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参薯愈伤组织诱导及其悬浮细胞培养体系的建立

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分子植物育种 2024年第3期22卷 840-848页

作者：梅朋飞吴晓龙庄赛伟王颖黄小龙黄东益夏薇吴文嫱海南大学生命科学学院海口570228 海南大学热带作物学院海口570228

为确定参薯愈伤组织诱导的最佳激素浓度及悬浮细胞培养条件,以3种基因型参薯(Dioscorea alata)组培苗的腋芽茎段为材料,采用三因素三水平正交实验来探究不同浓度组合的6-BA、NAA和毒莠定(picloram,PIC)对愈伤组织诱导率的影响;为了初步... 详细信息

为确定参薯愈伤组织诱导的最佳激素浓度及悬浮细胞培养条件,以3种基因型参薯(Dioscorea alata)组培苗的腋芽茎段为材料,采用三因素三水平正交实验来探究不同浓度组合的6-BA、NAA和毒莠定(picloram,PIC)对愈伤组织诱导率的影响;为了初步建立愈伤组织悬浮细胞培养体系,采用单因素实验探讨初始悬浮细胞接种量、蔗糖浓度、摇床转速、酪蛋白浓度和光照时间对其细胞生物量的影响。实验结果表明:在1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.5 mg/L PIC激素浓度组合下,参薯Da70号组培苗(Da70)的愈伤诱导率为90%,愈伤状态较好,不同激素对愈伤诱导率的影响分别为NAA>PIC>6-BA。在单因素悬浮细胞培养实验中,10 mL的初始悬浮细胞接种量、10 g/L的蔗糖浓度、100 r/min的摇床转速、50 mg/L的酪蛋白浓度和0 h光照有利于细胞生物量的增加。参薯悬浮细胞生长总体上呈现“S”型,且在第18天时,鲜重为0.1593 g,干重为0.0423 g,细胞活力OD值为0.4850,达到峰值。本研究为后续原生质体的分离以及功能基因的亚细胞定位提供依据。

关键词：参薯组培苗愈伤组织悬浮细胞培养条件

基于8E5细胞的HIV-1病毒载量能力验证质控品制备及评估

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中国预防医学杂志 2024年第3期25卷 362-366页

作者：梅朋飞米云婷朱禹静周德邓煜川金聪姚均邢文革潘品良吕毅中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 宿迁市第一人民医院云南省妇幼保健院北京市疾病预防控制中心

目的制备及评价基于8E5细胞的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)病毒载量能力验证质控品的均一性、稳定性和反复冻融性。方法将8E5细胞上清原液10倍梯度稀释得到浓度依次为106、105、104、103拷贝/ml的4组HIV-1... 详细信息

目的制备及评价基于8E5细胞的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)病毒载量能力验证质控品的均一性、稳定性和反复冻融性。方法将8E5细胞上清原液10倍梯度稀释得到浓度依次为106、105、104、103拷贝/ml的4组HIV-1病毒载量能力验证质控品,应用病毒载量分析仪进行检测,将病毒拷贝数其换算成lg值,计算均值(xˉ)、标准差(s)、变异系数(coefficient of variation,CV)、变化趋势,并对质控品的均一性、稳定性和反复冻融性进行评价。结果在4个浓度梯度的均一性评价中,各浓度组质控品的CV分别为1.2%、2.6%、1.8%和3.2%。稳定性评价实验中,在-20℃条件下,各组质控品在5个月评价期间内,检测结果不随时间延长而改变(P>0.05)。在4℃条件下,各组质控品在5周评价期间内,检测结果随时间延长而未改变(P>0.05)。在25℃条件下,各组质控品在15 d评价期间内,检测结果随时间延长而减少(P<0.05)。冻融次数影响评价中,反复冻融次数对质控品影响不大,其检测结果均在(x±2s)范围浮动。结论基于8E5细胞上清液制备的质控品,在-20℃和4℃保存条件下均一性和稳定性较好,可作为HIV-1病毒载量能力验证质控品。

