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金黄色葡萄球菌对实验动物的感染及其分子分型方法比较

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实验动物科学 2024年第3期41卷 85-89页

作者：吴运谱张泽辉崔子寅梁喜才王杏塔铭骏王春田辽宁中医药大学实验动物医学院沈阳110847 辽宁中医药大学中医学院沈阳110847

金黄色葡萄球菌作为一种人畜共患的条件性病原菌,其可对实验动物的质量及从业人员的健康构成严重的威胁,是屏障环境中必须监测和排除的病原体。采用准确、灵敏、快速的细菌分子分型方法,对于控制屏障环境中金黄色葡萄球菌具有重要意义... 详细信息

金黄色葡萄球菌作为一种人畜共患的条件性病原菌,其可对实验动物的质量及从业人员的健康构成严重的威胁,是屏障环境中必须监测和排除的病原体。采用准确、灵敏、快速的细菌分子分型方法,对于控制屏障环境中金黄色葡萄球菌具有重要意义。目前,金黄色葡萄球菌的分子分型方法有葡萄球菌染色体基因盒mec,葡萄球菌主蛋白A分型、多位点系列分型、脉冲场凝胶电泳分型、附属基因调节因子分型等。了解屏障系统中金黄色葡萄球菌对实验动物的感染状况,比较了不同分子分型方法的技术特征与应用,可为实验动物金黄色葡萄球菌的检测及分型提供参考。

关键词：实验动物金黄色葡萄球菌感染分子分型

地黄饮子对 APP /PS1 双转基因小鼠肠道菌群的影响

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时珍国医国药 2023年第1期34卷 74-77页

作者：陈靖王健王生化宁天一李阳迟海月梁喜才辽宁中医药大学辽宁沈阳110847

目的采用16S rRNA测序技术,检测地黄饮子对5月龄APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群多样性、相对丰度等差异。方法将转基因APP/PS1(-)小鼠设为正常组,其余转基因阳性APP/PS1(+)分为模型组、中药组和西药组。中药组灌胃给予地黄饮子24g·kg^(-... 详细信息

目的采用16S rRNA测序技术,检测地黄饮子对5月龄APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群多样性、相对丰度等差异。方法将转基因APP/PS1(-)小鼠设为正常组,其余转基因阳性APP/PS1(+)分为模型组、中药组和西药组。中药组灌胃给予地黄饮子24g·kg^(-1),西药组灌胃给予安理申0.8mg·kg^(-1),正常组ig给予同等体积的生理盐水,1次/d,连续28 d。提取试剂盒抽提各组粪便样本中DNA,对V3-V4区进行PCR扩增,再使用Illumina Miseq PE300高通量测序平台进行Paired-end测序。最后对数据进行生物信息学分析,结果本研究共得到1003个OTUs。物种累积曲线表明本研究所收集的样本量充足。Alpha多样性分析,中药组与其余组相比显著提高了菌群的多样性,Beta多样性分析,各组数据组间差异明显,物种韦恩图显示,中药组和西药组均能降低APP模型小鼠的微生物菌群OTU丰度,但较正常组增加了OTU丰度。菌种分类水平提示地黄饮子更倾向提升菌群的多样性,尤其是在厚壁菌门的菌种,优势菌种的比例更接近正常组;LEfSe分析中药组的优势菌群是梭菌纲o_Clostridia_vadinBB60_group,疣微菌g_UCG_005。结论地黄饮子可能通过肠道菌群改变菌群差异性和多样性,提高厚壁菌门、芽孢杆菌属、乳杆菌属、毛螺旋菌属等菌种丰度,以肠脑轴的方式改善AD的认知症状。

关键词：肠-脑轴 16S rRNA 地黄饮子 App小鼠

从中医药角度探讨阿尔茨海默病与糖尿病的关系

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河北中医 2023年第3期45卷 478-482页

作者：陈靖梁喜才王卉辽宁中医药大学教学实验中心辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学实验动物中心辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110847

目前研究认为,阿尔茨海默病(AD)与糖尿病(DM)关系密切,DM有可能增加患AD的风险,甚至认为AD是一种大脑糖尿病,称之为3型糖尿病,与2型糖尿病(T2DM)关系密切,二者存在一致的疾病生理机制。本文从中医药病机和临床科研角度出发,探讨AD与DM... 详细信息

