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癌性胸水p16基因纯合性缺失检测的临床意义

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癌症 2000年第3期19卷 253-255页

作者：桂淑玉汪渊刘虎周青安徽医科大学分子生物学实验室安徽合肥230032 安徽医科大学附属医院呼吸内科安徽合肥230022

目的 :研究癌性胸水 p16基因纯合性缺失检测的临床意义。方法 :应用PCR技术检测胸水 p16基因第一、二外显子纯合性缺失 ,并结合胸水脱落细胞学检测分析其在临床诊断中的意义。结果 :表明所检 31例肺癌所致癌性胸水标本中均无出现 p16... 详细信息

目的 :研究癌性胸水 p16基因纯合性缺失检测的临床意义。方法 :应用PCR技术检测胸水 p16基因第一、二外显子纯合性缺失 ,并结合胸水脱落细胞学检测分析其在临床诊断中的意义。结果 :表明所检 31例肺癌所致癌性胸水标本中均无出现 p16基因第一外显子纯合性缺失 ,12例有p16基因第二外显子纯合性缺失 ,阳性率为 38 71% (12 / 31)。 16例脱落细胞学检测阳性 ,阳性率为 5 1 6 2 % (16 / 31) ;15例脱落细胞学检测阴性 ,其中 6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失 ;两者联合检测 ,阳性率提高至 70 97% (2 2 / 31)。统计学分析表明 p16基因第二外显子纯合性缺失和脱落细胞学检测阳性率间无明显差异 ,而两者联合阳性检出率明显高于单独p16基因第二外显子纯合性缺失 (P <0 0 1)和脱落细胞学检测 (P <0 0 1)。 2 1例结核性胸水中均无胸水 p16基因纯合性缺失。结论 :本组资料说明胸水 p16基因第二外显子纯合性缺失与脱落细胞学联合检测可增加诊断的阳性率。

关键词：纯合性缺失 PCR 胸腔积液癌症 p16基因

胸水p16基因纯合性缺失的检测及其临床意义

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胸水p16基因纯合性缺失的检测及其临床意义

作者：桂淑玉安徽医科大学

学位级别：硕士

目的建立多肿瘤抑制基因（MTS1或p16基因）纯合性缺失分析方法，探讨胸水p16基因纯合性缺失检测的临床意义。方法本研究以人Hela细胞mRNA为模板，经RT-PCR获得p16第二外显子cDNA，插入质粒pGEM-T中，然后转化***XL1-blue，经限制性内... 详细信息

目的建立多肿瘤抑制基因（MTS1或p16基因）纯合性缺失分析方法，探讨胸水p16基因纯合性缺失检测的临床意义。方法本研究以人Hela细胞mRNA为模板，经RT-PCR获得p16第二外显子cDNA，插入质粒pGEM-T中，然后转化***XL1-blue，经限制性内切酶酶切图谱分析，并以美国冷泉港实验室提供的p16基因第二外显子cDNA为探针证实我们所构建的重组质粒含p16基因第二外显子。此重组质粒经扩大培养、质粒纯化、EcoR1酶切、酶切DNA片段纯化获得p16基因第二外显子cDNA作为DNA探针;用地高辛标记法标记p16cDNA探针。再根据已发表的p16基因序列，设计p16基因第一、第二外显子和CDK4引物，以CDK4为内参照，经PCR获得特异扩增产物，无p16基因的PCR产物而出现CDK4扩增产物者为p16基因第一、第二外显子纯合性缺失。结果21例结核性胸水无一例存在p16基因纯合性缺失，31例癌性胸水中均未出现p16基因第一外显子纯合性缺失，但发现有12例存在p16基因第二外显子纯合性缺失，阳性率为38.7％（12/31）。同时也作了胸水细胞学检测，16例胸水细胞学阳性，其阳性率为51.62％（16/31）。在15例胸水细胞学阴性标本中，有6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失，两者联合检测，阳性率提高至70.97％（22/31）。结论本研究表明胸水p16基因第二外显子纯合性缺失的检测对癌性胸水诊断特异性高（100％），无假阳性，与胸水细胞学联合检测可增加诊断的阳性率，并可补充和提高胸水细胞学的诊断价值。

关键词：多肿瘤抑制基因(MTS1或 pl6基因) 纯合性缺失多聚酶链反应胸水恶性肿瘤细胞学诊断

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鸡肌球蛋白轻链激酶表达载体的构建

生物化学杂志 1997年第5期13卷 520-524页

作者：汪渊桂淑玉安徽医科大学生化教研室分子生物学实验室安徽医科大学附属医院

鸡肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平滑肌细胞收缩中具有重要作用．用ＰＣＲ产生构建所需的限制性内切酶ＳａｌⅠ位点，将鸡ＭＬＣＫｃＤＮＡ插入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，构建成ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ，并通过酶切图谱、ＳａｌⅠ位点... 详细信息

