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利用飞行时间质谱进行蛋白质和多肽C端序列测定

2010年

作者：梁宋平

梁宋平教授长期从事蛋白质与活性多肽的结构与功能研究以及蛋白质化学结构测定方法学研究。近年来，在蜘蛛毒素和蛋白岳组学研究领域连续获得到6项国家自然科学基金项目和两项“863”项目资助。本书收录了其关于“蛋白质与活性多肽探索... 详细信息

ISBN: (纸本)9787564801434

梁宋平教授长期从事蛋白质与活性多肽的结构与功能研究以及蛋白质化学结构测定方法学研究。近年来，在蜘蛛毒素和蛋白岳组学研究领域连续获得到6项国家自然科学基金项目和两项“863”项目资助。本书收录了其关于“蛋白质与活性多肽探索”的研究文集。

关键词：蛋白质文集多肽

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湖南师范大学自然科学学报 2001年第1期24卷 58-61页

作者：陈平梁宋平湖南师范大学生物化学与分子生物学系中国长沙410081

用羧肽酶Y水解蛋白质和多肽 ,结合飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定酶解后缩短肽的质量 ,根据相邻两肽峰的质量差别读出蛋白质和多肽的C端序列 ,在pmol水平下测定了人促肾上腺皮质激素片段以及人血管紧张肽片段 ,其中人促肾上腺皮质激... 详细信息

用羧肽酶Y水解蛋白质和多肽 ,结合飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定酶解后缩短肽的质量 ,根据相邻两肽峰的质量差别读出蛋白质和多肽的C端序列 ,在pmol水平下测定了人促肾上腺皮质激素片段以及人血管紧张肽片段 ,其中人促肾上腺皮质激素片段测到了C端

关键词：飞行时间质谱 C端测序羧肽酶Y 蛋白质多肽序列测定结构生理活性

反相高效液相色谱/电喷雾质谱法分析化学合成七肽粗产物

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分析化学 2004年第9期32卷 1219-1222页

作者：王贤纯梁宋平湖南师范大学生命科学学院湖南师范大学生命科学学院长沙410081

利用RP HPLC/ESI MS直接分析用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成方法在PHB树脂上偶联合成的一个七肽 (H2 N Tyr Val Asn Thr Asn Met Gly CO0H ,Mr 797.3 )粗产物。RP HPLC显示合成粗产物含有 1个主成分 ,4个次要成分和多个微量成分 ;与... 详细信息

利用RP HPLC/ESI MS直接分析用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成方法在PHB树脂上偶联合成的一个七肽 (H2 N Tyr Val Asn Thr Asn Met Gly CO0H ,Mr 797.3 )粗产物。RP HPLC显示合成粗产物含有 1个主成分 ,4个次要成分和多个微量成分 ;与之联用的电喷雾质谱则同步准确地测定出各成分的分子量 (m/z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析。结果证明 ,粗产物中的主成分即为目标七肽 ,另外几个主要副产物为七肽的氧化产物或残缺肽。

关键词：色谱-质谱多肽固相化学合成

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电喷雾串联质谱图的叠合与多肽序列分析

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 665-670页

作者：王贤纯梁宋平湖南师范大学生命科学学院湖南师范大学生命科学学院长沙410081

利用离子阱电喷雾串联质谱仪 ,在选择性改变某些仪器参数的条件下对模式分子Met 脑啡肽和自行固相化学合成的 7肽及其修饰产物、10肽和 2 0肽进行碎裂处理 ,从而获得一系列具有一定差异的串联质谱图。选择具有适当互补性的图谱进行叠合... 详细信息

利用离子阱电喷雾串联质谱仪 ,在选择性改变某些仪器参数的条件下对模式分子Met 脑啡肽和自行固相化学合成的 7肽及其修饰产物、10肽和 2 0肽进行碎裂处理 ,从而获得一系列具有一定差异的串联质谱图。选择具有适当互补性的图谱进行叠合处理 ,得到具有连贯性“三联套”(triplet)及“二联套”(doublet)碎片离子峰的叠合串联质谱图 ,据此可以方便准确地解析出多肽的氨基酸序列。实验结果表明 ,这种方法在多肽的质谱法测序中具有一定的实用性。

关键词：串联质谱序列测定图谱叠合多肽

三丁基硅异硫氰酸酯作偶联试剂进行蛋白质和多肽C端序列分析

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湖南师范大学自然科学学报 2001年第3期24卷 67-72页

作者：李军勇梁宋平湖南师范大学生物系中国长沙410081

报道了一种新的用于化学降解法蛋白质C 端序列分析的偶联试剂三丁基硅异硫氰酸酯 (tributylsilylisothiocyanate,TBuS ITC) .用氯化三丁基硅和硫氰酸钾反应生成三丁基硅异硫氰酸酯 ,然后以乙酸酐作活化试剂 ,TBuS ITC乙腈溶液作偶联试... 详细信息

报道了一种新的用于化学降解法蛋白质C 端序列分析的偶联试剂三丁基硅异硫氰酸酯 (tributylsilylisothiocyanate,TBuS ITC) .用氯化三丁基硅和硫氰酸钾反应生成三丁基硅异硫氰酸酯 ,然后以乙酸酐作活化试剂 ,TBuS ITC乙腈溶液作偶联试剂 ,以合成的 10肽为模型肽 ,在低纳摩尔的水平上测到了该肽的C端 4个氨基酸 .其初始产率为 5 3 .1% ,重复产率为 5 7.6% .