目前研究认为,阿尔茨海默病(AD)与糖尿病(DM)关系密切,DM有可能增加患AD的风险,甚至认为AD是一种大脑糖尿病,称之为3型糖尿病,与2型糖尿病(T2DM)关系密切,二者存在一致的疾病生理机制。本文从中医药病机和临床科研角度出发,探讨AD与DM在中医病机及临床方药应用、实验研究的共性,指出随着对二者发病机制和中医理论应用研究的深入,可挖掘出更多AD与DM两者共同的机制和有效方药,为多元化研究治疗AD和DM,并为异病同治、早期干预提供新的方向和思路。

关键词：阿尔茨海默病糖尿病中医药疗法

基于肠脑轴探讨地黄饮子对APP/PS1转基因阳性小鼠神经功能的改善作用及机制

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中国药房 2022年第24期33卷 2978-2984页

作者：陈靖梁喜才王健王生化宁天一辽宁中医药大学教学实验中心沈阳110847 辽宁中医药大学实验动物中心沈阳110847

目的探讨地黄饮子对APP/PS1转基因阳性小鼠神经功能的改善作用及可能机制。方法将APP/PS1转基因阳性小鼠随机分为APP/PS1阳性模型组,地黄饮子低、中、高剂量(12、24、48 g/kg,按生药量计)组和西药组(盐酸多奈哌齐0.8 mg/kg),并以APP/PS... 详细信息

目的探讨地黄饮子对APP/PS1转基因阳性小鼠神经功能的改善作用及可能机制。方法将APP/PS1转基因阳性小鼠随机分为APP/PS1阳性模型组,地黄饮子低、中、高剂量(12、24、48 g/kg,按生药量计)组和西药组(盐酸多奈哌齐0.8 mg/kg),并以APP/PS1转基因阴性小鼠作为APP/PS1阴性正常组,每组6只。各药物组小鼠灌胃相应药液,APP/PS1阳性模型组和APP/PS1阴性正常组小鼠灌胃同体积生理盐水,每天1次,连续28 d。末次给药后,考察各组小鼠的学习和记忆能力,肠道菌群多样性(仅地黄饮子中剂量组)、海马组织神经细胞病理改变,以及Bcl-2、Bax、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达情况。结果与APP/PS1阳性模型组比较,地黄饮子中、高剂量组小鼠的逃逸潜伏期显著缩短,穿过原平台次数显著增加(P<0.05)。与其余组比较,地黄饮子中剂量组的Chao1指数更低,Shannon指数更高(P<0.05),且其微生物菌群的操作分类单位(OTU)丰度有所降低,优势菌种为梭菌纲o_Clostridia_vadinBB60_group、疣微菌g_UCG_005。与APP/PS1阳性模型组比较,地黄饮子中、高剂量组小鼠海马CA1区神经细胞病理改变有所改善,其海马组织中Bcl-2、BDNF蛋白的表达均显著上调,Bax蛋白的表达均显著下调(P<0.05)。结论地黄饮子可增强肠道菌群多样性,改变优势菌种,并能抑制大脑神经细胞凋亡,提高BDNF水平;其作用机制可能是借助肠脑轴来保护神经细胞,从而提高APP/PS1阳性模型小鼠的学习和认知能力。

关键词：地黄饮子肠脑轴神经功能学习记忆能力 APP/PS1转基因阳性小鼠

任务驱动教学法在《医学实验动物学》教学中的应用

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辽宁中医药大学学报 2022年第8期24卷 209-212页

作者：吴运谱李敏梁喜才宁天一弓彦王春田辽宁中医药大学辽宁沈阳110847

旨在探索驱动教学法在中医药院校硕士研究生课程《医学实验动物学》中的应用。扼要介绍任务驱动教学法的特点,基于该方法进行了任务设计,探讨其具体实践及其应用效果。在《医学实验动物学》教学中,任务驱动教学法的应用有助于教师的专... 详细信息

