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MEN1缺失通过诱导DNA损伤累积抑制乳腺癌细胞的恶性表型

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MEN1缺失通过诱导DNA损伤累积抑制乳腺癌细胞的恶性表型

作者：梁黎贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨多发性内分泌肿瘤1型综合征（The multiple endocrine neoplasia type1）关键基因MEN1,调控的DNA损伤修复在乳腺癌细胞恶性表型,和他莫昔芬获得性耐药产生中的作用及分子机制。方法:我们通过下载肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库... 详细信息

目的:探讨多发性内分泌肿瘤1型综合征（The multiple endocrine neoplasia type1）关键基因MEN1,调控的DNA损伤修复在乳腺癌细胞恶性表型,和他莫昔芬获得性耐药产生中的作用及分子机制。方法:我们通过下载肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库数据分析乳腺癌患者及正常人,Luminal型,HER-2阳性型和三阴性乳腺癌患者中MEN1的表达水平;从贵州医科大学附属乌当医院收集临床乳腺癌组织和癌旁组织标本,通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色分别检测MEN1的m RNA和menin蛋白表达水平;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MEN1基因敲除的MDA-MB-231细胞株命名为（MDA-MB-231/KO细胞）,对照细胞命名为（MDA-MB-231/WT细胞）,细胞经MNNG、DOX、TAX、TAM作用后运用CCK8、克隆形成实验、Ed U染色分别检测细胞增殖和细胞凋亡;三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞经menin-MLL抑制剂MI-3单独或联合甲基硝基亚硝基胍（MNNG）、阿霉素（DOX）、紫杉醇（TAX）、他莫昔芬（TAM）作用后运用CCK8、克隆形成实验、Ed U细胞增殖染色及流式细胞术分别检测细胞增殖和细胞凋亡;MDA-MB-231/WT和KO细胞经MNNG作用6 h后利用免疫荧光染色检测DNA损伤的标志物γH2AX和DNA修复因子53BP1的表达;MDA-MB-231/WT和KO细胞经MNNG作用72 h,MDA-MB-468细胞经MI-3处理48 h后再联合MNNG作用72 h提取总蛋白,通过Western blot检测menin、γH2AX和DAN损伤修复因子RAD51、BRCA1、53BP1、KU70、KU80的蛋白表达。采用TAM从低浓度梯度递增结合大剂量间歇诱导的方法作用乳腺癌MCF-7细胞,构建TAM耐药的MCF-7细胞系,每传代10代运用CCK8实验检测TAM持续处理组细胞的增殖活力,通过细胞增殖活力评价MCF-7细胞的耐药性,将TAM耐药细胞命名为MCF-7-DR细胞,MCF-7 TAM敏感细胞为对照组,命名为MCF-7-NC细胞;MCF-7-DR和NC细胞通过RNA测序（RNA-seq）分析基因表达谱的差异,q PCR检测和验证差异基因的m RNA表达水平;Western blot检测menin、γH2AX、RAD51、53BP1、KU70、KU80的蛋白表达;MCF-7-NC和DR细胞经MI-3单独或联合TAM处理后利用CCK8、克隆形成实验检测耐药细胞的增殖情况,观察menin-MLL相互作用被破坏后MCF-7-DR细胞对TAM的敏感性。结果:TCGA数据库数据分析结果显示,与正常人比较,MEN1基因在乳腺癌患者中的表达水平显著增高（P＜0.05）;免疫组织化学染色和q PCR结果显示,与癌旁组织比较,乳腺癌组织中menin蛋白水平和MEN1的m RNA水平显著升高（P＜0.05）;Western blot结果显示,与MCF-7细胞（Luminal型）比较,MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞（TNBC型）的menin蛋白表达明显升高;CCK8、克隆形成实验和Ed U染色结果显示,与MDA-MB-231/WT细胞比较,MDA-MB-231/KO细胞的增殖能力明显下降,且呈时间依赖效应（P＜0.05）;MNNG、DOX或TAM作用细胞后,MNNG和DOX均能明显抑制细胞的增殖能力,其中MNNG的抑制作用最好（P＜0.05）;CCK8、克隆形成和Ed U染色结果显示,MI-3能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖活性,且呈剂量依赖效应,与MNNG、DOX、TAX及TAM单独作用组比较,MI-3联合用药显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖活性（P＜0.05）;流式细胞术结果表明,未处理组MDA-MB-231/WT和KO细胞的基础凋亡率无统计学差异（P＞0.05）,而MNNG处理组MDA-MB-231/KO细胞凋亡率显著高于MDA-MB-231/WT细胞（P＜0.05）;免疫荧光结果显示,与MDA-MB-231/WT细胞比较,MDA-MB-231/KO细胞核中γH2AX染色显著增加而53BP1的染色明显降低,MEN1基因缺失显著升高MNNG诱导的γH2AX染色水平（P＜0.05）;免疫组化结果显示,menin高表达的乳腺癌组织中的γH2AX呈低表达趋势,而menin低表达的乳腺癌组织中的γH2AX呈高表达趋势;与MDA-MB-231/WT细胞比较,MDA-MB-231/KO细胞中的RAD51、BRCA1及53BP1的蛋白表达明显降低,而KU70和KU80的蛋白表达显著增加,且MEN1敲除显著升高MNNG诱导的γH2AX蛋白的表达（P＜0.05）。C

关键词： MEN1基因乳腺癌 DNA损伤同源重组修复(HR) 非同源末端连接(NHEJ)

政协新事多——全国政协第十一届一次会议综述

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中国民族 2008年第4期 7-9页

作者：梁黎《中国民族》记者

2008年,对于中国来说,是一个重要的年份。对于拥有5000多年文明历史的中华民族来说,则是一次向世界宣告自己复兴的开始。这一年,举世瞩目的中国共产党的十七大精神将进一步贯彻落实;这一年,中国的百年奥运梦想实现;这一年,改变了中国人... 详细信息

