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甘蔗杆状病毒SCBV P2蛋白核酸结合活性分析及关键结构域鉴定

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基因组学与应用生物学 2023年

作者：娄义念梁凯莉刘靖颖王致远许雄彪亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西甘蔗生物学重点实验室

甘蔗杆状病毒(Sugarcane bacilliform virus， SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解病毒致病机理及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗... 详细信息

甘蔗杆状病毒(Sugarcane bacilliform virus， SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解病毒致病机理及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗中分离获得了SCBV的全长基因组序列，并开展了其ORF2（Open reading frame 2）编码的未知蛋白P2功能研究。通过原核表达SCBV P2蛋白，经体外核酸亲和结合试验分析，发现SCBV编码的P2蛋白能以序列非特异性方式与同源和异源核酸亲和结合，进一步对P2中预测的类卷曲螺旋结构（Coiled-coil like domain）及C-端保守的赖氨酸、脯氨酸富集区域进行缺失及点突变分析，凝胶阻滞试验发现，随着C-端逐步截短，P2突变体蛋白与核酸结合活性也逐渐减弱，其C-端保守的含脯氨酸、赖氨酸的21个氨基酸（aa）对P2与核酸结合是必需的。同时，在P2蛋白与核酸的相互作用中，Coiled-coil like domain被证明是不可或缺的。进一步酵母双杂交实验证明P2能与自身互作，且P2 C-端保守21 aa及Coiled-coil like domain的缺失或替换直接影响了P2蛋白的自身互作。综上所述，本研究发现SCBV编码的P2蛋白是一个序列非特异性的核酸结合蛋白，且Coiled-coil like domain和C-端保守的富含赖氨酸、脯氨酸区域通过影响其自身互作而影响其核酸结合活性，结果为进一步深入研究P2功能奠定了基础。

关键词：甘蔗杆状病毒核酸结合凝胶阻滞试验(EMSA) 卷曲螺旋

甘蔗杆状病毒P2蛋白核酸结合活性分析及关键结构域鉴定

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基因组学与应用生物学 2023年第12期42卷 1353-1363页

作者：娄义念梁凯莉刘靖颖王致远许雄彪广西大学广西甘蔗生物学重点实验室南宁530005 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004

甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解该病毒致病机制及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗... 详细信息

甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解该病毒致病机制及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗中分离获得了SCBV的全长基因组序列,并开展了其开放阅读框2(open reading frame 2, ORF2)编码的未知蛋白P2的功能研究。通过原核表达SCBV P2蛋白并经体外核酸亲和结合试验分析,发现SCBV编码的P2蛋白能以序列非特异性方式与同源或异源核酸亲和结合。进一步对P2蛋白中预测的coiled-coil like domain及C-端保守的脯氨酸、赖氨酸富集区域进行缺失及点突变分析,以及凝胶阻滞试验发现,随着C-端逐步截短,P2突变体蛋白与核酸结合的活性也逐渐减弱,其C-端保守的含脯氨酸、赖氨酸的21个氨基酸(amino acids,aa)对P2蛋白与核酸结合是必需的。同时,在P2蛋白与核酸的相互作用中,coiled-coil like domain被证明是不可或缺的。进一步酵母双杂交实验证明P2蛋白能与自身互作,且P2 C-端保守的21个氨基酸及coiled-coil like domain的缺失或替换直接影响了P2蛋白的自身互作。综上所述,本研究发现SCBV编码的P2蛋白是一个序列非特异性的核酸结合蛋白,且coiled-coil like domain和C-端保守的富含脯氨酸、赖氨酸区域通过影响其自身互作而影响其核酸结合活性。研究结果为进一步深入研究P2蛋白功能奠定了基础。

关键词：甘蔗杆状病毒核酸结合凝胶阻滞试验(EMSA) coiled-coil like domain

Sirt6改善阿霉素诱导的小鼠局灶性节段性肾小球硬化的足细胞损伤

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Sirt6改善阿霉素诱导的小鼠局灶性节段性肾小球硬化的足细胞损伤

作者：梁凯莉山东大学

学位级别：硕士

局灶节段性肾小球硬化(focal segmental ***)是儿童和成人肾病综合征(nephroticsyndrome,NS)常见的肾小球疾病,是导致终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因之一,而足细胞病变是FSGS的主要病理表现。足细胞是一种高度分... 详细信息

