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OGT介导NSL3的O-GlcNAc修饰在mtDNA转录调控中的作用机制研究

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OGT介导NSL3的O-GlcNAc修饰在mtDNA转录调控中的作用机制研究

作者：柴文静吉林大学

学位级别：硕士

O-GlcNAc糖基化修饰在能量物质和分解代谢中扮演重要的角色,是一种将核苷酸糖供体UDP-GlcNAc在蛋白质的丝氨酸或者苏氨酸残基上添加或者去除的重要的蛋白质翻译后修饰。UDP-GlcNAc通过己糖胺生物合成途径(HBP)生成,汇合了葡萄糖、氨基... 详细信息

O-GlcNAc糖基化修饰在能量物质和分解代谢中扮演重要的角色,是一种将核苷酸糖供体UDP-GlcNAc在蛋白质的丝氨酸或者苏氨酸残基上添加或者去除的重要的蛋白质翻译后修饰。UDP-GlcNAc通过己糖胺生物合成途径(HBP)生成,汇合了葡萄糖、氨基酸、脂肪酸和核苷酸代谢。因此,O-GlcNAc糖基化水平密切依赖于核苷酸糖供体UDP-GlcNAc的浓度,即细胞中UDP-GlcNAc浓度的波动是由进入细胞的营养水平变化所决定。为此,O-GlcNAc糖基化修饰也被认为是一种敏感的营养感应器。在细胞内,O-GlcNAc化学基团由OGT(O-GlcNAc transferase)负责添加,并由OGA(O-GlcNAcase)负责去除,OGT和OGA两种酶协同调控细胞内的O-GlcNAc糖基化修饰水平。已有研究报道NSL(非特异性致死)组蛋白乙酰基转移酶复合物可以乙酰化组蛋白H4上Lys-5、Lys-8和Lys-16位点。有趣的是,OGT作为NSL复合物的亚基组份参与复合物的组成。我们在前期研究中发现OGT不仅可以与NSL复合物中的关键亚基NSL3结合,同时,可以糖基化NSL3 Thr755位点,进而稳定NSL复合物的结构和全酶活性。另外,有文献报道NSL3可以协助MOF进入线粒体并与线粒体DNA(mtDNA)的D-loop区结合,进而影响mtDNA转录。本论文拟通过研究NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰和mtDNA转录之间的相关性,探究NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰在mtDNA转录调控中的作用机制。以下为本论文的主要工作与结果:1.O-GlcNAc糖基化修饰作为细胞内的营养感受器,对细胞内葡萄糖水平变化极其敏感。为了探究NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰对细胞营养水平的响应,我们在293T细胞中,通过改变细胞培养基中的葡萄糖浓度,检测了NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰水平是否因葡萄糖浓度的改变而变化。结果显示NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰水平随着葡萄糖浓度的增加而增高,提示NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰与葡萄糖代谢密切相关。2.根据文献报道NSL3作为NSL复合物中的关键亚基,通过协助MOF进入线粒体参与调控mtDNA转录,本论文探究了NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰对mtDNA转录调控的影响。首先,我们利用免疫荧光染色及细胞亚组份分离实验明确了NSL复合物在线粒体中的定位,同时,利用O-GlcNAc去糖基化酶(OGA)活性抑制剂TMG增加全细胞O-GlcNAc糖基化修饰水平,经亚组份分离实验证实增加O-GlcNAc糖基化修饰水平可以促进NSL3在线粒体中募集;其次,通过过表达NSL3野生型和NSL3 Thr755糖基化位点突变质粒,证明NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰同样可以促进NSL3进入线粒体;最后,为了进一步探究NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰对其在mtDNA转录的影响,我们利用实时定量PCR实验证明提高全细胞O-GlcNAc糖基化修饰水平或增加NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰水平都可以促进mtDNA转录,提示mtDNA转录至少有一部分是依赖于NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰。3.为了明确NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰对线粒体功能及细胞生长状态的影响,我们在Hela细胞中转染野生型NSL3和NSL3 Thr755位点突变质粒后,进行了JC-1染色和细胞划痕实验,结果表明野生型NSL3组可以稳定线粒体膜电位,抑制细胞的迁移能力,提示NSL3 Thr755位点的O-GlcNAc糖基化修饰对稳定线粒体膜电位和维护线粒体相关生物学功能中发挥重要的作用。4.在快速增生的癌细胞中常优先采用糖酵解代谢途径(Warburg效应)。前述实验结果证实NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰可以抑制癌细胞的迁移能力。我们利用GEPIA数据库进行蛋白表达量分析,发现NSL3在不同癌症中表达量差异较大,对患者生存图谱分析发现NSL3低表达量可以利于癌症预后,提示NSL3在癌症发生发展过程中也发挥着重要的作用。综上所述,我们推测NSL3可能通过O-GlcNAc糖基化修饰感应外部营养环境,通过NSL3 Thr755位点的O-GlcNAc糖基化修饰影响蛋白稳定性,进而影响NSL3在线粒体中的募集及调控mtDNA的转录。本论文的实验结果为调控mtDNA转录提供了新的理论基础,也为线粒体相关疾病的治疗提供了新的有效可行的潜在靶点。