关键词：偶联试剂三丁基硅硫氰酸酯 C-端序列分析蛋白质多肽

表面等离子共振-质谱法对相互作用的生物分子在10^-^(15)mol水平的微量鉴定

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高等学校化学学报 2005年第1期26卷 68-72页

作者：聂松陈平梁宋平湖南师范大学生命科学学院长沙410081

利用生物传感芯片质谱法 (BIA/MS)对微球蛋白及其抗体的相互作用进行分析和鉴定 .将微球蛋白抗体偶联到芯片上 ,让微球蛋白溶液流过芯片表面 ,然后使用“三明治”结构的微再生方法把结合的微球蛋白从芯片上洗脱下来 ,再对其进行酶解及... 详细信息

利用生物传感芯片质谱法 (BIA/MS)对微球蛋白及其抗体的相互作用进行分析和鉴定 .将微球蛋白抗体偶联到芯片上 ,让微球蛋白溶液流过芯片表面 ,然后使用“三明治”结构的微再生方法把结合的微球蛋白从芯片上洗脱下来 ,再对其进行酶解及质谱鉴定 ,在 1 0 - 1 5mol水平得到了明确的结果 .

关键词：生物传感芯片质谱表面等离子共振生物芯片蛋白质组学

部分还原和分步序列测定法定位虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ二硫键

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高等学校化学学报 2003年第10期24卷 1815-1819页

作者：刘中华梁宋平湖南师范大学生命科学学院长沙410081

结合部分还原和分步序列测定法确定了虎纹捕鸟蛛毒素 - 的二硫键配对方式 .在 p H=3和 40℃的条件下与还原剂三羧甲基磷酸 ( TCEP)反应 1 0 min,利用 RP-HPLC分离并分别收集含有一对和两对二硫键被还原的中间体 ,分别与 0 .5 mol/L碘乙... 详细信息

结合部分还原和分步序列测定法确定了虎纹捕鸟蛛毒素 - 的二硫键配对方式 .在 p H=3和 40℃的条件下与还原剂三羧甲基磷酸 ( TCEP)反应 1 0 min,利用 RP-HPLC分离并分别收集含有一对和两对二硫键被还原的中间体 ,分别与 0 .5 mol/L碘乙酰胺溶液 ( p H=8.3 )反应 1 min,使游离巯基烷基化后 ,测定各中间体的氨基酸序列 ,从而确定虎纹捕鸟蛛毒素 - 的 3对二硫键分别为 Cys2 -Cys1 7,Cys9-Cys2 4和Cys-Cys 3 1 ( 1 -4,2 -5和 3 -6) .

关键词：部分还原分步序列测定法定位虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ 二硫键三羧甲基磷酸毒素多肽

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蛋白质固相序列分析技术新进展

生物化学与生物物理进展 1992年第3期19卷 181-185页

作者：梁宋平湖南省生物研究所长沙410006

综述了近年来蛋白质与多肽固相序列测定技术的主要进展。对衍生PVDF膜载体,CPG毛细管柱,SDS与双相凝脘电泳分离的蛋白质的固相序列分析,TN3S的应用和磷酸化修饰位点的确定,以及第二代固相蛋白质序列分析仪等作了扼要的介绍。

关键词：蛋白固相序列分析

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动物肽类神经毒素基因工程研究进展

湖南师范大学自然科学学报 2001年第1期24卷 78-83页

作者：聂东宋梁宋平李敏湖南师范大学生物化学与分子生物学系中国长沙410081

介绍了克隆动物肽类神经毒素cDNA和基因组基因克隆的方法 ,以及毒素cDNA结构和毒素蛋白前体的翻译后加工过程 .概述了毒素蛋白基因组基因的结构及其mRNA前体的加工过程 .综述了在毒素蛋白的基因工程方面已取得的进展。

关键词：肽类神经毒素 cDNA 基因克隆基因工程动物神经系统毒素蛋白基因

ω-芋螺毒素MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定

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湖南师范大学自然科学学报 2002年第3期25卷 68-71页

作者：汤辉王贤纯梁宋平湖南师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学系中国长沙410081

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω 芋螺毒素MVIIA和虎纹捕鸟蛛毒素 I的嵌合体HM 1 2 2 7,经过RP HPLC纯化和氧化复性 ,小鼠隔神经隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有微弱的神经毒活性 .实... 详细信息

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω 芋螺毒素MVIIA和虎纹捕鸟蛛毒素 I的嵌合体HM 1 2 2 7,经过RP HPLC纯化和氧化复性 ,小鼠隔神经隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有微弱的神经毒活性 .实验结果表明 ,ω CtxMVIIA和HWTX I的分子框架稳定 ,部分序列交换后仍能实现二硫键配对与折叠。

关键词： HM-1227 活性测定 ω-芋螺毒素MVIIA 虎纹捕鸟蛛毒素-I 嵌合体固相多肽合成多肽类神经毒素蛋白质工程