局灶节段性肾小球硬化(focal segmental ***)是儿童和成人肾病综合征(nephroticsyndrome,NS)常见的肾小球疾病,是导致终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因之一,而足细胞病变是FSGS的主要病理表现。足细胞是一种高度分化的肾脏实质细胞,与肾小球内皮细胞以及基底膜共同构成肾小球的滤过屏障,维持肾脏的滤过功能。因此寻找有效的治疗和改善足细胞损伤的靶点具有非常重要的意义。近年来的研究表明,表观遗传修饰在局灶节段性肾小球硬化中起到重要作用。其中以乙酰化为代表的组蛋白修饰受到越来越多的关注。组蛋白乙酰化修饰是由组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferase,HAT)与组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases,HDACs)共同调控。组蛋白去乙酰化酶在人体中共发现18种,分为四个亚家族。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ类是Zn2+依赖性的组蛋白去乙酰化酶,而Ⅲ类亚家族,也就是Sirtuin家族,其酶活性依赖于NAD+水平。SIRTs家族包括7个成员Sirt1-Sirt7。虽然已有研究表明Sirt1可以通过抗凋亡、抗炎症等方式发挥肾脏保护作用,但是SIRTs家族在局灶节段性肾小球硬化中的作用尚未报道。研究目的1.明确SIRTs家族各成员在局灶节段性肾小球硬化中的表达模式,并进一步探讨Sirt6是否参与局灶节段性肾小球硬化中的足细胞损伤。2.初步阐明Sirt6在局灶节段性肾小球硬化足细胞损伤中的保护作用及机制。研究方法和结果第一部分:Sirt6在局灶节段性肾小球硬化中的表达和作用***6在局灶节段性肾小球硬化肾脏中的表达通过小鼠尾静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)构建阿霉素肾病小鼠模型,作为局灶节段性肾小球硬化动物模型。通过利用蛋白免疫印迹(western blot,WB)检测Sirt1-Sirt7在阿霉素肾病小鼠肾脏皮质中蛋白表达变化。结果显示在阿霉素肾病小鼠肾脏中Sirt1、Sirt5以及Sirt6的表达水平出现不同程度的下降。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)实验检测阿霉素肾病小鼠的足细胞中Sirt6的表达变化。结果显示Sirt6在阿霉素肾病肾脏足细胞中的表达水平显著下降。2.在体外培养的各种肾脏实质细胞中检测ADR刺激下Sirt6的蛋白表达变化体外培养人源足细胞(human podocyte cell,HPC)、肾小球内皮细胞(glomerular endothelial cell,GENC)、系膜细胞(mesangial cell,MC)以及肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cell,HK-2)分别给予ADR刺激24小时后,抽提细胞内蛋白,进行WB分析,检测在ADR刺激下Sirt6在各种肾脏实质细胞中的蛋白表达变化。结果显示,足细胞中Sirt6的表达水平显著下降,内皮细胞、肾小管上皮细胞中Sirt6的表达也出现不同程度的下降,系膜细胞中Sirt6的表达没有明显变化。3.足细胞特异性敲除Sirt6的小鼠的构建利用Cre-Loxp系统构建足细胞特异性敲除Sirt6(Cre+/Sirt6fl/fl 的小鼠,通过提取鼠尾DNA基因型鉴定确证敲除小鼠的构建成功;另外,利用肾小球分离技术对敲除小鼠进行肾小球分离,然后采用Real-time RT-PCR检测肾小球内Sirt6的mRNA水平,结果显示在足细胞Sirt6特异性敲除小鼠的肾小球中Sirt6的mRN A水平明显下降。4.足细胞敲除Sirt6加重阿霉素肾病小鼠足细胞损伤C57BL/6J野生雄性小鼠与足细胞特异性敲除Sirt6(Cre+/Sirt6fl/fl 雄性小鼠随机分为四组,构建FSGS动物模型。检测尿白蛋白/肌酐比值,并进行PAS染色。结果显示足细胞特异性敲除Sirt6加重阿霉素肾病的肾脏损伤。透射电镜结果显示敲除Sirt6加重阿霉素肾病小鼠足突的融合、脱落。IF标记足细胞的裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin,结果显示敲除足细胞Sirt6明显下调阿霉素肾病足细胞中Nephrin和Podocin表达水平。***6改善阿霉素肾病足细胞损伤通过肾脏注射Sirt6慢病毒表达载体,检测肾小球Sirt6mRNA水平,从而确认过表达Sirt6动物模型构建成功。构建阿霉素肾病模型后,检测小鼠尿白蛋白/肌酐比值并进行PAS染色。结果显示过表达Sirt6减轻阿霉素肾病肾脏损伤。透射电镜观察足细胞形态,结果显示过表达Sirt6减轻阿霉素肾病足突的融合、脱落,改善足细胞损伤。IF观察不同处理组小鼠足细胞特异性蛋白Nephrin和Podocin蛋白表达水平,结果表明过表达Sirt6

