检索结果-南通市图书馆

作者：翟英旭吉林大学

学位级别：硕士

盈余管理行为普遍存在于上市公司的财务报表处理中,依附于会计制度的弹性而产生。一直是国内外学者热议的话题,与财务舞弊不同,盈余管理并未踏出会计准则所规定的界限,是在法律允许范围内进行的。盈余水平会影响管理者的薪酬,也是反映... 详细信息

盈余管理行为普遍存在于上市公司的财务报表处理中,依附于会计制度的弹性而产生。一直是国内外学者热议的话题,与财务舞弊不同,盈余管理并未踏出会计准则所规定的界限,是在法律允许范围内进行的。盈余水平会影响管理者的薪酬,也是反映企业经营状况最基础最直观的数据,政府征税也与企业的利润密切相关。正是因为盈余有如此重要的作用,上市公司才会想方设法控制盈余,导致盈余管理的现象越来越普遍。本文通过案例分析的方法对案例公司深圳证券交易所上市的“中国养猪第一股”雏鹰农牧(股票代码:002477)进行分析,因为其2017年的利润存在异常变动,怀疑其可能存在盈余管理行为,正文部分首先对雏鹰农牧基本情况进行简单介绍,并说明了选择雏鹰农牧的原因。而后对其所在的行业畜牧业现状进行了简要分析,运用财务数据对雏鹰农牧的2015年、2016年、2017年三年的偿债能力、营运能力、盈利能力进行分析,并选取同行业的公司进行横向对比,推测出雏鹰农牧的经营状况不佳,存在一定问题,有进行盈余管理的动机。之后主要探究其利用投资收益进行盈余管理的具体操作,包括复杂的巨额投资交易,以及将定向募集的用于企业扩大生产经营的资金通过倒卖猪舍将其变为自有资金进行上述投资行为,利用卖出投资获得投资收益扭亏为盈。同时在变卖非流动资产时又收获营业外收入,也能增长当期净利润。基于本文对雏鹰农牧盈余管理的案例分析,对各方提出了相关启示。雏鹰农牧的盈余管理行为巧妙,效果明显有一定的可取之处,其余上市公司可以根据自身特点在其基础上进行调整达到自己的目的。但也要注意盈余管理行为带来收益的同时还存在风险,例如上市公司信息披露不足的问题、尺度把控不好容易恶化为财务舞弊。对于外部信息使用者来说,盈余管理是充满迷惑性的,会在一定程度上影响投资者的投资行为,建议外部报表使用者提升自己对财务报告的理解能力,拓宽信息获取渠道,以提升投资效率降低风险。对于政府监管者来说,盈余管理仍处在合理合法范围,只能从信息披露角度进行监督,并对盈余管理行为中的异常交易进行控制,以保证外部信息使用者的利益。对于会计准则的修正和改进来说,上市公司的盈余管理行为为相关部门提供了完善和改进的指导,在盈余管理多发的领域进行改进,对推动我国会计准则的进步有积极作用。

关键词：盈余管理雏鹰农牧投资收益

中国证券公司资产管理业务竞争力及发展策略研究

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中国证券公司资产管理业务竞争力及发展策略研究

作者：雍旭对外经济贸易大学

学位级别：硕士

随着佣金制度的改革、资本市场行情的波动、社会财富的飞速增长,资产管理逐渐成为我国证券公司的新兴和主营业务。面对激烈的资产管理行业内外和国内外的竞争,我国的证券公司该如何制定竞争战略,以获取优势地位呢?本文以证券公司资产管... 详细信息