2008年,对于中国来说,是一个重要的年份。对于拥有5000多年文明历史的中华民族来说,则是一次向世界宣告自己复兴的开始。这一年,举世瞩目的中国共产党的十七大精神将进一步贯彻落实;这一年,中国的百年奥运梦想实现;这一年,改变了中国人命运的改革开放走过整30年。这一年,被称为人类学民族学界的"奥林匹克"的第16届世界大会在中国召开。随着春天的脚步,一年一度备受瞩目的"两会"的召开,成为唱响2008年的序曲。

关键词：全国政协中国共产党综述世界大会中华民族改革开放奥林匹克民族学

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《中国少数民族古籍总目提要》

中国民族 2009年第10期 78-79页

作者：梁黎

1981年9月17日，中共中央发出“关于整理我国古籍的指示”，决定由时任中央顾问委员会常委的李一氓主持这项工作，并恢复了国务院古籍整理出版规划小组。1982年1月20目，《人民日报》刊登了李一氓的署名文章《论吉籍和古籍整理》，文中... 详细信息

1981年9月17日，中共中央发出“关于整理我国古籍的指示”，决定由时任中央顾问委员会常委的李一氓主持这项工作，并恢复了国务院古籍整理出版规划小组。1982年1月20目，《人民日报》刊登了李一氓的署名文章《论吉籍和古籍整理》，文中提出：“对于少数民族语言古籍，自亦为中国古籍，如藏、蒙古、回鹘、西夏、契丹等文，都应加以整理。”

关键词：《中国少数民族古籍总目提要》古籍整理《人民日报》少数民族语言中共中央顾问委员会出版规划中国古籍

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人民币上的少数民族文字

中国民族 2009年第10期 36-37页

作者：梁黎

少数民族文字第一次出现在新中国的人民币上，是1955年3月1日发行的第二套人民币。1950年初的一天，在中央美术学院工作的著名画家罗工柳家中突然来了两位人民银行的“不速之客”。一位是印刷局副局长王显周，一位是印币厂厂长贺晓初。... 详细信息

少数民族文字第一次出现在新中国的人民币上，是1955年3月1日发行的第二套人民币。1950年初的一天，在中央美术学院工作的著名画家罗工柳家中突然来了两位人民银行的“不速之客”。一位是印刷局副局长王显周，一位是印币厂厂长贺晓初。他们行色匆匆，神情凝重。

关键词：少数民族文字人民币中央美术学院人民银行著名画家新中国罗工柳厂长

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从“中甸”到“香格里拉”

中国民族 2009年第10期 62-63页

作者：梁黎

人类在现代化进程中，面临着日益激烈的环境与发展之间的矛盾、人与自然的冲突。今天，符合全人类追求的“适度与和谐”的境界、能够代表“世界的心”的地方，在某些人看来，似乎只存在于云南迪庆藏族自治州的中甸。它被称为“香格里拉”。

关键词： “香格里拉” 中甸迪庆藏族自治州现代化进程环境与发展人与自然人类

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格萨尔王网络游戏

中国民族 2009年第10期 110-111页

作者：梁黎

2007年8月4日，一条消息在各大媒体上发布：“世界最长史诗”《格萨尔王传》中的英雄格萨尔王的故乡四川省甘孜藏族自治州筹划将这部英雄史诗开发成网络游戏。”承接这个项目的是四川阿兰文化传播有限公司，董事长阿兰是一位藏族女性，... 详细信息

2007年8月4日，一条消息在各大媒体上发布：“世界最长史诗”《格萨尔王传》中的英雄格萨尔王的故乡四川省甘孜藏族自治州筹划将这部英雄史诗开发成网络游戏。”承接这个项目的是四川阿兰文化传播有限公司，董事长阿兰是一位藏族女性，这个项目将需要1000万元的投资。

关键词：《格萨尔王传》网络游戏甘孜藏族自治州英雄史诗文化传播四川省董事长阿兰

第三代非甾体类芳香化酶抑制剂在儿科内分泌临床应用的再认识

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浙江大学学报（医学版） 2020年第3期49卷 275-282页

作者：王春林梁黎浙江大学医学院附属第一医院儿科浙江杭州310003

芳香化酶是雌激素生物合成的限速酶,以来曲唑和阿那曲唑为代表的第三代非甾体类芳香化酶抑制剂(AI)与芳香化酶结合,可有效降低雌激素水平,因其具有高效性、选择性及可逆性结合等特点,近20年来在国内外被应用于儿童内分泌疾病如纤维性骨... 详细信息

芳香化酶是雌激素生物合成的限速酶,以来曲唑和阿那曲唑为代表的第三代非甾体类芳香化酶抑制剂(AI)与芳香化酶结合,可有效降低雌激素水平,因其具有高效性、选择性及可逆性结合等特点,近20年来在国内外被应用于儿童内分泌疾病如纤维性骨营养不良综合征、家族性男性限制性性早熟、青春期男性乳房发育治疗和改善青春期矮小男童成年终身高等,观察到较好的疗效和安全性。然而,AI药品说明书并无儿童用药适应证,较大样本量的临床研究发现AI存在肝肾功能损害、脂代谢紊乱、高雄激素血症及骨代谢紊乱等药物不良反应的风险,尤其是对男性生殖系统损害和骨代谢的远期影响尚不清楚。因此,儿童使用AI时须权衡利弊、谨慎使用,通过收集AI安全性和有效性的临床证据积累经验,为规范AI在儿科的临床应用奠定基础。

关键词：芳香酶抑制剂/治疗应用儿童治疗结果安全性