关键词：局灶节段性肾小球硬化 Sirt6 足细胞损伤 Notch信号

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鼻科学在台湾

中国医学文摘（耳鼻咽喉科学） 2011年第3期26卷 123-124页

作者：梁凯莉台中荣民总医院耳鼻喉部阳明大学医学系

1简介20世纪90年代后期,由于鼻腔鼻窦解剖学和生理学的知识日渐累积及内镜技术开始应用于鼻科手术,鼻科学在西方国家进展很快。内镜手术由于功能性高、患者术后恢复迅速而成为鼻科手术的主流，

关键词：耳鼻咽喉科学鼻疾病内窥镜检查外科整形全民健康保险台湾地区

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心理干预对冠心病病人不良心理状态的影响

全科护理 2010年第34期8卷 3148-3149页

作者：梁凯莉太原钢铁公司职工总医院

冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是近年来影响人类健康的常见病,随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变及对相关知识的缺乏,冠心病的发病率不断增加.新旧冠心病病人入院后都存在不同程度的不良心理状态,对治疗和护理增加了难度。[... 详细信息

冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是近年来影响人类健康的常见病,随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变及对相关知识的缺乏,冠心病的发病率不断增加.新旧冠心病病人入院后都存在不同程度的不良心理状态,对治疗和护理增加了难度。[第一段]

关键词：心理干预冠心病不良心理

局域和非局域耦合非线性薛定谔方程组的非简并孤子及其动力学

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局域和非局域耦合非线性薛定谔方程组的非简并孤子及其动力学

作者：耿凯莉浙江农林大学

学位级别：硕士

本论文运用改进的Hirota方法分别求得了二阶耦合混合导数非线性薛定谔方程(2-CMDNLSE)、非局域非线性薛定谔方程(NNLSE)、非局域导数非线性薛定谔方程(NCLLE)以及逆时间NNLSE的非简并单、双孤子解。孤子碰撞在光计算、光频梳、光通信等... 详细信息

本论文运用改进的Hirota方法分别求得了二阶耦合混合导数非线性薛定谔方程(2-CMDNLSE)、非局域非线性薛定谔方程(NNLSE)、非局域导数非线性薛定谔方程(NCLLE)以及逆时间NNLSE的非简并单、双孤子解。孤子碰撞在光计算、光频梳、光通信等领域具有重要应用价值,但是其过程中不同孤子态共存的动力学机制尚未阐明。本论文拟揭示非简并孤子在不同条件下的孤子碰撞动力学。本论文讨论了相关光孤子的动力学特性和非线性控制问题,获得以下结论:首先,本论文发现2-CMDNLSE的单孤子的强度、振幅和速度由不同的波数决定,非简并双孤子发生碰撞时存在完全或部分的能量转换。孤子分子与非简并双孤子碰撞时发生了能量的重新分布。其次,通过带有辅助函数的非标准Hirota方法,我们对NNLSE进行双线性化,导出了非简并双孤子解的一些新的相互作用,即孤子在局域和非局域的两个分量中有相同的强度变化,且整个系统总能量守恒。接着,我们发现NCLLE除了存在一般的非简并单孤子形态外,还存在非简并的准呼吸束缚态孤子。通过详细地讨论非简并双孤子相互作用时产生的时间干涉和空间干涉现象,我们发现空间干涉的可见范围更大,而时间干涉可见度相对更低;孤子的速度差越大,空间干涉可见范围越小。我们进一步将结果退化到简并孤子,发现非局域条件下的简并孤子与局域条件下的干涉现象一致。最后,我们还得到了逆时间NNLSE的非简并亮单、双孤子解和简并亮暗偶次孤子解。除了一般的非简并单孤子,我们发现也存在非简并的准呼吸束缚态孤子;对于非简并双孤子,我们发现两个分量中的能量变化不同,但是系统的总能量守恒;对于简并亮暗孤子,我们发现其存在弹性碰撞。这些结果为局域和非局域波模型中的简并和非简并孤子相互作用及动力学行为的研究提供了理论基础,还可以应用于提高光通信系统性能、拓展非线性光学应用、促进光学器件创新等方面,对于推动光学技术的发展具有积极作用。