随着佣金制度的改革、资本市场行情的波动、社会财富的飞速增长,资产管理逐渐成为我国证券公司的新兴和主营业务。面对激烈的资产管理行业内外和国内外的竞争,我国的证券公司该如何制定竞争战略,以获取优势地位呢?本文以证券公司资产管理业务竞争优势策略制定为研究对象,以期为中国券商资产管理业务的发展做出理论探讨。本文从资产管理的发展历史和行业现状分析入手,借鉴国外以美林为代表的大投行资产管理业务的经验,在比较中外差异、资产管理机构业务差异、证券公司个体差异的基础上着重从公司、行业和宏观环境几个层面对证券公司发展资产管理业务应采取的竞争力战略进行了研究。本文在全面分析竞争环境的基础上,提出现阶段证券公司资产管理业务竞争优势战略主要为重整盈利模式和全面创新。在公司层面,证券公司通过成立独立的资产管理子公司、严格进行风险控制、积极推出创新产品、铺设销售渠道、创立自有品牌、调整收费结构来实现组织创新、管理创新、产品和服务创新以及重构价值增长层;在行业层面,证券公司一方面与国内的基金公司、保险公司、信托公司和银行等其他资产管理机构进行业务整合,建立金融集团,在分业经营的环境下谋求竞争优势,另一方面可以利用本土化资源优势与国外投资银行建立合资公司,扩大规模和影响力;在宏观环境层面,统一监管标准和充分利用股权分置成为重点。

关键词：资产管理竞争优势盈利模式

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手指三模态图特征融合与识别方法研究

手指三模态图特征融合与识别方法研究

作者：曲宏旭辽宁科技大学

学位级别：硕士

手指上蕴含着丰富的生物特征,同时拥有高度的灵活性与便携性,所以基于手指的生物特征识别技术在生物特征识别领域内一直是重要的研究方向。目前,基于手指单模态的生物特征识别技术已经趋于成熟,同时也遇到了一些难以克服的瓶颈。手指包... 详细信息

手指上蕴含着丰富的生物特征,同时拥有高度的灵活性与便携性,所以基于手指的生物特征识别技术在生物特征识别领域内一直是重要的研究方向。目前,基于手指单模态的生物特征识别技术已经趋于成熟,同时也遇到了一些难以克服的瓶颈。手指包含着三个位置紧凑、纹理相似的特征,即指纹、指静脉和指节纹,利用这些紧凑的特征构建手指多模态融合识别系统有助于获得更好的识别效果。在手指多模态融合识别中,如何有效地融合多种特征是提高手指特征整体表达能力的关键。然而,不同模态的图像尺寸不一致和特征表达的差异性严重限制了手指生物特征融合识别的性能。论文将针对指纹、指静脉以及指节纹这三种模态,探究一个稳定、有效的手指三模态融合识别框架。文章的主要工作如下:第一,提出了一种基于图卷积神经网络的手指三模态融合识别框架。首先,利用基于超像素分割的加权图构造方法,将手指三模态的图像特征抽象成加权图特征。然后经过并行的图卷积神经网络分别提取每个模态图的局部特征,同时统一不同模态图的节点数目。经过图融合模块,将三种模态的图融合为包含不同模态信息的融合图。最后通过图卷积神经网络对融合图进行图级分类。第二,提出三种从不同角度出发的图融合策略,分别为:竞争融合、特征向量中心度融合以及PageRank中心度融合。竞争融合从图中节点的特征信息出发,利用节点的特征信息度量节点的重要性,将不同模态图中重要性排名一致的节点融合;特征向量中心度融合将从图中节点的结构信息出发,通过结构信息判断节点的重要性,同样的将重要性排名一致的节点融合;PageRank中心度融合则同时从两种角度出发,综合考虑节点的重要性,然后融合重要性排序一致的节点。第三,为了缓解图卷积神经网络的过平滑问题,分析了传统GCN模型的优化机制,将其信息传递的过程视为一个优化过程。基于此,在传统GCN的优化目标上添加了一个约束项,提出带有约束的图卷积神经网络CGCN。第四,通过实验证明了所提出的图融合策略在各种情况下均能达到较好的效果,相比于其他方法均有较大提升。在此基础上,对比不同的多模态融合识别系统,结果表明,所提出的融合识别框架比传统的方法性能更高。最后,将CGCN模型与多种图卷积模型在不同深度下进行对比,实验证明了CGCN模型能够有效的缓解过平滑现象。