关键词：人类免疫缺陷病毒病毒载量 RNA 8E5细胞能力验证

蔗糖对参薯块茎形成及DamiR156/DaSPL的调控分析

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分子植物育种 2023年

作者：庄赛伟刘铭吴晓龙梅朋飞黄小龙夏薇吴文嫱黄东益海南大学生命科学学院海南大学热带作物学院

为了探究蔗糖对不同基因型参薯块茎形成的影响，以及对块茎发育过程中相关的DamiR156及其靶基因DaSPL的调控作用，本研究采用不同蔗糖浓度处理参薯组培苗Da40、Da70、Da207，结果表明高浓度的蔗糖能够促进Da40和Da70的块茎形成。当蔗糖... 详细信息

为了探究蔗糖对不同基因型参薯块茎形成的影响，以及对块茎发育过程中相关的DamiR156及其靶基因DaSPL的调控作用，本研究采用不同蔗糖浓度处理参薯组培苗Da40、Da70、Da207，结果表明高浓度的蔗糖能够促进Da40和Da70的块茎形成。当蔗糖浓度为90 g/L时，Da40的结薯时间提早了22 d，Da70的结薯时间提早了40 d。使用RT-qPCR技术测定不同蔗糖浓度处理下Da70的DamiR156及其靶基因DaSPL6相对表达量。结果表明，在第30 d，DamiR156的表达量在蔗糖浓度为70 g/L时表达量最高。在第60 d (即块茎形成初期)，当蔗糖浓度为0 g/L时，DamiR156的表达量最高，DaSPL6表达量最低，在6个不同蔗糖浓度处理下，DaSPL6的表达量呈现先上升后下降的趋势，DaSPL6在70 g/L时表达量最高。研究结果表明外源蔗糖可促进参薯生长并诱导提前结薯，调节DamiR156/DaSPL6的表达，这为后续研究蔗糖调控参薯块茎形成的分子机制提供了一定的理论依据。

关键词：参薯蔗糖 RT-qPCR DamiR156 DaSPL6

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毛薯多糖提取分离工艺优化及抗氧化活性研究

热带作物学报 2023年第9期44卷 1901-1908页

作者：黎善铭桂海霞梅朋飞刘鸿艳陈世坚吴文嫱海南大学热带作物学院海南海口570228 海南大学生命科学学院海南海口570228 上海市农业生物基因中心上海201106

毛薯是海南的传统杂粮,富含植物多糖。本研究以毛薯块茎粉末为材料探究毛薯多糖的提取工艺和抗氧化活性。采用热水提取法分别进行单因素和三因素三水平L_(9)(3^(3))正交实验,优化毛薯多糖提取工艺。毛薯粗多糖溶液经Sveag法除蛋白、透析... 详细信息

毛薯是海南的传统杂粮,富含植物多糖。本研究以毛薯块茎粉末为材料探究毛薯多糖的提取工艺和抗氧化活性。采用热水提取法分别进行单因素和三因素三水平L_(9)(3^(3))正交实验,优化毛薯多糖提取工艺。毛薯粗多糖溶液经Sveag法除蛋白、透析、DEAE-52纤维素柱和SephadexG-100凝胶柱层析分离纯化得到毛薯精多糖。采用DPPH法、羟自由基法、超氧阴离子法和还原法检测毛薯多糖的抗氧化活性。结果表明:热水提取法最佳工艺条件为温度70℃、料液比1∶15、提取时间3 h,毛薯多糖提取率为1.94%;毛薯多糖经过多次分离纯化后,得到纯度均一的中性多糖;毛薯精多糖DPPH自由基清除能力较弱,1~5 mg/mL的清除率保持在10%左右,且随着多糖浓度的升高,清除能力逐渐下降;毛薯精多糖羟自由基活性随着多糖浓度的升高,活性逐渐增加,在5 mg/mL时清除率最高达到34.74%;毛薯精多糖超阴氧离子自由基活性随着多糖浓度的升高,活性逐渐降低,在1 mg/mL时清除率最高达67.35%;毛薯精多糖还原能力较弱,1~5 mg/mL的还原力最高为0.17。该研究优化了毛薯多糖的提取工艺,毛薯多糖具有一定的抗氧化活性,为后续毛薯功能性产品的开发和药物功能机理的研究奠定基础。

