡无不良反应,符合《国家兽用生物制品规程》要求。试验鸡接种该纯化株疫苗后,能够有效抵抗新城疫强毒攻击,可作为候选疫苗株,为研制新型有效新城疫疫苗,更好地预防鸡新城疫的爆发,提供良好的种毒。

关键词：新城疫纯化蚀斑克隆免疫原性

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国兽医学报 2023年第4期43卷 693-698页

作者：赵佳郭梦娇张成成薄宗义楚电峰曹永忠吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病预防控制协同创新中心江苏扬州225009 动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114 扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)抗体终点滴度(end-point titer,ET)的间接ELISA方法,以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原,以SPF鸡血清... 详细信息

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)抗体终点滴度(end-point titer,ET)的间接ELISA方法,以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原,以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照,优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试,确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品,通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold,PNT)基线确定ET值,建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程,相关系数(R2)为0.9593(P<0.0001)。通过检测2个商品鸡群在1~49日龄不同时间点采集的461份血清样本,比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的IBVN-ELISA方法与该商品化试剂盒相比总体符合率为93.06%,抗体滴度的消涨趋势基本一致,ELISA的敏感性和特异性分别达到99.75%和100.00%(P<0.0001)。结果表明,本研究建立的ELISA方法是一种良好的检测方法。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核衣壳(N)蛋白抗体检测间接ELISA

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免疫佐剂的应用与研究进展

中国动物检疫 2007年第10期24卷 43-44页

作者：楚电峰杜元钊扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国动物卫生与流行病学中心

佐剂是一种先于抗原或与抗原混合同时注入动物体内，能非特异增强抗原的免疫原性或改变免疫反应类型。而自身并无免疫原性，不能引起免疫应答反应的物质。特别是在再次免疫应答中，其增强作用更加明显。佐剂被用来增强疫苗的免疫反应已... 详细信息

佐剂是一种先于抗原或与抗原混合同时注入动物体内，能非特异增强抗原的免疫原性或改变免疫反应类型。而自身并无免疫原性，不能引起免疫应答反应的物质。特别是在再次免疫应答中，其增强作用更加明显。佐剂被用来增强疫苗的免疫反应已有近80年的历史，早在1925年，Ramon发现疫苗中加入木薯淀粉、蛋黄素、琼脂、面包屑、白油、化脓性细菌等可以加强白喉、破伤风抗毒素产生的水平。

关键词：免疫佐剂免疫应答反应应用破伤风抗毒素免疫原性化脓性细菌动物体内反应类型

检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2062-2072页

作者：陈杨孟林春郭梦娇张成成薄宗义楚电峰曹永忠吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院、江苏省动物重要疫病预防控制协同创新中心扬州225009 扬州大学农业科技发展研究院、教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室青岛266114

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血... 详细信息

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R^(2)=0.9176,S/P临界值为0.32,临界滴度是1200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值,可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核。

关键词：鸡毒支原体 VlhA蛋白抗体检测间接ELISA