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化疗前后肿瘤细胞与PBMCs MDR1表达的相关性实验研究

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化疗前后肿瘤细胞与PBMCs MDR1表达的相关性实验研究

作者：桂琳玲重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:建立小鼠CT26结肠癌细胞株的肿瘤动物模型,化疗药物诱导肿瘤耐药基因及蛋白表达。观察肿瘤生长情况,了解其生物学特点,探讨化疗前后肿瘤细胞与外周血单个核细胞MDR1表达的相关性研究。方法:首先成功建立小鼠CT26结肠癌右腋下皮下... 详细信息

目的:建立小鼠CT26结肠癌细胞株的肿瘤动物模型,化疗药物诱导肿瘤耐药基因及蛋白表达。观察肿瘤生长情况,了解其生物学特点,探讨化疗前后肿瘤细胞与外周血单个核细胞MDR1表达的相关性研究。方法:首先成功建立小鼠CT26结肠癌右腋下皮下肿瘤动物模型。采用5-氟尿嘧啶和阿霉素联合化疗,分组建立小鼠肿瘤耐药模型,根据化疗时间分为对照组、化疗后49天组、化疗后70天组和化疗后91天组。B超及游标卡尺测量肿瘤生长情况,MTT法绘制化疗前后细胞株的生长曲线、计算倍增时间、药物敏感性及耐药指数。RT-PCR法检测化疗前后各组肿瘤细胞和外周血单个核细胞MDR1b mRNA表达情况。柔红霉素排出试验检测肿瘤细胞及外周血单个核细胞P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）外排功能。结果:对照组于化疗后第21天B超显示肿瘤体积（0.63±0.11）cm,100%成瘤,实验组于化疗后第21天B超未探及肿瘤。实验组于化疗后第49天游标卡尺测量肿瘤体积,肿瘤体积达到（1.51±0.50）cm,肿瘤生长迅速。MTT法检测耐药株的倍增时间与亲本细胞株无明显统计学差异,化疗后91天肿瘤对ACT、ADM、VCR、HCPT、5-Fu、DAM、VP16的耐药指数分别为29.3、26.4、10.9、7.0、5.8、3.0、2.8,敏感性降低。肿瘤细胞和外周血单个核细胞MDR1b mRNA表达随着化疗时间的延长表达增加,并存在一定相关性,相关系数为0.903。化疗后肿瘤细胞和外周血单个核细胞对柔红霉素的外排能力明显高于未化疗组。结论:本实验成功建立肿瘤多药耐药的动物模型,为化疗后肿瘤继发多药耐药问题的进一步研究提供动物模型。肿瘤细胞和外周血单个核细胞MDR1表达有一定相关性,检测外周血单个核细胞MDR1表达可作为评价临床化疗药物对肿瘤是否耐药的间接指标。

关键词：动物模型肿瘤多药耐药化疗外周血单个核细胞

新生儿腹腔镜Ladd's术后再手术经验教训

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中华小儿外科杂志 2020年第9期41卷 794-799页

作者：余雷鲁巍桂琳玲华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院新生儿外科 430016

目的分析腹腔镜Ladd's术治疗新生儿肠旋转不良术后近期再手术的原因并提出防范措施。方法回顾性分析武汉儿童医院新生儿外科2012年1月至2018年6月间一期完成的98例新生儿肠旋转不良腹腔镜Ladd's术后患儿的恢复情况(不包括中转开腹病例)... 详细信息

目的分析腹腔镜Ladd's术治疗新生儿肠旋转不良术后近期再手术的原因并提出防范措施。方法回顾性分析武汉儿童医院新生儿外科2012年1月至2018年6月间一期完成的98例新生儿肠旋转不良腹腔镜Ladd's术后患儿的恢复情况(不包括中转开腹病例)。结果98例中90例顺利出院,另8例患儿术后1~3周内再次手术。其中7例因胃肠减压持续多量胆汁或喂养增量困难,消化道碘水造影提示十二指肠不全肠梗阻再手术;另1例术后1周行X线片检查发现气腹再手术。此8例患儿二次手术后2周均痊愈出院。术后随访3个月,均恢复顺利。结论新生儿先天性肠旋转不良经腹腔镜行Ladd's术是一种安全可靠的方法,具有创伤小切口美观的优点。但术者因经验及操作技能不足的原因可能出现松解Ladd's索带不彻底、小肠系膜扩展不充分或其他意外导致患儿再手术。术后2周内胃肠减压持续多量胆汁或喂养增量困难的患儿,应及时行腹部X线立位平片及消化道碘水造影检查,为再次手术提供依据。