关键词：毛薯多糖热水提取法工艺优化抗氧化活性

血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA基因型耐药检测比较

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中国艾滋病性病 2023年第1期29卷 9-13页

作者：梅朋飞朱禹静周德吕毅金聪米云婷邓煜川姚均中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 宿迁市第一人民医院江苏宿迁223800 云南省妇幼保健院昆明650000 北京市疾病预防控制中心北京100013

目的通过对不同病毒载量的同一研究对象同时进行血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA的基因型耐药检测并对结果进行比较,探讨HIV-1 DNA用于耐药检测的可行性和用途。方法2021年12月采集云南省、广西壮族自治区及新疆维吾尔自治区接受ART后1... 详细信息

目的通过对不同病毒载量的同一研究对象同时进行血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA的基因型耐药检测并对结果进行比较,探讨HIV-1 DNA用于耐药检测的可行性和用途。方法2021年12月采集云南省、广西壮族自治区及新疆维吾尔自治区接受ART后1年以上的HIV/AIDS患者静脉血5 mL,EDTA抗凝,分离血浆和制备成干血斑样本,分别提取病毒DNA和RNA进行pol区扩增,比较两种方法的扩增效率;并对同时扩增成功的序列利用MEGA7构建系统进化树并分析序列一致性。利用斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药位点分析,比较耐药性结果。结果209例样本中,来自云南82份(39.2%),来自广西壮族自治区69份(33.0%),来自新疆维吾尔自治区58份(27.8%)。105例VL<20拷贝/mL,25例20拷贝/mL≤VL<200拷贝/mL,42例200拷贝/mL≤VL<1000拷贝/mL,37例VL≥1000拷贝/mL。不同病毒载量的样本分类中,使用血浆中HIV-RNA pol区扩增成功率分别为12.4%、28.0%、69.0%、89.2%;使用干血斑中HIV-DNA pol区扩增成功率分别为39.0%、52.0%、59.5%、73.0%;血浆结合干血斑各组的扩增成功率为41.0%、56.0%、76.2%、89.2%。两种耐药检测方法同时扩增成功66例,耐药结果完全一致为98.5%,序列一致性99.7%。其中有58例(58/66,87.9%)配对样本耐药位点完全一致,8例配对样本耐药位点不完全一致。耐药位点不完全一致的配对样本中仅1例导致耐药结果不同,其他主要由混合碱基导致但未对耐药结果产生影响。结论应用干血斑HIV-1 DNA进行基因型耐药检测可以弥补目前血浆HIV-1 RNA耐药检测不足,特别是对病毒载量<1000拷贝/mL的样本,能够提高耐药检测效率。同时二者检测结果基因序列与耐药位点的一致性很好。结合干血斑样本容易制备、保存与运输的优点,提高了在偏远欠发达地区进行耐药监测的可及性。

关键词： 1型艾滋病病毒病毒载量脱氧核糖核酸耐药干血斑

高效抗病毒治疗患者血浆中HIV-1 RNA与细胞中HIV-1 DNA定量研究

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中国预防医学杂志 2022年第3期23卷 167-170页

作者：朱禹静梅朋飞徐晴晴邓煜川王爱玲姚均中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心中国疾病预防控制中心妇幼保健中心

目的探讨高效抗病毒治疗患者血浆中HIV-1RNA与细胞中HIV-1 DNA水平之间的关系及HIV-1 DNA定量在临床治疗疗效评价方面的意义。方法选取云南省和广西壮族自治区216例接受高效抗病毒治疗的HIV感染者/AIDS患者纳入研究,收集同时期的血浆... 详细信息

