检索结果-南通市图书馆

作者：梁伟娜山东大学

学位级别：硕士

研究背景:恶性肿瘤能浸润其它组织并形成瘤块,是引起人类死亡的重大疾病之一。研究发现,肿瘤细胞产生和释放多种水解酶降解细胞外基质(ECM)或基底膜(BM)可能是浸润与转移的主要内容。在这些水解酶中,基质金属蛋白酶(MMPs)尤其是明胶酶A... 详细信息

研究背景:恶性肿瘤能浸润其它组织并形成瘤块,是引起人类死亡的重大疾病之一。研究发现,肿瘤细胞产生和释放多种水解酶降解细胞外基质(ECM)或基底膜(BM)可能是浸润与转移的主要内容。在这些水解酶中,基质金属蛋白酶(MMPs)尤其是明胶酶A和B(MMP-2,-9)起到关键作用。明胶酶参与调控ECM的更新,维持细胞的稳定性,已被证明参与肿瘤发生、发展的多个环节,抑制该酶活性就能有效地控制肿瘤发生、发展和转移。所以,以明胶酶为靶点来设计、合成明胶酶抑制剂已经成为抗癌药物研究的热点课题。目前存在的筛选MMPs抑制剂的方法以检测酶活性为主,但是一些传统方法如酶谱分析法、免疫分析法、荧光底物分析法等存在不可避免的缺点,不适合大量、多组分化合物的筛选。与此同时,组合化学技术大大加快了药物及其先导化合物的合成速度,所以,建立一个简便快速的筛选平台势在必行。鉴于以上原因,本文建立了固定化明胶酶分子生物色谱法,并应用于一批化合物的初步筛选。实验方法:分别选择色谱硅胶、整体柱为两种载体,制备固定化明胶酶反应器。以硅胶为载体的固定化明胶酶反应器的制备:L(2)正交试验考察固定化明胶酶的制备条件,考察因素包括明胶酶浓度、明胶酶量、缓冲溶液浓度以及pH,考察指标为键合率、酶活性,之后考察固定化明胶酶最佳活性条件。在柱上经键合、冲洗、饱和,将明胶酶键合到分别含环氧基或醛基的色谱硅胶上,计算键合率。进样底物,通过接取流出液比色和加入抑制剂比较产物峰面积变化两种方法确定产物峰的位置,考察流速对产物的影响,测定酶的特征参数——Km,考察柱子的稳定性。以整体柱为载体的固定化明胶酶反应器的制备:采用溶胶-凝胶法,TMOS为硅胶原料,PEG为相分离促进剂,乙酸、氨水和DMF分别作为水解催化剂、中孔制孔剂和干燥控制剂制备整体柱。从凝胶化时间、TMOS/PEG、制孔剂浓度和陈化时间等方面考察制备工艺,以骨架和通孔尺寸、中孔尺寸、硅羟基含量等作为考察指标。经聚四氟乙烯包覆安装于色谱系统中,测得孔隙率。再通过环氧基或醛基偶联将明胶酶键合到整体柱上,进样底物,确定产物峰的位置,考察酶浓度对键合率影响、流速对产物的影响,测定其Km,考察柱子稳定性。筛选抑制剂:以LY52为阳性对照,用以上建立的方法测定其IC,与文献值和比色法测定值比较,同时制作量-效曲线,验证筛选模型的可行性,并考察精密度。用该两种色谱法测定另外439个化合物的IC,并与比色法比较。实验结果:正交设计试验所得固定化明胶酶制备条件为:明胶酶0.5mg/mL,缓冲液0.05mol/L,pH6.0,固定化明胶酶最佳活性条件为:底物300μl、pH8.5、42℃。明胶酶与硅胶反应的键合率分别为28.6mg/g(环氧基)、68.4 mg/g(醛基)。确定保留时间为37.631min的峰为产物峰,最佳流速为0.2mL/min,Km分别为0.63±0.006mmol/L(环氧基)、0.54±0.012mmol/L(醛基),柱子在一周内稳定。综合比较键合率、Km、稳定性发现,醛基为活性基团制备固定化酶反应器更好。溶胶-凝胶法制备整体柱的条件为:TMOS/PEG3.77;120℃1.0mol/L氨水处理:陈化一天,所得整体柱骨架尺寸1.3μm、通孔尺寸2.5μm、中孔尺寸14nm、比表面积264m/g、硅羟基0.2377 mmol/g、孔隙率81%。明胶酶与整体柱键合,酶浓度以0.3mg/mL最佳,键合率分别为88.6mg/g(环氧基)、90.4 mg/g(醛基)。确定37.409min峰为产物峰,最佳流速为0.2mL/min,Km分别为0.28±0.005mmol/L(环氧基)、0.21±0.008mmol/L(醛基),柱子在一个月内稳定。综合比较键合率、Km、稳定性发现,两种活性基团差别不大,因环氧基制备简单,选择环氧基偶联整体柱制备固定化酶反应器。色谱法测定LY52的IC分别为0.018±0.0001μmol/L(色谱硅胶)、0.021±0.0001μmol/L(整体柱),比色法测得值和文献值分别为0.023±0.0004μmol/L、0.027±0.0004μmol/L,三者基本一致,量-效关系也良好,表明筛选模型是可行的。对另外39个化合物,两种色谱法和比色法测定结果整体趋势保持一致,但总体上以硅胶为载体的色谱法结果略微偏高,整体柱为载体的色谱法筛选效果更好。结论:本文分别以色谱硅胶、硅胶整体柱——两种载体建立的筛选方法是可行的,能够实现对大量多组分化合物快速筛选。