关键词：生物特征识别多模态融合识别图卷积神经网络超像素分割

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压裂煤层大采高综采提高块煤率工艺研究

压裂煤层大采高综采提高块煤率工艺研究

作者：裴鹏旭西安科技大学

学位级别：硕士

鄂尔多斯侏罗纪煤田是国家级煤炭化工基地,煤层开采条件好,煤质优良,是我国煤炭机械化开采的集中区。生产中,由于煤层硬厚,裂隙不发育,采煤机截割能耗大,截煤块度小,粉煤量过大,造成污染严重,生产安全环境差。基于实际中超前水力压裂技... 详细信息

鄂尔多斯侏罗纪煤田是国家级煤炭化工基地,煤层开采条件好,煤质优良,是我国煤炭机械化开采的集中区。生产中,由于煤层硬厚,裂隙不发育,采煤机截割能耗大,截煤块度小,粉煤量过大,造成污染严重,生产安全环境差。基于实际中超前水力压裂技术对硬厚煤层截割性质的改造形成的压裂煤层,本文通过现场研究、实验室实验以及数值模拟分析等综合方法,对压裂煤层综采工作面煤壁的裂隙分布、压裂煤层的截割工艺与参数进行了研究。主要研究内容与取得的结论如下:（1）通过现场测量压裂煤层煤壁的裂隙分布规律,采用分形理论,研究了煤壁裂隙的分形规律,得出压裂煤层煤壁裂隙与分形维数的变化关系;给出了不同压裂煤层条件下煤体物理力学性质参数以及硬煤截割阻抗参数的分形演化规律。（2）基于煤层压裂模型和采煤机割煤形式分析,建立了压裂煤层截割力学模型;根据压裂煤层截割力学模型简化分析,建立了煤壁截割水平楔入力T和破裂面上撬动力F的计算表达式。采用FLAC3D数值模拟软件,模拟不同压裂煤层条件下,最大截割深度、崩落线的长度及范围的变化趋势。通过数值模拟和理论分析,建立了压裂煤层切削面积表达式,并得出由未压裂区到双排孔压裂区切削面积逐渐增大、块煤率逐渐增大的变化规律。（3）对压裂煤层综采工作面,从采煤机割煤、滚筒装煤、刮板运输机运煤等综采工艺进行了研究,得出适合压裂煤层的综采进刀方式、采煤机牵引速度、滚筒转速等工艺参数。将研究结果应用于5米采高综采工作面开采实际,研究得到:采煤机的最佳进刀方式为双向割煤端头斜切进刀;采煤机牵引速度优化后的合理取值范围为8.5～9.2m/min,压裂后采煤机的牵引速度比原始煤层提高了 3.4%～12.1%,滚筒转速优化后减小到28.78r/min,减小了 10.51%。压裂煤层的综采日循环增加1.2刀,工作面块煤率平均提高了 18.7%,粉尘浓度降低了约45.4%。

关键词：压裂煤层块煤率数值模拟综采工艺

金属体积塑性成形过程表面积演化的宏微观规律

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金属体积塑性成形过程表面积演化的宏微观规律

作者：唐泽旭重庆大学

学位级别：硕士

金属材料在塑性变形过程中的体积、表面积以及表面形貌等几何特性参数与塑性变形本身密切相关,且存在着复杂的相互关系。经典塑性理论认为,致密金属塑性变形过程中的体积保持不变,该假设已在实践中得到大量验证,并在有限元模拟等理论分... 详细信息

