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巨噬细胞过表达Wnt5a对其炎性反应及共培养体系中MSCs成软骨分化的影响研究

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中国骨伤 2019年第11期32卷 1026-1033页

作者：桂先革曾晖陶可浙江医院骨1科浙江杭州310013 北京大学深圳医院骨关节科广州深圳518036 北京大学人民医院骨关节科北京100044

目的:通过构建和比较经Wnt5a基因修饰的巨噬细胞分别与骨髓干细胞(MSCs)2D单层贴壁与骨髓液跨小室共培养模型,旨在探索Wnt5a信号通过调控巨噬细胞炎症反应对MSCs成软骨分化产生的影响.方法:自2015年9月至2018年12月收集6例重度膝关节骨... 详细信息

目的:通过构建和比较经Wnt5a基因修饰的巨噬细胞分别与骨髓干细胞(MSCs)2D单层贴壁与骨髓液跨小室共培养模型,旨在探索Wnt5a信号通过调控巨噬细胞炎症反应对MSCs成软骨分化产生的影响.方法:自2015年9月至2018年12月收集6例重度膝关节骨关节炎拟行全膝关节置换术者的巨噬细胞、MSCs和骨髓液,其中男2例,女4例;年龄58~71岁.膝关节囊滑膜组织常规消化取得单细胞,经反复贴壁并行Ficoll液密度梯度离心和抗CD14抗体流式细胞术测定巨噬细胞纯度.将上述经鉴定的巨噬细胞置于IFN-γ联合TNF-α刺激48 h后,再使用重组腺相关病毒(rAAV)-lacZ或Wnt5a转染24h,分别与MSCs 2D单层贴壁或骨髓液构建跨小室共培养模型,采用HE染色、软骨特殊染色、X-gal染色、抗Wnt5a、抗Ⅱ和Ⅹ型胶原免疫组化染色对细胞形态与增殖能力、病毒转粢效率和成软骨分化能力等进行检测.结果:抗CD68免疫组化显示骨关节炎患者滑膜组织巨噬细胞明显增多.抗CD14流式细胞术证实经分离的滑膜巨噬细胞纯度为90.31%,IFN-γ联合TNF-α刺激后发现上清液中单核细胞趋化素蛋白-1(MCP-1)水平明显升高,提示巨噬细胞被激活;rAAV-lacZ转染3d后,Ⅹ-gal染色发现其能有效转染巨噬细胞,效率高达97.50%,且至少持续21 d;rAAV-Wnt5a转染巨噬细胞后通过刺激其Wnt5a的表达,而增加两种模型中的Wnt5a表达,抑制MCP-1的分泌,两种模型中Wnt5a组MCP-1表达量分别为14.76和61.51 pg/ml;此外,rAAV-Wnt5a转染后能促进细胞增殖及成软骨分化、软骨基质合成.结论:在巨噬细胞与MSCs 2D单层贴壁或骨髓液跨小室共培养条件下,rAAV介导的Wnt5a过表达能通过影响巨噬细胞炎症反应而促进软骨稳态的维持以及MSCs成软骨分化,巨噬细胞可能通过Wnt5a信号影响软骨稳态与MSCs成软骨分化.

关键词：巨噬细胞 Wnt5a蛋白软骨细胞干细胞骨髓

经皮椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折围手术期并发症分析

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中国骨伤 2013年第3期26卷 205-209页

作者：桂先革茹选良蒋增辉宋柏杉浙江医院骨科浙江杭州310013

目的:分析经皮球囊椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折的围手术期并发症的发生情况。方法:收集2009年6月至2011年12月采用PKP方法治疗椎体压缩性骨折患者63例,其中男18例,女45例,年龄62～91岁,平均75.3岁。所有患者为外伤后腰... 详细信息