鸡肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平滑肌细胞收缩中具有重要作用．用ＰＣＲ产生构建所需的限制性内切酶ＳａｌⅠ位点，将鸡ＭＬＣＫｃＤＮＡ插入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，构建成ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ，并通过酶切图谱、ＳａｌⅠ位点序列分析得到证实．重组质粒在大肠杆菌中获得表达．

关键词：肌球蛋白轻链激酶表达载体鸡

VitE对动脉粥样硬化模型兔肝脏肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响

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中国药理学通报 2003年第11期19卷 1299-1302页

作者：朱华庆任斌江志奎周青桂淑玉汪渊安徽医科大学分子生物学实验室和生物化学教研室.安徽省基因工程重点研究实验室合肥230032 Dept of Pathology BIDMC&Harvard Medical School 中国人民解放军105医院检验科合肥230031 安徽医科大学附属医院呼吸内科合肥230032

目的　探讨维生素E(VitE)对动脉粥样硬化模型兔肝脏MLCK活性及表达的影响。方法　复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 3 2 P参入法检测肝脏MLCK活性 ,免疫荧光法检测肝组织MLCK的表达。结果　动脉粥样硬化兔模型建立成功 ,在喂胆固醇 4wk及 1... 详细信息

目的　探讨维生素E(VitE)对动脉粥样硬化模型兔肝脏MLCK活性及表达的影响。方法　复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 3 2 P参入法检测肝脏MLCK活性 ,免疫荧光法检测肝组织MLCK的表达。结果　动脉粥样硬化兔模型建立成功 ,在喂胆固醇 4wk及 12wk的动物组 ,肝脏MLCK活性[分别为 (1884 8 7± 74 34 3)、(18818 3± 346 9 9)cpm·mg-1protein]与正常对照比较 [(6 6 77 5± 10 9 6 0 )cpm·mg-1pro tein]升高 (P 0 0 5 )。荧光显微镜下观察显示 ,兔肝在喂食胆固醇膳食 4wk后MLCK的表达有所增强 ,12wk后显著增强 ,12wk组的膳食中同时加VitE后 ,MLCK表达有所下降。结论　在动脉粥样硬化过程中 ,肝脏病变可能与MLCK活性增强有关 ,VitE可能是降低肝脏MLCK活性的因素。

关键词：肌球蛋白轻链激酶 VitE 动脉粥样硬化肝脏

Vit E对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的影响

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中国药理学通报 2004年第6期20卷 652-656页

作者：江志奎朱华庆胡勇王健周青桂淑玉汪渊中国人民解放军第105医院合肥23003 安徽医科大学分子生物学实验室和生物化学教研室.安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的　研究动脉粥样硬化 (AS)模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的变化以及VitE对MLCK表达的影响。方法　复制AS兔模型 ;颈动脉取血后检测血清标本中各种血脂成分的变化 ,用免疫组化法和Westernblot分析动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK的表达... 详细信息

目的　研究动脉粥样硬化 (AS)模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达的变化以及VitE对MLCK表达的影响。方法　复制AS兔模型 ;颈动脉取血后检测血清标本中各种血脂成分的变化 ,用免疫组化法和Westernblot分析动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK的表达。结果　成功建立AS兔模型 ,模型血清中各种脂质发生显著变化。免疫组化和West ernblot实验表明 ,动脉粥样硬化模型兔在喂食胆固醇膳食 4wk和 12wk后动脉MLCK的表达增强 ,在喂食胆固醇膳食12wk同时添加VitE时 ,MLCK表达降低。结论　AS模型兔动脉MLCK的表达增强与动脉粥样硬化的形成相关。VitE可能是降低动脉MLCK表达的因素 ,同时抑制动脉粥样硬化的形成。

关键词：动脉粥样硬化 VitE 肌球蛋白轻链激酶免疫组化试验 Western blot

Claudin-18蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及临床意义

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安徽医科大学学报 2014年第12期49卷 1788-1792页

作者：刘英杰桂淑玉周青汪渊安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022 安徽医科大学分子生物学实验室合肥230032

目的探讨Claudin-18蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及其临床意义。方法选取50例肺腺癌所致恶性胸腔积液和37例肺部良性疾病所致胸腔积液标本,使用免疫组化和Western blot法检测Claudin-18蛋白表达,并与胸液细胞学结果比较,分析Cl... 详细信息

