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Tyrphostin AG1478对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第6期23卷 78-83页

作者：刘新光梁念慈中国 524023 广东医学院生物化学与分子生物学研究所湛江

目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到... 详细信息

目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的32P放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、[KG*2]cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1478对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为25.9μmol/L,抑制作用接近于已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3),稍小于5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB).AG1478对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP和酪蛋白均呈竞争性抑制作用,是一种双底物抑制剂.结论:AG1478不仅是高效特异的表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且也是一种新型有效的蛋白激酶CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便的筛选和开发有效CK2抑制剂的分子靶点.

关键词：酪蛋白类蛋白激酶类重组蛋白质类全酶类 tyrphostins 动力学

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半边旗二萜类活性成分的提取分离研究

中国药学杂志 2004年第10期39卷 742-744页

作者：邓亦峰梁念慈广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验室广东湛江524023

目的建立一种高效的提取和富集分离半边旗中二萜类活性成分的方法.方法用超临界CO2与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类活性成分,采用正交实验法优化萃取条件;采用D101大孔吸附树脂吸附、乙醇阶梯洗脱的方法分离富集半边旗中... 详细信息

目的建立一种高效的提取和富集分离半边旗中二萜类活性成分的方法.方法用超临界CO2与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类活性成分,采用正交实验法优化萃取条件;采用D101大孔吸附树脂吸附、乙醇阶梯洗脱的方法分离富集半边旗中二萜类活性成分;以高效液相色谱(HPLC)-大气压化学电离源(APCI)-质谱(MS)联用的分析方法跟踪检测,以主要的二萜类活性成分5F为监测目标,采用准分子离子[M-H]-1为选择离子监测离子,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量.结果超临界流体萃取的最佳条件为25MPa,60℃,15%甲醇,流量3.0 mL·min-1;采用35%乙醇洗脱D101大孔吸附树脂可除极性杂质,45%～55%乙醇洗脱流份可富集分离半边旗中二萜类活性成分.结论采用超临界CO2萃取与大孔吸附树脂吸附分离相结合,提取分离半边旗中二萜类活性成分,具有效率高、不使用有毒有害溶剂、环境污染程度低的特点,该方法易于工业化.

关键词：超临界CO2萃取大孔吸附树脂半边旗二萜类活性成分

AG372对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制动力学研究

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中国药学杂志 2002年第7期37卷 540-543页

作者：刘新光梁念慈广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

目的　观察Tyrphostin中的AG372对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定... 详细信息

目的　观察Tyrphostin中的AG372对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP或 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 + ,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG372对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 6 2 7.1nmol·L-1,抑制作用远大于已知CK2抑制剂DRB和A3。AG372对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论　AG372是一种很强的重组人CK2抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。

关键词：蛋白激酶CK2 重组蛋白酶动力学

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蛋白激酶CK2黄酮类抑制剂的研究进展

中国药学杂志 2005年第1期40卷 3-6页

作者：林小聪刘新光梁念慈广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

目的　阐述蛋白激酶CK2的黄酮类抑制剂的研究进展。方法　结合文献和作者的工作 ,简述CK2与肿瘤及病毒感染性疾病的关系 ;CK2抑制剂的分类 ;CK2的底物专一性与抑制剂结构、功能的关系 ;CK2黄酮类抑制剂的理化性质 ,结构特点 ,抑制效果 ... 详细信息

目的　阐述蛋白激酶CK2的黄酮类抑制剂的研究进展。方法　结合文献和作者的工作 ,简述CK2与肿瘤及病毒感染性疾病的关系 ;CK2抑制剂的分类 ;CK2的底物专一性与抑制剂结构、功能的关系 ;CK2黄酮类抑制剂的理化性质 ,结构特点 ,抑制效果 ,抑制作用的特异性、机制及类型。结果与结论　根据抑制剂的结构特点及其作用规律 ,借助计算机辅助设计并利用化学方法在某些基本化合物的基础上进行改造 ,有望获得更有效乃至选择性更强的CK2抑制剂。

关键词：黄酮类化合物蛋白激酶CK2 抑制剂

槲皮素-7,4’-二硫酸酯对凝血酶诱导猪血小板聚集的抑制作用及其机制(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2000年第8期21卷 68-72页

作者：刘文梁念慈中国 524023 广东医学院生物化学和分子生物学研究所广东医学院生物化学和分子生物学研究所湛江

目的:研究人工半合成槲皮素—槲皮素-7,4′-二硫酸酯二钠(disodium quercetin-7,4′-disulfate,DQD)对凝血酶(500 U·L-1)诱导猪血小板聚集的抑制作用及其机制。方法:用比浊法测定血小板聚集。Fura 2-AM荧光法检测胞浆游离钙浓度([Ca2+... 详细信息

目的:研究人工半合成槲皮素—槲皮素-7,4′-二硫酸酯二钠(disodium quercetin-7,4′-disulfate,DQD)对凝血酶(500 U·L-1)诱导猪血小板聚集的抑制作用及其机制。方法:用比浊法测定血小板聚集。Fura 2-AM荧光法检测胞浆游离钙浓度([Ca2+]i)。用组蛋白ⅢS,[γ-32P]ATP与蛋白激酶C(PKC)酶液一起保温的方法测定Ca2+/PL依赖的PKC活性。用SDS-PAGE分离骨架蛋白。结果:DQD对凝血酶诱导的血小板聚集有抑制作用,当DQD的浓度为100,200和400μmol/L时,抑制率分别为77％、86％和82％。DQD(10-80μmol/L)抑制凝血酶诱导的血小板胞外钙内流;DQD对凝血酶诱导的血小板胞内钙动员也有抑制作用。DQD(10-160μmol/L)抑制血小板胞浆Ca2+/PL依赖的PKC,但DQD不影响胞膜PKC。DQD(20-200μmol/L)对凝血酶诱导的血小板肌动蛋白聚合有较强的抑制作用。结论:DQD对凝血酶诱导的猪血小板聚集有抑制作用,其分子作用机制是由于抑制血小板外钙内流、内钙动员、Ca2+/PL依赖的PKC和肌动蛋白聚合。血小板;;黄酮类;;槲皮素;;血小板聚集;;钙;;蛋白激酶C;;肌动蛋白类