目的:分析经皮球囊椎体后凸成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折的围手术期并发症的发生情况。方法:收集2009年6月至2011年12月采用PKP方法治疗椎体压缩性骨折患者63例,其中男18例,女45例,年龄62～91岁,平均75.3岁。所有患者为外伤后腰背部严重疼痛,行走受限,但均无神经症状及体征。影像学检查(X线和MRI)证实为骨质疏松性椎体压缩性骨折。合并症:骨质疏松63例,高血压37例,冠心病10例,贫血29例,糖尿病26例,慢阻肺11例,胃炎及消化性溃疡8例。回顾总结分析其围手术期并发症发生情况。结果:在63例患者中,手术前并发症9例(14.3%),术中及术后并发症17例(26.9%)。其中手术前并发症包括:坠积性肺炎1例,电解质紊乱2例,尿路感染2例,中度贫血2例,电解质紊乱合并中度贫血1例,坠积性肺炎合并神智淡漠、谵妄1例。术中及术后并发症中,骨水泥相关并发症9例(14.3%),其中2例患者出现骨水泥毒性反应,7例发生骨水泥渗漏(2例出现相关临床症状);非骨水泥相关并发症3例(4.76%),穿刺局部血肿1例,一过性神经损伤1例,术后左侧肋间神经痛1例;所有患者中,共有5例患者(7.93%)术后出现一过性的痛觉过敏。所有并发症经积极处理后均未导致严重后果。结论:PKP治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折的围手术期并发症并不少见,经积极处理一般无严重后果,应重视围手术期并发症的预防和处理。

关键词：后凸成形术脊柱骨折手术后并发症

老年股骨转子间骨折髓内钉内固定术后功能恢复危险因素分析

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中国骨伤 2018年第5期31卷 408-412页

作者：李庆庆桂先革蒋增辉茹选良浙江医院骨1科浙江杭州310013

目的:研究影响老年患者股骨转子间骨折髓内钉内固定术后髋关节功能恢复的相关因素,提出相应措施促进术后髋关节功能恢复。方法:选取2012年6月至2015年6月行股骨转子间骨折闭合复位髓内钉内固定术患者74例,男33例,女41例,平均年龄(75.07... 详细信息

目的:研究影响老年患者股骨转子间骨折髓内钉内固定术后髋关节功能恢复的相关因素,提出相应措施促进术后髋关节功能恢复。方法:选取2012年6月至2015年6月行股骨转子间骨折闭合复位髓内钉内固定术患者74例,男33例,女41例,平均年龄(75.07±7.89)岁。根据术后1年随访时Sanders功能评分将患者分为功能良好组(55例)和功能不良组(19例),统计患者年龄、性别、骨折分型、骨密度、术前基础疾病、营养状态、麻醉ASA分级、麻醉方式、术中复位情况、术后疼痛评分、术后并发症、尖顶距及是否康复师康复等相关因素。采用单因素和多因素Logistic分析对相关危险因素进行评估。结果 :单因素分析显示患者年龄、骨密度、营养状态、麻醉ASA分级、麻醉方式、复位情况、康复师康复,尖顶距对术后髋关节功能恢复差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示骨密度(P=0.006,OR=0.077),康复师康复(P=0.006,OR=0.070),麻醉ASA分级(P<0.001,OR=0.049),营养状态(P=0.046,OR=0.188)是术后髋关节功能恢复的独立影响因素。结论 :骨密度、康复师康复、麻醉ASA分级和营养状态影响老年股骨转子间骨折髓内钉内固定术后功能恢复,通过整合骨科、麻醉科、康复科、营养科等学科,建立快速康复外科体系,可有效促进老年患者术后髋关节功能恢复。

关键词：股骨髋骨折功能恢复危险因素

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老年股骨颈骨折的治疗进展

临床骨科杂志 2010年第5期13卷 569-572页

作者：桂先革熊奡曾晖北京大学深圳医院骨关节科广东深圳518036 汕头大学医学院临床七年制广东汕头515041

股骨颈骨折是骨科临床上较常见的骨折之一。随着老龄化社会的到来,股骨颈骨折的发生率明显上升,预计到2040年全球每年新发患者数将达到50－60万例次。多数老年人股骨颈骨折与骨质疏松所致骨小梁变细、数量变少有关,加之老年人常伴有视... 详细信息

股骨颈骨折是骨科临床上较常见的骨折之一。随着老龄化社会的到来,股骨颈骨折的发生率明显上升,预计到2040年全球每年新发患者数将达到50－60万例次。多数老年人股骨颈骨折与骨质疏松所致骨小梁变细、数量变少有关,加之老年人常伴有视力减退、神经肌肉功能障碍等,多因摔倒等低能量损伤发生骨折。股骨颈骨折因其解剖特点难以愈合,容易形成骨折不愈合和股骨头缺血坏死。老年人股骨颈骨折后生活质量明显下降,伤后1年病死率高达[第一段]