金属材料在塑性变形过程中的体积、表面积以及表面形貌等几何特性参数与塑性变形本身密切相关,且存在着复杂的相互关系。经典塑性理论认为,致密金属塑性变形过程中的体积保持不变,该假设已在实践中得到大量验证,并在有限元模拟等理论分析以及生产现场的坯料计算等场合得到应用。但迄今为止,对于金属塑性变形过程表面积变化的研究很少,一些基础性的问题——如表面积的变化规律及其宏、微观演化机制——仍然缺乏深入认识。事实上,金属塑性变形过程中坯料的表面积不仅是变化的,在锻造、挤压等体积成形中的变化程度还很大,同时这种变化对于金属的塑性流动、表面摩擦特性及润滑剂的使用状态、坯料与环境的热交换、坯料表面氧化状态以及制件的表面质量等,都有着直接影响。本文对金属体积塑性成形过程的表面积变化规律进行了研究,以期从宏、微观的多尺度系统认识塑性成形过程中坯料表面积变化的基本规律。首先,总结了金属塑性变形过程中主要几何特性参数演化的研究现状;其次,选择圆柱体这一典型几何体的镦粗成形基础工序,结合数值模拟和物理实验研究了变形过程的宏观表面积的变化规律;通过物理实验,研究了金属压缩和拉伸过程微观表面状态的变化机制;最后,探讨了一个实际生产中的微车曲轴锻件成形过程表面积的变化情况。主要结论如下:(1)通过对圆柱体这一典型规则几何体镦粗成形过程的解析分析,发现坯料总表面积呈先减小、后增加的规律,当高径比k等于1时(即最接近球体),总表面积最小,这符合一定体积下球体表面积最小的几何学理论。在坯料与上、下砧板不存在摩擦的理想状态,坯料形状始终为圆柱体且由于变形体体积不变,可得出表面积S是关于圆柱体直径的二次函数;对于坯料与上下砧板间存在摩擦的实际情况,虽然摩擦导致“鼓形”,但表面积的变化规律类似。当变形体形状偏离球形越多(或某维度的几何尺寸远大于或小于其他方向),则表面积越大。(2)圆柱体镦粗的数值模拟和物理实验表明:总表面积先减小、再增大,而其中侧自由表面积S1为减小,端部与上、下砧板接触表面积S2为增加;当表面积最小时,变形体各方向尺寸都十分接近;坯料与上下砧板间的摩擦增加,则总表面积S改变量减小,侧表面积S1改变量增加,而端部表面积S2改变量减小。摩擦越大,表面积的变化越小。(3)在一定变形量前,圆柱体压缩过程的微观表面积也是先减小、后增加,其微观机制主要是由于晶体的自由表面出现了皱褶等现象。(4)板料拉伸过程中的表面积一直增加,其微观机制主要包括晶界的拉裂等。(5)通过对于微车曲轴这一复杂锻件锻造成形过程总表面积的分析,可以认为:对于大多数的体积塑性成形过程,由于坯料在某些方向的尺寸与其他方向尺寸的差异较大、且偏离程度总是不断增加,导致坯料形状整体上越来越偏离球体,因此总表面积始终不断增大。此外,数值模拟能够很好地反映体积塑性成形过程的表面积变化。

关键词：塑性变形体积成形表面积机理数值模拟

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移动车辆车牌定位技术的研究与应用

移动车辆车牌定位技术的研究与应用

作者：任思旭长春工业大学

学位级别：硕士

车牌识别系统(License Plate Recognition, LPR)是智能交通系统重要的组成部分和支撑技术,广泛应用于高速公路电子收费站、停车场以及道路监控中。车牌定位是车牌识别最关键的步骤,直接决定后续字符分割和字符识别的成败。外界环境的影... 详细信息

车牌识别系统(License Plate Recognition, LPR)是智能交通系统重要的组成部分和支撑技术,广泛应用于高速公路电子收费站、停车场以及道路监控中。车牌定位是车牌识别最关键的步骤,直接决定后续字符分割和字符识别的成败。外界环境的影响,如光照、阴影、以及雨雪等天气变化以及摄像机的原因导致的车牌遮挡、模糊、倾斜等,均会影响车牌定位和识别的效果。本文提出的基于视频的移动车牌定位技术,应该满足复杂环境下实时道路监控系统的准确性和实时性要求。本文的研究工作主要包含三个方面：图像预处理,车牌粗定位以及车牌精定位。图像预处理主要包括灰度化、图像增强、图像灰度化和二值化以及形态学操作等。通过对边缘检测后的图像轮廓搜索进行粗定位进而再进行车牌精定位,本文提出了一种新的基于灰度图像的车牌多特征融合精确定位车牌区域的方法。首先利用OpenCV中轮廓提取的方法进行车牌粗定位,然后结合车牌多特征融合精确定位车牌区域。该车牌定位算法基于VC++6.0平台,利用OpenCV函数库和C++编程实现,实验证明本文的车牌定位准确率较高,耗时较少,车牌定位成功率达94%以上,可满足车牌识别系统的实时性要求。