关键词：新生儿肠旋转不良腹腔镜 Ladd's术再手术

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小鼠CT26结肠癌耐药动物模型的建立

重庆医科大学学报 2010年第8期35卷 1224-1227页

作者：桂琳玲金先庆罗庆重庆医科大学附属儿童医院普外科重庆400014

目的:化疗药物诱导建立小鼠CT26结肠癌多药耐药(Multidrug resistance,MDR)动物模型。方法:建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,5-氟尿嘧啶和阿霉素联合化疗,MTT法绘制化疗前后细胞株的生长曲线、计算倍增时间及对各化疗药物敏感性及耐药指... 详细信息

目的:化疗药物诱导建立小鼠CT26结肠癌多药耐药(Multidrug resistance,MDR)动物模型。方法:建立小鼠CT26结肠癌皮下肿瘤模型,5-氟尿嘧啶和阿霉素联合化疗,MTT法绘制化疗前后细胞株的生长曲线、计算倍增时间及对各化疗药物敏感性及耐药指数(Resistance index,RI),RT-PCR检测化疗前后MDR1b mRNA表达情况,流式细胞技术检测多药耐药蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能。结果:耐药株的倍增时间比亲本细胞株长,化疗后肿瘤对放线菌素D(ACT)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、羟基喜树碱(HCPT)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、柔红霉素(DAM)、依托泊甙(VP16)的RI分别为29.3、26.4、10.9、7.0、5.8、3.0、2.8,敏感性降低。耐药株MDR1b mRNA表达水平比亲本细胞株高,对柔红霉素的外排能力明显高于亲本细胞株。结论:本实验成功建立肿瘤多药耐药的动物模型,为化疗后肿瘤继发多药耐药问题的研究提供动物模型,为提高化疗效果研究奠定基础。

关键词：多药耐药动物模型化疗

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新生儿多发性肠闭锁的治疗及预后分析

实用医学杂志 2019年第1期35卷 167-168页

作者：桂琳玲鲁巍邢福中肖必栋余雷华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院新生儿外科武汉430016

新生儿先天性肠闭锁发病率为1/5000,发展中国家存活率约为60%,发达国家存活率达到90%[1]。多发性肠闭锁为肠闭锁第Ⅳ型,是从十二指肠到直肠之间两处及以上的闭锁。多发性肠闭锁约占先天性肠闭锁6%~32%[2],由于术后短肠综合征风险较高,... 详细信息

新生儿先天性肠闭锁发病率为1/5000,发展中国家存活率约为60%,发达国家存活率达到90%[1]。多发性肠闭锁为肠闭锁第Ⅳ型,是从十二指肠到直肠之间两处及以上的闭锁。多发性肠闭锁约占先天性肠闭锁6%~32%[2],由于术后短肠综合征风险较高,肠道吸收能力差,术后长期肠外营养导致胆汁淤积及败血症,是肠闭锁预后最差的一型。外科手术需恢复肠管解剖结构的延续性,对于手术医生最大的难点就是在切除病变肠管及保留剩余肠管之间寻找一个适当的平衡。我院自2007年1月~2017年1月收治多发性肠闭锁患儿43例,均经手术探查证实,现报告如下。

关键词：先天性肠闭锁预后分析多发性新生儿治疗发展中国家短肠综合征发达国家

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建立5-Fu化学诱导的小鼠结肠癌耐药模型

建立5-Fu化学诱导的小鼠结肠癌耐药模型

第八届全国儿童肿瘤学术会议

作者：桂琳玲金先庆重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所

＜正＞目的:建立小鼠结肠癌CT26的耐药模型,观察化疗前后小鼠生存时间,肿瘤对多种化疗药物的敏感性。方法:小鼠结肠癌细胞株CT26接种于Balb/c小鼠腋下,实验组给予5-氟尿嘧啶（5-Fu）间歇化疗,0.1mg/g连用5天,停药7天后第二次化疗,对照...