关键词：股骨颈骨折骨折固定术综述

单侧和双侧PKP术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折疗效的对比研究

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单侧和双侧PKP术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折疗效的对比研究

2014年浙江省骨科学学术年会

作者：李庆庆茹选良桂先革蒋增辉浙江医院

目的:研究单侧和双侧经皮球囊扩张椎体成形术(PKP)在治疗老年骨质疏松性椎体压缩性骨折中的疗效差异。方法:选取2012年10月至2013年10月在浙江医院骨科因骨质疏松性椎体压缩性骨折而施行PKP术的50例患者作为研究对象,其中单侧入路为16例...

目的:研究单侧和双侧经皮球囊扩张椎体成形术(PKP)在治疗老年骨质疏松性椎体压缩性骨折中的疗效差异。方法:选取2012年10月至2013年10月在浙江医院骨科因骨质疏松性椎体压缩性骨折而施行PKP术的50例患者作为研究对象,其中单侧入路为16例,双侧入路为34例。对比观察两组病例的手术时间、手术过程、术后即刻、术后1个月及术后3个月的并发症发生率、脊柱后凸Cobb角、视觉模拟疼痛评分(VAS)及日常生活能力评分(ADL)的差异。结果:单侧入路PKP术时间明显短于双侧,两组手术时间有显著性差异(p<0.05);获得术后随访3-4个月,未发生包括骨水泥侧漏至椎体两侧、椎间盘、椎管、椎体周围静脉引流、患者神经症状加重、瘫痪等影像学及临床并发症,两组脊柱后凸Cobb角、视觉模拟疼痛评分及日常生活能力评分无显著性差异。结论:单侧入路与双侧入路经皮球囊扩张椎体成形术对骨质疏松性椎体压缩性骨折患者均具有快速缓解疼痛,恢复部分椎体高度,矫正脊柱后凸畸形,术后并发症少的特点,但单侧入路PKP术手术时间较短,过程较简单,且暴露于辐射下的时间明显减少。

关键词：

Runx2基因重组慢病毒促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

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Runx2基因重组慢病毒促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

2014年浙江省骨科学学术年会

作者：李庆庆茹选良桂先革蒋增辉浙江医院

目的:本实验利用重组Runx2基因的慢病毒感染骨髓间充质干细胞,使Runx2基因在骨髓间充质干细胞中表达水平增高,检测其成骨相关基因表达的水平,研究Runx2基因促进骨髓间充质干细胞成骨分化的情况。方法:PCR扩增Runx2基因,并连接到慢病毒... 详细信息

目的:本实验利用重组Runx2基因的慢病毒感染骨髓间充质干细胞,使Runx2基因在骨髓间充质干细胞中表达水平增高,检测其成骨相关基因表达的水平,研究Runx2基因促进骨髓间充质干细胞成骨分化的情况。方法:PCR扩增Runx2基因,并连接到慢病毒表达载体质粒Pez-lv201,与包装质粒共转染293T细胞进行包装,测得慢病毒液滴度。取4周龄SD大鼠胫骨,分离、培养BMSCs,流式细胞仪鉴定。将Runx2重组慢病毒感染BMSCs。显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR分析BMSCs成骨基因的表达情况。结果:Runx2基因重组慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定正确。测得慢病毒液滴度为1.6*109TU/ml。流式细胞仪检测表面抗原CD90和CD105,表达率为99.8%、99.3%。重组慢病毒感染后实验组细胞形态呈成骨样细胞改变;对照组未见明显变化。实验组Runx2、OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因的表达水平随时间推移而增高;对照组上述基因均无明显表达。结论:利用Runx2重组慢病毒感染BMSCs,使其高表达Runx2基因,可以使OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因表达增强,说明Runx2基因可以促进BMSCs向成骨方向分化。

关键词：组织工程 Runx2 骨髓间充质干细胞慢病毒载体

超顺磁性纳米多孔活性材料修复兔桡骨缺损的实验研究

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超顺磁性纳米多孔活性材料修复兔桡骨缺损的实验研究

2015年浙江省骨科学学术年会

作者：李庆庆茹选良桂先革蒋增辉浙江医院

【目的】将具有超顺磁性纳米活性复合人工骨(PLGA-PEG/Nano-HA/γ-FeO),以及不具有超顺磁性的纳米活性复合人工骨(PLGA-PEG/Nano-HA),与骨髓间充质干细胞共培养,复合材料植入实验动物体内后加入重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)于材料表...