旨在探索驱动教学法在中医药院校硕士研究生课程《医学实验动物学》中的应用。扼要介绍任务驱动教学法的特点,基于该方法进行了任务设计,探讨其具体实践及其应用效果。在《医学实验动物学》教学中,任务驱动教学法的应用有助于教师的专业素质提升,有利于学生学习兴趣和科研能力提升及主观能动性培养。任务驱动教学法值得在《医学实验动物学》课程教学中进行推广与应用。

关键词：任务驱动教学法实验动物学教学研究

基于非标记定量蛋白质组学技术筛选阿尔茨海默病细胞模型的生物标记物

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辽宁中医药大学学报 2022年第8期24卷 93-98页

作者：张林任路方德宇马贤德王旭王玥梁喜才苗君静辽宁中医药大学辽宁沈阳110847

目的研究Aβ诱导SH-SY5Y细胞构建阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)细胞模型蛋白质组学,并筛选该细胞模型潜在的生物标记物。方法将培养的SH-SY5Y细胞分为正常对照组和Aβ寡聚体诱导AD细胞模型组,通过非标记液相色谱-串联质谱技术... 详细信息

目的研究Aβ诱导SH-SY5Y细胞构建阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)细胞模型蛋白质组学,并筛选该细胞模型潜在的生物标记物。方法将培养的SH-SY5Y细胞分为正常对照组和Aβ寡聚体诱导AD细胞模型组,通过非标记液相色谱-串联质谱技术对正常对照组和AD组进行比较蛋白质组学分析,并结合生物信息学分析,对筛选出的差异蛋白进行GO富集分析、KEGG通路注释、PPI网络构建。结果成功鉴定到2512个蛋白质,根据符合表达差异倍数大于2倍(上下调)和统计学显著性(P<0.05)标准进行筛选,得到了336个差异蛋白质,B组中共172个表达上调的蛋白,164个表达下调的蛋白。差异蛋白的KEGG通路注释结果显示,阿尔茨海默通路(hsa05010Alzheimer’s disease,P<0.05)通路发生显著性变化,结合GO富集分析,在鉴定到的差异蛋白中,发现APP、HSD17B10、NDUFA5、LPL表达量在AD细胞模型组与正常对照组中表达具有显著性差异。结论APP、HSD17B10、NDUFA5、LPL具有作为Aβ1-42诱导SH-SY5Y构建AD细胞模型生物标记物的潜能。

关键词：阿尔茨海默病蛋白质组学生物标记物

蛇床子素通过上调微RNA-101a-3p抑制阿尔茨海默病细胞淀粉样前体蛋白表达

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浙江大学学报（医学版） 2018年第5期47卷 473-479页

作者：蔺莹姚璎珈梁喜才时悦孔亮肖洪贺吴雨桐倪颖男杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的:研究阿尔茨海默病细胞模型中蛇床子素抑制淀粉样前体蛋白(APP)的作用及机制。方法:脂质体2000转染建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型。利用MTT和乳酸脱氢酶(LDH)法检测蛇床子素对APP高表达细胞的存活率和损伤程度的影响。利用基因芯... 详细信息

目的:研究阿尔茨海默病细胞模型中蛇床子素抑制淀粉样前体蛋白(APP)的作用及机制。方法:脂质体2000转染建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型。利用MTT和乳酸脱氢酶(LDH)法检测蛇床子素对APP高表达细胞的存活率和损伤程度的影响。利用基因芯片技术筛选给予蛇床子素治疗后差异表达的微RNA(miRNA),然后通过生物信息学分析预测与差异表达miRNA靶向结合的基因。细胞内转入差异表达miRNA的抑制剂,然后采用免疫荧光细胞化学法观察细胞中APP、β淀粉样蛋白(Aβ)表达情况,RT-PCR法检测细胞中APP mRNA表达。结果:实验成功构建了APP高表达的阿尔茨海默病细胞模型。MTT和LDH法检测结果显示,蛇床子素对于APP高表达的细胞具有一定的保护作用,可以减轻细胞的损伤。miRNA-101a-3p是蛇床子素调控较明显的miRNA,其与APP的3'非翻译区靶向结合。与模型对照组比较,miR-101a-3p抑制剂组APP和Aβ蛋白荧光强度增加,APP mRNA表达量增加(均P<0.01);加入蛇床子素后细胞中APP和Aβ蛋白荧光强度降低,APP mRNA表达量减少(均P<0.01)。结论:在阿尔茨海默病细胞模型中,蛇床子素通过上调miR-101a-3p抑制APP表达。