目的探讨Claudin-18蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及其临床意义。方法选取50例肺腺癌所致恶性胸腔积液和37例肺部良性疾病所致胸腔积液标本,使用免疫组化和Western blot法检测Claudin-18蛋白表达,并与胸液细胞学结果比较,分析Claudin-18蛋白表达与临床特征、疗效间关系。结果 Claudin-18蛋白诊断肺腺癌所致恶性胸腔积液的敏感性38%,特异性100%,总准确率64.4%。与胸液细胞学(敏感性54%)比较,差异无统计学意义,两者联合检测敏感性增至68%。Claudin-18在非吸烟肺腺癌患者中阳性率为50.0%,而在吸烟肺腺癌患者中阳性率仅为12.5%,两者比较差异有统计学意义(P=0.011),Claudin-18在恶性胸腔积液中表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及疗效无关。结论 Claudin-18可能参与肺癌发生、发展过程,尤其非吸烟肺癌患者;胸腔积液Claudin-18与细胞学联合检测可提高恶性胸腔积液诊断的阳性率,并具有一定的鉴别诊断价值。

关键词：肺腺癌恶性胸腔积液 Claudin-18 免疫组织化学

急性冠状动脉综合征患者外周Th17细胞水平检测及临床意义

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安徽医科大学学报 2010年第4期45卷 522-525页

作者：王怡李庆陈坷周青桂淑玉汪渊安徽医科大学分子生物学实验室生物化学教研室安徽省省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院中心实验室合肥230001 安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

目的探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中辅助性T细胞17(Th17)的异常与疾病的关系。方法采用流式细胞术检测18例胸痛综合征(CPS)、17例稳定性心绞痛(SA)、21例不稳定性心绞痛(UA)、20例急性心肌梗死(AMI)患者的外周血Th17细胞水平... 详细信息

目的探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中辅助性T细胞17(Th17)的异常与疾病的关系。方法采用流式细胞术检测18例胸痛综合征(CPS)、17例稳定性心绞痛(SA)、21例不稳定性心绞痛(UA)、20例急性心肌梗死(AMI)患者的外周血Th17细胞水平。应用酶联免疫吸附方法检测其外周血Th17相关细胞因子白细胞介素(IL)-17的表达。结果 AMI组和UA组外周血CD4+IL17+细胞占CD4+T细胞比例分别为(4.04±0.93)%、(3.07±0.50)%,明显高于SA组的(1.45±0.35)%和CPS组的(1.04±0.24)%(P<0.01),SA组的CD4+IL-17+细胞占CD4+T细胞比例较CPS组也有明显增加。AMI组和UA组IL-17水平分别为(55.91±5.13)pg/ml、(46.65±8.72)pg/ml,较SA组(17.13±4.13)pg/ml和CPS组(12.28±2.03)pg/ml明显增加。结论 ACS患者外周血Th17细胞水平增加,IL-17水平相应增加,Th17细胞可能参与动脉粥样硬化斑块不稳定和ACS的发病。

关键词：心胶痛,不稳定型心肌梗死冠状动脉疾病

鸡平滑肌肌球蛋白轻链激酶在NIH3T3细胞中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1997年第2期29卷 49-54页

作者：汪渊桂淑玉Ｄ．Ｍ．Ｗａｔｔｅｒｓｏｎ安徽医科大学生化教研室分子生物学实验室安徽医科大学附属医院

肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平滑肌细胞收缩过程中具有十分重要的作用。本文通过将ＭＬＣＫｃＤＮＡ插到质粒ｐＢＫｒｓｖ中构建成ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ，并转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞中。ＤＮＡ－ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓ... 详细信息

肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平滑肌细胞收缩过程中具有十分重要的作用。本文通过将ＭＬＣＫｃＤＮＡ插到质粒ｐＢＫｒｓｖ中构建成ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ，并转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞中。ＤＮＡ－ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明转染细胞可表达ＭＬＣＫ。活性分析表明所表达的ＭＬＣＫ具有生物学活性。为进一步研究ＭＬＣＫ在信号传导、调节平滑肌收缩等作用奠定了基础。

关键词：肌球蛋白轻链激酶 pBKrsv 表达 NIH3T3细胞

4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移的影响及其可能机制

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安徽医科大学学报 2013年第2期48卷 115-119页

作者：王北颜蕴文周青桂淑玉汪渊安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学与分子生物学教研室、安徽省/省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

目的研究维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯(ATFMPE)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞迁移的影响及可能机制。方法不同浓度维甲酸(ATRA)和ATFMPE处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231 48 h后,用MTT法检测ATFMPE对细胞增殖的影响,划痕法检测对... 详细信息

目的研究维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯(ATFMPE)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞迁移的影响及可能机制。方法不同浓度维甲酸(ATRA)和ATFMPE处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231 48 h后,用MTT法检测ATFMPE对细胞增殖的影响,划痕法检测对细胞迁移的影响,Western blot法检测相关迁移蛋白的表达。结果 AT-FMPE对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,ATFMPE和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7对细胞的迁移具有明显的抑制作用,Western blot结果显示ATFMPE显著降低MLCK的表达和肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化。结论 ATFMPE对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞的迁移具有抑制作用,可能与MLCK表达和MLC磷酸化水平下调相关。

关键词： 4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯乳腺癌细胞株MDA—MB-231 肌球蛋白轻链激酶