目的探讨高效抗病毒治疗患者血浆中HIV-1RNA与细胞中HIV-1 DNA水平之间的关系及HIV-1 DNA定量在临床治疗疗效评价方面的意义。方法选取云南省和广西壮族自治区216例接受高效抗病毒治疗的HIV感染者/AIDS患者纳入研究,收集同时期的血浆和干血斑样本,分别检测HIV-1 RNA和HIV-1 DNA载量。结果 216例患者中,58例血浆病毒载量低于检测下限(Lower than Detectable Level,LDL),有47例可检测到细胞中HIV-1 DNA,其中位数为2.15(1.55,2.83)log拷贝/10^(6)个细胞。158例可检测到血浆病毒载量,其水平为3.33(2.47,2.76)log拷贝/ml,其中149例可检测到细胞中HIV-1 DNA,其水平为2.50(1.94,2.98)log拷贝/10^(6)个细胞。血浆病毒载量与细胞中HIV-1 DNA定量值呈正相关(r=0.33,P<0.01)。结论当接受长期抗病毒治疗患者的血浆病毒载量低于检测下限时,细胞中HIV-1 DNA的定量可以作为一种有效的辅助检测手段,为评价治疗效果提供更精准的依据。当血浆病毒载量可以检出时,细胞中HIV-1 DNA水平与血浆中病毒载量呈现正相关,提示HIV-1 DNA载量可以作为评价治疗效果的辅助指标。

关键词： HIV-1 病毒载量 DNA定量干血斑

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参薯DELLA基因家族鉴定及分析

分子植物育种 2023年第13期21卷 4202-4208页

作者：吴晓龙梅朋飞庄赛伟陶相如黄东益黄小龙吴文嫱夏薇海南大学热带作物学院海口570228 海南大学生命科学学院海口570228

DELLA基因家族是参与赤霉素信号调节过程的负调控因子,DELLA常与其他转录因子结合,通过影响这些转录因子起作用。为了解析参薯中DELLA基因家族的调控网络,本研究对参薯DELLA基因家族进行鉴定,对其理化性质、系统进化树、保守基序、亚细... 详细信息

DELLA基因家族是参与赤霉素信号调节过程的负调控因子,DELLA常与其他转录因子结合,通过影响这些转录因子起作用。为了解析参薯中DELLA基因家族的调控网络,本研究对参薯DELLA基因家族进行鉴定,对其理化性质、系统进化树、保守基序、亚细胞定位预测,赤霉素处理后基因转录谱、互作转录因子进行分析。研究发现,参薯DELLA基因家族包含4个家族成员,都为酸性蛋白。系统进化树分析发现DaDELLA2与拟南DELLA基因处于同一分支,保守基序分析发现除DaDELLA4外,都含有10个蛋白保守序列,DaDELLA定位主要分布在细胞质和细胞核中。根据转录谱发现,赤霉素处理15 d和60 d后,转录因子DaAP2.7-LG16在块茎中表达量最高。分子实验表明DaDELLA2自激活发生在DELLA蛋白N端,与DaAP2.7-LG16存在互作,且互作用主要发生在DELLA蛋白的N端。以上研究对参薯DELLA蛋白基因家族进行初步分析,为进一步的研究提供基础。

关键词： DELLA 参薯基因家族酵母双杂

干血斑HIV-1 DNA定性检测用于HIV-1暴露婴儿早期诊断研究

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中国病毒病杂志 2022年第3期12卷 175-179页

作者：朱禹静邓煜川梅朋飞王爱玲姚均中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 中国疾病预防控制中心妇幼保健中心北京100013

目的评价精耐特(HIV-1)DNA检测试剂盒(简称精耐特试剂盒)与罗氏人类免疫缺陷病毒(1型)核酸检测试剂盒(简称罗氏试剂盒)用于诊断婴儿人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染的灵敏度、特异度和一致性。探究HIV-... 详细信息