关键词：车牌定位边缘检测数学形态学 OpenCV

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城市广场照明的情感化设计研究

城市广场照明的情感化设计研究

作者：谌旭南昌大学

学位级别：硕士

现代化城市建设的蓬勃发展，给城市广场的建设与规划提供了良好的发展契机。当前我国广场照明仍存在一味的追求“亮化”的问题，导致某些城市广场夜景观缺乏特色、缺少对人精神层次需求的关注。现代设计趋势已经从功能需要转向精神需要... 详细信息

现代化城市建设的蓬勃发展，给城市广场的建设与规划提供了良好的发展契机。当前我国广场照明仍存在一味的追求“亮化”的问题，导致某些城市广场夜景观缺乏特色、缺少对人精神层次需求的关注。现代设计趋势已经从功能需要转向精神需要，所以当前的城市广场夜景照明设计应以人为本，根据人的体验和感受而去设计。本论文的创新点在于将情感化设计理论引入广场照明规划设计当中。提出情感化设计概念，归纳各广场情景下人的情感。并通过引入心理学三个水平的情感化设计,整合后提出本文的重点：三个层级的景观划分。最后分析广场情感化照明设计原则，将情感化设计和层级景观划分理论运用综合系统方法融入于广场照明中。每个结论的提出都是基于对照明和情感化设计的分析研究以及利用设计分析法方法，分析与结论连接紧密，旨在将情感化设计引入城市广场照明设计中，创造更适合情景和人的需求的情感化照明设计，促进城市广场夜间景观环境的和谐发展。论文结尾处以秋水广场为设计实例来从心理学角度辩证地阐述了“情感照明”的设计方法以及情感化设计照明的具体应用。为心理学情感理论研究运用在环境照明方面的探索提供实际应用依据。

关键词：广场照明情感化设计

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超声速巡航导弹参数辨识与弹道在线规划方法

超声速巡航导弹参数辨识与弹道在线规划方法

作者：郑中旭国防科技大学

学位级别：硕士

超声速巡航导弹具有比冲大、体积小、质量轻、机动灵活,抗干扰能力强的优势,是现代战争的必备武器。本文以超声速巡航导弹为研究对象,针对其飞行时面临的复杂环境和不确定因素,将参数辨识与弹道在线规划作为核心任务,研究了超声速巡航... 详细信息

超声速巡航导弹具有比冲大、体积小、质量轻、机动灵活,抗干扰能力强的优势,是现代战争的必备武器。本文以超声速巡航导弹为研究对象,针对其飞行时面临的复杂环境和不确定因素,将参数辨识与弹道在线规划作为核心任务,研究了超声速巡航导弹参数辨识问题、弹道在线规划问题、助推段制导问题以及多导弹协同攻击问题。本文首先对超声速巡航导弹外形进行描述,基于工程计算方法获取了超声速巡航导弹的气动特性,对气动系数进行拟合并对拟合结果进行了分析评价。介绍了在工程中常用的辨识方法并基于该方法对气动系数进行辨识。对超声速巡航导弹动力系统建模,建立了冲压发动机性能参数辨识模型并提出了解算方法,对多种飞行工况下固体火箭冲压发动机性能参数进行辨识,基于辨识结果,分析了冲压发动机性能参数变化规律,并对其机理进行分析。通过辨识超声速巡航导弹气动参数以及动力系统性能参数可为弹道在线规划提供有力支撑。提出了基于参数辨识的弹道在线规划方法。采用高斯伪谱法对弹道在线规划问题进行分段求解,使得求解效率大幅提高。根据巡航段特点,对巡航段弹道进行分段降维处理,减小了问题的规模,提高了求解速度。提出了基于动态逆的助推段制导方法。建立了助推段制导模型,介绍了动态逆的基本原理,推导了基于动态逆的助推段制导律。对推力、气动力系数、初始速度以及初始方位角进行拉偏,分析其对于助推段弹道特性的影响规律,并将标称弹道、拉偏弹道以及采用制导控制弹道进行对比,分析了本文所设计的助推段制导律的制导效果。设计了多导弹协同攻击制导律。建立了二维平面和三维空间制导模型,提出了多导弹分散化协同制导律、基于比例导引、滑模变结构和动态逆控制理论的协同制导律,可实现攻击时间约束与协同攻击。本文研究内容可为超声速巡航导弹参数辨识及弹道在线规划提供技术支持,可以为超声速巡航导弹动力系统建模、助推段制导以及多导弹协同攻击提供参考。