＜正＞目的:建立小鼠结肠癌CT26的耐药模型,观察化疗前后小鼠生存时间,肿瘤对多种化疗药物的敏感性。方法:小鼠结肠癌细胞株CT26接种于Balb/c小鼠腋下,实验组给予5-氟尿嘧啶（5-Fu）间歇化疗,0.1mg/g连用5天,停药7天后第二次化疗,对照组生理

关键词：

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建立5-Fu化学诱导的小鼠结肠癌耐药模型

建立5-Fu化学诱导的小鼠结肠癌耐药模型

新生儿颅骨凹陷性骨折负压抽吸术治疗方法的研究

中国西南地区第九届小儿科学术会议

作者：桂琳玲金先庆重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所

目的建立小鼠结肠癌CT26的耐药模型,观察化疗前后小鼠生存时间,肿瘤对多种化疗药物的敏感性。方法小鼠结肠癌细胞株CT26接种于Balb/c小鼠腋下,实验组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu)间歇化疗,0.1mg/g连用5天,停药7天后第二次化疗,对照组生理盐水...

目的建立小鼠结肠癌CT26的耐药模型,观察化疗前后小鼠生存时间,肿瘤对多种化疗药物的敏感性。方法小鼠结肠癌细胞株CT26接种于Balb/c小鼠腋下,实验组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu)间歇化疗,0.1mg/g连用5天,停药7天后第二次化疗,对照组生理盐水作对照,B超早期观察肿瘤组织生长情况,游标卡尺测量后期肿瘤生长情况,MTT法检测化疗前后肿瘤细胞生长曲线变化,对5-Fu、阿霉素(ADM)、柔红霉素(DAM)、羟基喜树碱(HCPT)、卡铂(CBP)、长春新碱(VCR)、放线菌素D(ACT)的敏感性。结果给予5×10个/只接种于小鼠腋下,未给药组于接种后21天B超显示肿瘤体积(0.63±0.11)cm,100%成瘤并有丰富的血流信号。实验组于接种后第三天给予间歇化疗,21天B超未及肿瘤,于化疗后第35天后B超显示肿瘤体积(0.48±0.09)cm。当肿瘤体积达到(1.62±0.34)cm时肿瘤生长迅速,取第5个化疗疗程后的肿瘤组织原代培养获得的肿瘤细胞与未给药组的肿瘤细胞采用MTT法检测其细胞生长曲线,未见明显变化,药物敏感实验显示CT26细胞株对5-Fu、ACT、DAM、VCR均较敏感(抑制率>30%),其中对5-Fu最敏感。抑制率达58.3%。而CT26/5-Fu对ATC、DAM敏感。其中ATC对其抑制率为50.2%。对5-Fu的抑制率为44.3%,敏感性降低明显。ADM、HCPT、CBP、VCR均不敏感。结论CT26接种后化疗小鼠能耐受5个疗程的化疗,无小鼠死亡。5-Fu化疗后的肿瘤株明显高于未化疗组的耐药性。

关键词：

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中华小儿外科杂志 2019年第10期40卷 893-898页

作者：桂琳玲鲁巍邢福中肖必栋熊晓峰余雷华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院新生儿外科武汉430016

目的探讨真空负压吸引术治疗新生儿颅骨凹陷性骨折并文献复习,了解新生儿颅骨凹陷的临床特点及选择合理的治疗方案。方法回顾性分析华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院1997年1月至2017年1月收治的18例新生儿颅骨凹陷性骨折,其中11... 详细信息

目的探讨真空负压吸引术治疗新生儿颅骨凹陷性骨折并文献复习,了解新生儿颅骨凹陷的临床特点及选择合理的治疗方案。方法回顾性分析华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院1997年1月至2017年1月收治的18例新生儿颅骨凹陷性骨折,其中11例采取保守观察,7例采用产科负压吸引器负压吸引复位,年龄为2 h至25 d,凹陷深度为0.3~1.3 cm。结果18例患儿均在出生后即发现颅骨凹陷性骨折,均为顶骨凹陷,其中16例为剖宫产,2例顺产(其中1例难产)。11例采取保守观察的患儿于出生后1~7个月骨折自行复位,复位时间与凹陷深度呈明显正相关(r=0.875,P<0.05)。其中6例凹陷深度大于0.5 cm,平均自行复位时间为4.5个月。7例采取真空负压抽吸术,其中6例负压抽吸治疗后颅骨凹陷立即复位,1例于出生25 d才就诊,复位失败。所有采取真空负压抽吸术的患儿未发生颅内出血或原有出血加重等并发症。结论采用负压抽吸术,只要掌握好适应证及操作方法,不仅可立即复位凹陷性骨折,也不会造成患儿严重医源性伤害,出生后越早行负压抽吸越容易成功复位。