目的评价精耐特(HIV-1)DNA检测试剂盒(简称精耐特试剂盒)与罗氏人类免疫缺陷病毒(1型)核酸检测试剂盒(简称罗氏试剂盒)用于诊断婴儿人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染的灵敏度、特异度和一致性。探究HIV-1 DNA定性检测用于我国婴儿早期诊断的可行性。方法将169例来自云南、广西、四川、新疆的HIV阳性母亲所生婴儿纳入研究,每个婴儿至少收集1份出生后至3月龄内的干血斑样本,1份>18月龄的血浆样本。干血斑常温、血浆冷冻运送至中国疾病预防控制中心艾滋病预防控制中心参比室。分别用精耐特和罗氏试剂盒对干血斑样本提取HIV-1 DNA和HIV-1 RNA并进行检测,评价灵敏度、特异度和一致性。对>18月龄的血浆样本做酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunoassay,ELISA)抗体筛查和重组免疫印迹试验(recombination immunoblotassay,RIBA)确证,根据国家标准《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断(WS 293—2019)》判断婴儿最终感染状态。用Excel进行数据分组、整理,用SAS 9.2进行统计学分析。结果纳入的169个婴儿,最终41例感染HIV,128例未感染。共收集到237份干血斑样本,精耐特和罗氏试剂盒灵敏度均为100.00%,特异度分别为98.87%、99.44%。两种试剂盒检测结果不一致3例,检测结果一致率为98.73%(234/237),Kappa值为0.967,95%可信区间(CI):0.930~1.000,P<0.001。结论精耐特HIV-1 DNA定性检测试剂盒用于干血斑进行婴儿早期HIV感染诊断具有很好的灵敏度和特异度,且检测结果与罗氏HIV-1 RNA定性试剂盒检测结果具有较好的一致性,可用于我国婴儿的早期诊断,特别是可以为偏远欠发达地区HIV-1暴露婴儿早诊断、早治疗提供便利。

关键词： HIV-1 婴儿早期诊断干血斑定性检测

微藻阴极AOM-MFC原位固碳性能及影响因素研究

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中南大学学报（自然科学版） 2024年第4期55卷 1323-1331页

作者：侯彬张超孙竹梅刘嘉欣包朋飞李鑫钰卢静中北大学环境与安全工程学院山西太原030051 中南大学冶金与环境学院湖南长沙410083

针对甲烷厌氧氧化微生物燃料电池(anaerobic oxidation of methane-microbial fuel cells,AOM-MFC)阳极终产物多为二氧化碳(CO_(2))的问题,将微藻阴极引入AOM-MFC进行原位固碳。研究结果表明:当接种量为25%(体积分数)、接种龄为24 h、... 详细信息

针对甲烷厌氧氧化微生物燃料电池(anaerobic oxidation of methane-microbial fuel cells,AOM-MFC)阳极终产物多为二氧化碳(CO_(2))的问题,将微藻阴极引入AOM-MFC进行原位固碳。研究结果表明:当接种量为25%(体积分数)、接种龄为24 h、光照强度为8000 lx、光照周期为12 h并以阳极出水作为反应器的阴极液时,微藻阴极反应器获得最大峰值电压((0.385±0.001)V)和最大生物量微藻质量浓度((576.33±1.53)mg/L);微藻阴极反应器的原位固碳过程由3部分组成,即阳极微生物利用甲烷(CH_(4))产生以CO_(2)为主的代谢物和电子、阴极内微藻捕获并固定CO_(2)产生氧气(O_(2))、产生的O_(2)与质子和外电路传递到阴极的电子结合生成水;微藻阴极反应器具有一定的废水处理能力,并且能够将CH4中蕴含的化学能转化为电能和生物质能,有助于实现CH_(4)高效转化过程中“零碳排放”。

关键词：甲烷厌氧氧化微生物燃料电池微藻阴极原位固碳

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