关键词：超声速巡航导弹参数辨识弹道在线规划协同攻击

基于嵌入式Linux和Qt/E的数控系统软件设计

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基于嵌入式Linux和Qt/E的数控系统软件设计

作者：赵俊旭上海交通大学

学位级别：硕士

随着社会的发展和技术进步,数控系统的应用越来越广泛,数控系统的需求呈现出多样化的趋势。由于不同应用领域的功能和成本要求各不相同,以PC机为平台的传统数控系统已经无法完全满足市场的要求,这使得嵌入式技术逐渐进入该领域。嵌... 详细信息

随着社会的发展和技术进步,数控系统的应用越来越广泛,数控系统的需求呈现出多样化的趋势。由于不同应用领域的功能和成本要求各不相同,以PC机为平台的传统数控系统已经无法完全满足市场的要求,这使得嵌入式技术逐渐进入该领域。嵌入式系统因其硬件平台的多样性,具有开发成本高、周期长、风险大和维护难等缺点,因而引入操作系统构建与硬件无关的开发平台成为主流的设计模式。Linux系统自1991年首次公开发表以来,因其灵活性、健壮性和开源的理念,应用领域越来越广,获得了来自社群和厂商的广泛支持,逐渐成为嵌入式应用中最重要的操作系统之一。本文首先对主流的数控系统硬件和软件平台进行了方案论证,分别从成本、设计复杂度、系统性能等角度分析比较,最终确定了以多核芯片OMAP3530为硬件平台,以嵌入式Linux为软件平台的嵌入式数控系统设计方案。在此基础上,本文具体研究了嵌入式Linux主机的开发环境和目标系统的运行环境、文件系统的构建、嵌入式Linux系统工具、应用软件的移植等系统构建等关键问题,为数控系统应用软件的开发构建了一个与硬件无关的通用平台。为充分利用OMAP系列的ARM+DSP的双核优势,研究和实现了ARM核与DSP核之间的通信,为数控中的插补运算提供了有力的技术手段。人机界面是用户体验最为关键的一项,本文通过对几个常用界面开发库的比较,最终选择了开源的界面应用库Qt作为开发工具,对其进行了详细的介绍,给出了开发的界面实例。最后测试了该嵌入式数控系统各个功能模块。

关键词：数控系统嵌入式Linux 根文件系统 Qt OMAP3530

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枯草杆菌蛋白酶工程改造及发酵条件筛选

枯草杆菌蛋白酶工程改造及发酵条件筛选

作者：周桂旭山西大学

学位级别：硕士

枯草杆菌蛋白酶属于细胞外丝氨酸内肽酶。枯草杆菌蛋白酶存在于古细菌、真细菌、真核生物和病毒中,主要特征是存在保守的Asp,His和Ser催化三联体。枯草杆菌蛋白酶属于丝氨酸肽酶或蛋白酶第二大家族(S8家族)的S8A亚家族成员。枯草杆菌蛋... 详细信息