关键词：颅骨凹陷性骨折新生儿治疗剖宫产负压抽吸

P糖蛋白/Caveolin-1在血脑屏障定位及表达特点

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第四军医大学学报 2009年第19期30卷 1857-1860页

作者：郭振华金先庆赵利华赵珍珍桂琳玲重庆医科大学附属儿童医院儿研所外科实验室重庆400014

目的:研究P糖蛋白在血脑屏障的确切细胞定位,并在形态学上验证P糖蛋白与Caveolin-1的表达部位是否存在相关性.方法:建立脑胶质瘤动物模型,获得标本50%用40g/L多聚甲醛固定后,通过HE染色以及免疫组化的方法证明其生物学特性;另50%制作冰... 详细信息

目的:研究P糖蛋白在血脑屏障的确切细胞定位,并在形态学上验证P糖蛋白与Caveolin-1的表达部位是否存在相关性.方法:建立脑胶质瘤动物模型,获得标本50%用40g/L多聚甲醛固定后,通过HE染色以及免疫组化的方法证明其生物学特性;另50%制作冰冻切片,分别用FITC(绿色荧光)和TRITC(红色荧光)对Caveolin-1和P糖蛋白进行荧光标记,激光共聚焦显微镜下观察两种蛋白在血脑屏障上的定位及表达特点.结果:①脑肿瘤毛细血管内皮细胞的腔膜面有强的绿色荧光信号表达,而且星型胶质细胞的足突也有一定的绿色荧光信号表达;②Caveolin-1在血管内皮细胞的腔膜面以及基底面均有很强的红色荧光信号表达;③合并图像后发现在内皮细胞的腔膜面及部分腔膜面与基底面的交界处存在两种荧光信号共表达的区域.结论:P-gp除主要表达于脑肿瘤毛细血管内皮细胞的腔膜面外,也部分表达于胶质细胞的足突,共同发挥药物外排功能.从形态学上证实P-gp与Caveolin-1在细胞膜上存在共表达现象,有助于进一步从生化水平上深入研究此两种蛋白在血脑屏障内皮细胞的表达特点及作用机制.

关键词： P-糖蛋白 Caveolin-1 血脑屏障激光共聚焦显微镜

新生儿Currarino综合征并发尿潴留四例并文献复习

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中华小儿外科杂志 2020年第7期41卷 650-656页

作者：桂琳玲鲁巍方琼邢福中熊晓峰肖必栋余雷华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院新生儿外科 430016

目的:探讨对新生儿Currarino综合征引起尿潴留患儿的治疗、预后并文献复习。方法:回顾性分析2007年1月至2019年1月武汉儿童医院新生儿外科收治的新生儿Currarino综合征并发尿潴留4例及1998年1月至2019年1月文献报道的Currarino综合征出... 详细信息

目的:探讨对新生儿Currarino综合征引起尿潴留患儿的治疗、预后并文献复习。方法:回顾性分析2007年1月至2019年1月武汉儿童医院新生儿外科收治的新生儿Currarino综合征并发尿潴留4例及1998年1月至2019年1月文献报道的Currarino综合征出现排尿异常16例进行文献复习。结果:2例为直肠肛管狭窄+骶前畸胎瘤+脊髓脊膜膨出+骶骨异常,行后矢状路根治手术后出现急性尿潴留,其中1例术后2个月恢复排尿,1例并发神经源性膀胱。另2例为高位肛门闭锁+骶前畸胎瘤+尾椎缺如,其中1例因骶前肿物压迫尿道突然无尿,行后矢状路骶前肿块切除及肛门成形术,术后排尿功能恢复,1例为出生后即出现尿潴留、双肾积水,二期行Pe?a术中时发现骶前包块,术后复查膀胱潴留及肾积水加重。通过文献检索,总共有20例纳入本次研究,患儿平均年龄为1个月,尿潴留13例,尿失禁4例,神经源性膀胱3例,12例有脊髓脊膜膨出,4例脊髓栓系,7例圆锥水平低位。结论:新生儿Currarino综合征常并发排尿异常、骶前包块压迫尿道,手术中对盆神经及骶髓的损伤、骶前脊髓脊膜膨出以及脊髓圆锥水平较低是影响手术效果的主要原因。

关键词：尿潴留 Currarino综合征神经源性膀胱新生儿