关键词： blood platelets flavones quercetin platelet aggregation calcium protein kinase C actins

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半边旗二萜类化合物的液质联用图谱鉴定

中药材 2005年第4期28卷 278-280页

作者：邓亦峰梁念慈广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验室广东湛江524023

用高效液相色谱-大气压化学电离源质谱联用的方法建立总离子流色谱图,以色谱保留时间和色谱峰的质谱图为依据,对不同地区和不同采集时间的半边旗LC-MS图谱中的主要色谱峰进行了对比分析和质谱鉴定.色谱分析条件:色谱柱为Diamonsil ODS、... 详细信息

用高效液相色谱-大气压化学电离源质谱联用的方法建立总离子流色谱图,以色谱保留时间和色谱峰的质谱图为依据,对不同地区和不同采集时间的半边旗LC-MS图谱中的主要色谱峰进行了对比分析和质谱鉴定.色谱分析条件:色谱柱为Diamonsil ODS、4.6 mm×150mm,流动相为30%CH3CN-70%2mmol/L NH4AC、流速1.0 ml/min,进样5 μl;质谱分析条件:APCI负离子源,质谱扫描范围m/z 50～700,扫描间隔1s.以对照品为参比,鉴定出贝壳杉烷系二萜类化合物4F、5F和6F的色谱峰;根据色谱行为和质谱行为,推测出6F的16位饱和态化合物以及4F和5F的甙.对不同地区和采集时间的半边旗LC-MS指纹图谱中的主要色谱峰进行比较分析得出,广州市郊和湛江地区以及在11～12月采集的半边旗中5F含量较高.本法简便、快速,可为半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和新药资源的开发提供参考.

关键词：二萜类化合物半边旗液-质联用大气压化学电离高效液相色谱一 LC-MS 采集时间不同地区分析条件抗癌化合物色谱峰方法建立质谱联用保留时间质谱鉴定对比分析 APCI 扫描范围贝壳杉烷色谱行为比较分析指纹图谱

长春新碱对HL—60细胞肌醇磷脂代谢和增殖的影响

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中国药理学通报 1993年第3期9卷 210-212页

作者：吴波梁念慈广东医学院生化教研室湛江524023

长春新碱作用于~3H—肌醇标记的人早幼粒白血病HL—60细胞.发现~3H—PI急剧减少,在检测的1～120min内.仅为对照组的38.55％～61.01％.而~3H—PIP、~3H—PIP_2含量无明显变化.表明长春新碱不影响HL—60细胞PI激酶和PIP激酶活性。却迅速... 详细信息

长春新碱作用于~3H—肌醇标记的人早幼粒白血病HL—60细胞.发现~3H—PI急剧减少,在检测的1～120min内.仅为对照组的38.55％～61.01％.而~3H—PIP、~3H—PIP_2含量无明显变化.表明长春新碱不影响HL—60细胞PI激酶和PIP激酶活性。却迅速且持久地促进PI的水解;同时检测到长春新碱明显抑制细胞增殖和DNA合成.提示长春新碱抑制HL—60细胞增殖与干扰肌醇磷脂代谢有关。

关键词：长春新碱肌醇磷脂代谢白血病

存活素siRNA表达质粒的构建及其对MCF-7细胞细胞周期和增殖的调控(英文)

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癌症 2004年第7期23卷 742-748页

作者：李莉萍梁念慈罗超权中山大学医学部生化教研室广东广州510089 广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺... 详细信息

背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法应用含有U6启动子的mU6pro载体构建存活素siRNA质粒,RT-PCR和Westernblot法检测该质粒转染MCF-7细胞后存活素表达的变化,流式细胞仪和MTT法分别检测其对细胞周期和对细胞增殖的影响。结果存活素siRNA质粒明显下调MCF-7细胞中存活素的表达,阻断细胞周期在G1期,显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论通过RNA干扰,存活素的表达在mRNA和蛋白质水平上被下调。

关键词：存活素小分子干扰RNA表达质粒乳腺癌细胞细胞周期细胞增殖

AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

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癌症 2002年第2期21卷 153-157页

作者：刘新光梁念慈广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度进化保守性的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的多种癌症是上调的。CK2可作为一种癌基因起作用,它的靶向抑制可用于肿瘤的治疗。为了寻找特异性CK2抑制剂,本文观察Tyrphostin中的AG1109对重组人蛋白激酶CK... 详细信息

背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度进化保守性的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的多种癌症是上调的。CK2可作为一种癌基因起作用,它的靶向抑制可用于肿瘤的治疗。为了寻找特异性CK2抑制剂,本文观察Tyrphostin中的AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用,以探讨其酶动力学机制。方法:利用基因工程克隆、表达和纯化而获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的犤γ-32P犦ATP或犤γ-32P犦GTP的犤32P犦放射活度来检测。结果:重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG1109对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,其IC50为9.7μmol/L,抑制作用稍大于已知的CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。AG1109对重组人CK2的动力学研究表明,它与GTP呈以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论:AG1109是一种很强的重组人CK2抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。

关键词：蛋白激酶CK2 重组蛋白全酶 Tyrphostins AG1109 酶动力学