枯草杆菌蛋白酶属于细胞外丝氨酸内肽酶。枯草杆菌蛋白酶存在于古细菌、真细菌、真核生物和病毒中,主要特征是存在保守的Asp,His和Ser催化三联体。枯草杆菌蛋白酶属于丝氨酸肽酶或蛋白酶第二大家族(S8家族)的S8A亚家族成员。枯草杆菌蛋白酶具有广泛的底物特异性,在中性和碱性pH下具有较高活性和稳定性,常被用作洗涤、制革、食品等行业的生物添加剂。枯草杆菌蛋白酶在过去几十年一直是酶制剂研究开发的热点。本论文首先化学合成嗜碱性芽孢杆菌PB92的碱性蛋白酶基因Bapb92克隆至pBE2R载体中并转化到Bacillus subtilis WB600中构建重组工程菌Bacillus subtilis WB600/pBE2R-Bapb92。重组枯草杆菌工程菌利用糊精1%,可溶性淀粉2%,酵母提取物1%,NaCl 0.5%,pH7.0培养基进行发酵表达,培养60小时后进行菌液分离。发酵上清液经70%硫酸铵沉淀、SephadexG-25脱盐和Sephadex75层析三个步骤,获得电泳纯的碱性蛋白酶,纯化倍数6.8倍,比活2200U/mg,产率39%,经12%SDS-PAGE和质谱检测目的蛋白分子量为26.7kDa。利用定点突变的技术,对碱性蛋白酶BAPB92基因序列的188位、239位和262位氨基酸残基进行基因定点突变,构建了四个突变体BAPB92(A188P)、BAPB92(V262I)、BAPB92(Q239R)和BAPB92(A188P/V262I)。四个突变体发酵液酶活力相对于野生型都有提高,BAPB92(A188P)酶活力提高了2.6倍;BAPB92(V262I)酶活力提高了1.2倍;BAPB92(Q239R)酶活力提高了2.5倍;BAPB92(A188P/V262I)酶活力提高了3.3倍。以酪蛋白作为底物,相比野生型BAPB92,BAPB92(A188P)、BAPB92(Q239R)和BAPB92(A188P/V262I)催化效率(Kcat/Km)分别提高了1.5倍、1.3倍和4.3倍,但BAPB92(V262I)催化效率降低至野生型的0.4倍。在60℃下进行的热稳定性测定揭示,当保温1h时BAPB92残余酶活力为29%,BAPB92(A188P)残余酶活力为41%,BAPB92(V262I)残余酶活力为48%,BAPB92(Q239R)残余酶活力为35%,BAPB92(A188P/V262I)残余酶活力为51%,相比野生酶,突变体蛋白酶热稳定性均得到提高。在pH6-12范围内25℃下对BAPB92及突变体孵育2h,比较野生型和突变型的pH稳定性,揭示单一突变188位、239位氨基酸和组合突变A188P/V262I更能耐受碱性环境,单一突变262位氨基酸与野生型BAPB92耐碱情况相同。STPP(三聚磷酸钠)和MGDA(甲基甘氨酸二乙酸)是常用的洗涤剂螯合剂,突变体和野生型在分别含有二者的标准洗涤剂25℃孵育1h,与对照相比,BAPB92及其突变体都可在STPP和MGDA体系中能稳定存在,保持较高酶活性。通过比较常见的发酵培养基对重组枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶的影响,确定糊精1%,可溶性淀粉2%,酵母提取物1%,NaCl 0.5%,pH7.0为基础发酵培养基,在此基础上,经过单因素实验和正交实验确定发酵的最佳条件为:糊精5%、花生饼粉3%、酵母提取物1%、MgSO 0.28%、NaCl 0.5%,起始pH7.0、装液量12%、接种量4%,此条件下37℃,200rpm培养60h。BAPB92使用优化后的培养条件下的酶活力相对于初始条件培养酶活力增长了4.9倍,BAPB92(V262I)增长了3.1倍,BAPB92(Q239R)酶活力增长了8.4倍,BAPB92(A188P)增长了10.6倍,BAPB92(A188P/V262I)酶活力可达到3111.94±37.25 U/mL,增长了11.2倍,酶活力得到显著提高。这些结果对枯草杆菌蛋白酶的生产及应用提供借鉴。

关键词：枯草杆菌蛋白酶纯化工程菌蛋白质工程酶学性质优化