关键词：基质金属蛋白酶明胶酶抑制剂分子生物色谱固定化酶反应器整体柱药物筛选

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“小霸王”创业记

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百姓生活 2012年第11期 31-33页

作者：梁伟娜本刊记者

1979年9月，刘杰出生在湖北省襄樊市枣阳县七方镇梁家村。她上面还有个年长她几岁的哥哥，由于是家里的老小，一直受到父母和哥哥的宠爱，从小养成了爱做主敢想敢干的性格。为此，小时候家里都称她“小霸王”。

关键词：创业襄樊市湖北省枣阳刘杰

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“西单女孩”任月丽的幕后故事

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百姓生活 2012年第3期 33-35页

作者：梁伟娜《百姓生活》编辑部

任月丽，一个出生在贫苦农家的女孩，14岁辍学，16岁流浪北京。在北京西单地下通道，她弹着吉他，用单纯的声音一遍遍地演绎那首《天使的翅膀》。她将自己的全部感情灌注进歌曲里，悠悠地唱出来宣泄自己，也以此谋生。2009年，她演唱《... 详细信息

任月丽，一个出生在贫苦农家的女孩，14岁辍学，16岁流浪北京。在北京西单地下通道，她弹着吉他，用单纯的声音一遍遍地演绎那首《天使的翅膀》。她将自己的全部感情灌注进歌曲里，悠悠地唱出来宣泄自己，也以此谋生。2009年，她演唱《天使的翅膀》的视频，被网友点播超过300万次，创造了互联网视频点播历史上的奇迹。2011年，她登上央视春晚的舞台，从网络红人变成草根明星。上春晚之前，任月丽尝尽了生活的哪些酸甜苦辣？成名之后，她的生活又有了怎样的改变？

关键词：女孩《天使的翅膀》故事视频点播 2009年网络红人互联网北京

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小伙平凡的不平凡人生

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百姓生活 2010年第11期 33-34页

作者：梁伟娜《百姓生活》编辑部

中专毕业后，他回老家种过土豆，外出打过工平凡，1980年出生在重庆市万州区北山都历村一户普通的农民家庭。这个自小就有一股倔强劲儿的小伙子，5年前还在家种土豆，可如今，他已成为媒体关注的“重庆粉王”。平凡有一句座右铭是：我... 详细信息

中专毕业后，他回老家种过土豆，外出打过工平凡，1980年出生在重庆市万州区北山都历村一户普通的农民家庭。这个自小就有一股倔强劲儿的小伙子，5年前还在家种土豆，可如今，他已成为媒体关注的“重庆粉王”。平凡有一句座右铭是：我叫平凡，但绝不平庸。

关键词：平凡人生农民家庭重庆市万州区土豆家种

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农家女孩的羽画世界

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百姓生活 2012年第1期 30-32页

作者：梁伟娜《百姓生活》编辑部

4年前，26岁的高钰环用爷爷奶奶家二层小楼作抵押贷款创办的养鸡场，因一场大雪遭受毁灭性损失，1万只鸡全部被冻死。雪灾过后，她利用鸡毛创作的羽毛画也无人问津。困境中，她租住过3．5平方米的地下室，在免费公园摆地摊卖羽画。如今... 详细信息

4年前，26岁的高钰环用爷爷奶奶家二层小楼作抵押贷款创办的养鸡场，因一场大雪遭受毁灭性损失，1万只鸡全部被冻死。雪灾过后，她利用鸡毛创作的羽毛画也无人问津。困境中，她租住过3．5平方米的地下室，在免费公园摆地摊卖羽画。如今，她的羽画被国家科技部、科协评为“三农科技服务金桥奖”，还获得“中国十大科技创新产品”称号，产品年营业额达上千万元，成为中国扶贫开发协会中国创业就业扶助工程的特别推荐项目之一。

关键词：国家科技部世界女孩农家创新产品养鸡场抵押贷款科技服务

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