关键词：阿尔茨海默病蛇床子素/药理学微RNAs 淀粉样β蛋白前体蛋白质阵列分析芯片分析技术

蛇床子素上调miRNA-9抑制BACE-1表达治疗阿尔茨海默病

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中国药理学通报 2019年第4期35卷 524-529页

作者：蔺莹姚璎珈梁喜才时悦倪颖男吴雨桐杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的探讨蛇床子素上调miRNA-9治疗AD的作用机制。方法基因芯片技术筛选蛇床子素治疗后差异表达的microRNAs;数据库和Cytoscape预测miRNA-9调控的靶基因;脂质体2000建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型,MTT法检测蛇床子素对细胞活力的影响;将... 详细信息

目的探讨蛇床子素上调miRNA-9治疗AD的作用机制。方法基因芯片技术筛选蛇床子素治疗后差异表达的microRNAs;数据库和Cytoscape预测miRNA-9调控的靶基因;脂质体2000建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型,MTT法检测蛇床子素对细胞活力的影响;将miRNA-9抑制剂转入到APP高表达的SH-SY5Y细胞中,RT-PCR法检测各组miR-9、BACE-1 mRNA的表达情况;Western blot方法检测细胞中BACE-1蛋白的表达情况。结果数据库结果显示,蛇床子素调控的miRNA-9可以与BACE-1靶向结合。本实验成功建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型。MTT结果显示,50μmol·L^(-1)蛇床子素对细胞有较好的保护作用。RT-PCR结果显示,蛇床子素可以上调miR-9的表达,抑制剂组miRNA-9表达最低。与模型组相比,蛇床子素可以抑制BACE-1 mRNA和蛋白的表达,且抑制剂组的BACE-1 mRNA和蛋白表达最多。结论蛇床子素治疗阿尔茨海默病可能与上调miRNA-9,从而抑制BACE-1表达有关。

关键词：蛇床子素基因芯片 miRNA-9 生物信息学分析 β-分泌酶阿尔茨海默病

人参二醇对APP-SH-SY5Y细胞中Tau蛋白磷酸化及Fyn/GluN2B信号通路的影响

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中国药房 2021年第12期32卷 1485-1491页

作者：梁喜才蔺莹肖洪贺孔亮杨静娴辽宁中医药大学实验动物中心沈阳110847 辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿... 详细信息

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿色荧光蛋白(GFP)-SH-SY5Y细胞模型(对照细胞),通过检测细胞中β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的表达来验证APP-SH-SY5Y细胞模型是否构建成功。以GFP-SH-SY5Y细胞为对照,采用CCK-8法检测5、10、20、30、40μmol/L的PD和125、250、500、1000、2000 nmol/L的PP2(Fyn抑制剂,阳性对照)作用24 h对APP-SH-SY5Y细胞存活率的影响,以确定最佳给药浓度。以APP-SH-SY5Y细胞为对象,分别检测最佳浓度PD、PP2作用24后细胞中Ca2+浓度及磷酸化Tau蛋白(p-Tau)/Tau、磷酸化非受体酪氨酸激酶Src(p-Src)/Fyn、磷酸化谷氨酸受体2B(p-GluN2B)/GluN2B比值。结果:分子模拟对接结果显示,PD可靶向结合Fyn蛋白。与GFP-SH-SY5Y细胞比较,APP-SH-SY5Y细胞中Aβ1-42蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。PD和PP2的最佳作用浓度分别为20μmol/L和500 nmol/L。20μmol/L PD、500 nmol/L PP2均可显著升高细胞的存活率,显著降低细胞中Ca2+浓度以及p-Tau/Tau、p-Src/Fyn、p-GluN2B/GluN2B比值。结论:PD可通过抑制Fyn/GluN2B信号通路来降低APP-SH-SY5Y细胞中Ca2+浓度及Tau蛋白的磷酸化水平。

关键词：人参二醇转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y Tau蛋白磷酸化非受体酪氨酸激酶Fyn/谷氨酸受体2B信号通路