【目的】将具有超顺磁性纳米活性复合人工骨(PLGA-PEG/Nano-HA/γ-FeO),以及不具有超顺磁性的纳米活性复合人工骨(PLGA-PEG/Nano-HA),与骨髓间充质干细胞共培养,复合材料植入实验动物体内后加入重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)于材料表面,通过动物实验对骨缺损的修复能力和效果进行考察,为新型纳米复合人工骨的研制及临床应用打下坚实的理论基础。【方法】全骨髓贴壁

关键词：

PMMA骨水泥颗粒对大鼠巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响

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中国骨质疏松杂志 2011年第6期17卷 498-502页

作者：张勇曾晖熊奡陶可桂先革康斌辛风北京大学深圳医院骨关节科深圳518036 汕头大学医学院

目的观察PMMA骨水泥颗粒对体外培养的巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响。方法大鼠腹腔灌洗液筛选法培养巨噬细胞,CD68单抗免疫细胞化学法鉴定细胞纯度和活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达... 详细信息

目的观察PMMA骨水泥颗粒对体外培养的巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响。方法大鼠腹腔灌洗液筛选法培养巨噬细胞,CD68单抗免疫细胞化学法鉴定细胞纯度和活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达量,分别观察不同浓度PMMA骨水泥颗粒及一定浓度的骨水泥颗粒作用不同时间对巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因表达的影响。结果 PMMA骨水泥颗粒促进了体外培养的巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达,并表现出一定的浓度及时间相关性;颗粒浓度在0.25 mg/mL时SOCS1及SOCS3基因表达量明显升高(P<0.05);当颗粒作用时间在24 h左右时SOCS1及SOCS3基因表达升高最显著(P<0.05)。结论 PMMA骨水泥颗粒能够促进巨噬细胞SOCS1及SOCS3基因的表达。

关键词：无菌性松动骨水泥颗粒 SOCS1 SOCS3 基因表达

基于CT三维重建的丽水人髋臼前倾角测量分析及临床意义研究

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基于CT三维重建的丽水人髋臼前倾角测量分析及临床意义研究

2015年浙江省骨科学学术年会

作者：李庆庆茹选良桂先革蒋增辉浙江医院

【目的】髋臼的前倾角与外展角决定了髋臼假体放置的位置。全髋关节置换术术后效果与臼杯安放的位置密切相关。髋臼位置的准确把握使得臼杯可以安放在最合适的位置并有助于术后效果评估和随访。目前各学者对髋臼外展角的测量结果比较一... 详细信息

【目的】髋臼的前倾角与外展角决定了髋臼假体放置的位置。全髋关节置换术术后效果与臼杯安放的位置密切相关。髋臼位置的准确把握使得臼杯可以安放在最合适的位置并有助于术后效果评估和随访。目前各学者对髋臼外展角的测量结果比较一致,而前倾角的测量结果差异较大。髋臼前倾角是描述髋关节功能和稳定性的重要指标之一,本实验测量分析丽水人髋臼前倾角,并将测量结果与国内外其他学者测量的结果进行对比,分析其中的差异,同时对比分析不同性别及身高之间髋关节前倾角的差异,为设计适合丽水人的髋关节假体提供数据支持。【材料与方法】随机选取115名丽水人(男63例,女52例)作为研究对象,按性别和身高不同分组,对各组研究对象骨盆进行螺旋CT扫描,获得完整的骨盆Dicom格式数据,将扫描的数据导入MIMICS软件中重建髋臼三维模型,运用imageware软件测量髋臼模型的前倾角并进行统计分析。【结果】1.本实验的测量结果及与国内外数据的对比:115名丽水人的髋臼前倾角为(16.37±3.83)°,与国外其他类似研究结果对比差异有统计学意义(P0.05)。【结论】本研究较为精确测得丽水人髋臼前倾角,为丽水人髋关节解剖数据库的建立提供数据支持,为设计适合丽水人的髋关节假体提供理论依据。

关键词：髋臼前倾角髋关节假体