关键词：改进的Hirota方法非简并孤子孤子分子孤子碰撞干涉现象

全民健身数智化转型背景下智能可穿戴设备用户数据隐私的保护

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体育学刊 2024年第4期031卷 64-72页

作者：刘谢慈林凯莉湖南工业大学法学院

为优化智能可穿戴设备在全民健身数智化转型中的应用模式，系统梳理其在健身场景转换中的应用现状后发现，智能可穿戴设备在用户数据隐私的保护上存在数据分级保护机制难以落实、知情同意原则实质架空、用户数据隐私保护意识薄弱、传统... 详细信息

为优化智能可穿戴设备在全民健身数智化转型中的应用模式，系统梳理其在健身场景转换中的应用现状后发现，智能可穿戴设备在用户数据隐私的保护上存在数据分级保护机制难以落实、知情同意原则实质架空、用户数据隐私保护意识薄弱、传统数据隐私保护方式滞后等困境，并据此提出优化数据场景化分级保护机制、加强动态知情同意体系构建、完善隐私保护用户共治模式、改进隐私保护技术等数据隐私保护构想，进而推动全民健身数智化的规范有序发展。

关键词：体育法全民健身智能可穿戴设备数据隐私数智化

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民航客机推力目标值计算方法

航空动力学报 2024年第7期39卷 285-298页

作者：李仪苏三买梁凯恒朱天宇西北工业大学动力与能源学院西安710072

推力管理是民航客机飞行管理系统的重要功能之一.在整个航线内,飞行管理系统根据不同飞行航段以及不同飞行状态,确定飞机对发动机的推力需求,并以此作为推力目标值形成发动机油门杆控制的指令,其中推力目标值的计算是推力管理的核心.针... 详细信息

推力管理是民航客机飞行管理系统的重要功能之一.在整个航线内,飞行管理系统根据不同飞行航段以及不同飞行状态,确定飞机对发动机的推力需求,并以此作为推力目标值形成发动机油门杆控制的指令,其中推力目标值的计算是推力管理的核心.针对民航客机各飞行航段的特点,采用飞行动力学方法对飞机爬升、巡航、下降三个航段中不同飞行方式下的推力目标值计算方法进行研究.以波音737-800实际飞行记录数据为算例,进行推力目标值计算方法仿真对比验证,结果表明:所计算的推力目标值变化趋势与飞行性能理论相符,典型航段推力目标值计算与实际飞行数据的对比误差不大于3%.所提出的推力目标值计算方法可为民航客机推力管理系统设计提供参考.

关键词：民航客机推力管理推力目标值计算飞行性能飞行动力学

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小微企业减税难减负现象及其原因探究

经济学动态 2024年第6期 81-96页

作者：尹恒马凯莉中国人民大学国家发展与战略研究院 100872 中国人民大学财政金融学院 100872

本文以2009年实施的小微企业增值税减税为政策冲击,构建双重差分模型探究小微企业的减税效果。研究发现:存在减税难减负现象,即小微企业增值税减税能够有效减轻其流转税税负,但与之相伴随的是所得税税负和社保费用负担同步加重。综合结... 详细信息

本文以2009年实施的小微企业增值税减税为政策冲击,构建双重差分模型探究小微企业的减税效果。研究发现:存在减税难减负现象,即小微企业增值税减税能够有效减轻其流转税税负,但与之相伴随的是所得税税负和社保费用负担同步加重。综合结果是小微企业的总税费负担并没有显著变化,从而导致其减税获得感不明显。减税难减负的原因在于减税引起财政压力和存在征管空间:地方政府因减税导致的财政压力加大,会利用存在的企业所得税和社保费用征管空间,加强征管力度,导致企业所得税税负和社保费负担增加。财政压力和征管空间越大,企业所得税税负和社保费负担增加越明显。本文的研究能够为改善减税效果、进一步完善小微企业减税减负政策提供重要的决策参考。

关键词：小微企业增值税减税总税费负担财政压力征管空间