关键词： NSL3 O-GlcNAc糖基化修饰线粒体 mtDNA

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长链非编码RNA的预测方法研究

长链非编码RNA的预测方法研究

作者：柴文静青岛大学

学位级别：硕士

长链非编码RNA(Long Non-coding RNA,lncRNA)在许多生物过程中都发挥着重要的作用,如对转录起始的调控、转录后的表观遗传水平以及人类的生长发育。因此,能够快速且准确地区分编码RNA和lncRNA就显得尤为重要。由于高通量测序技术的发展... 详细信息

长链非编码RNA(Long Non-coding RNA,lncRNA)在许多生物过程中都发挥着重要的作用,如对转录起始的调控、转录后的表观遗传水平以及人类的生长发育。因此,能够快速且准确地区分编码RNA和lncRNA就显得尤为重要。由于高通量测序技术的发展,越来越多的转录本被测序出来,过去那种基于比对特征识别lncRNA的方法不仅受到物种注释信息的影响而且识别速度较慢。另一方面,目前的识别方法对短序列的lncRNA效果较差。因此,有必要开发一种基于无比对特征且有效识别短序列lncRNA的方法来识别新转录本中的lncRNA。本文在研究基因序列的基础上提出了一种新的预测方法,即基于无比对特征的编码潜在预测(Coding Potential prediction based on Alignment-Free method,CPAF)。此方法基于CTD特征、Fickett Score、Hexamer Score、修正的k-mer特征共提取96个特征,其中修正的k-mer特征是首次应用在lncRNA的识别中的。为了减轻特征冗余导致的模型过拟合影响,本文运用Lasso-Logistic方法构建预测模型,并采用十折交叉验证确定最优的λ值。通过在人类模型与综合模型上与CPPred、CPAT、CPC2和PLEK方法相比,凸显了CPAF方法在准确性、特异性、敏感性和ROC曲线等指标上的表现更好,且在跨物种上的识别效果更好,表明此方法具有一定的普适性。此外,该方法通过随机引入错误标签表明具有一定的容错性。总之,此方法不仅能更好地区分编码RNA和lncRNA,而且能更好地区分短序列编码RNA及lncRNA。

关键词： lncRNA 无比对特征修正的k-mer Lasso-Logistic 转录本

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舆论监督与媒介审判之边界建构

今传媒 2023年第5期31卷 125-128页

作者：柴文静上海政法学院上海纪录片学院上海201701

媒体对司法活动的报道是当今法学界与新闻传播学界共同关注的课题。监督司法本是新闻媒体舆论监督的应有之义,但是,随着传统的舆论格局发生变化,媒介审判现象频发。厘清舆论监督与媒介审判之边界问题,有利于新闻媒体明确自身角色与责任... 详细信息

媒体对司法活动的报道是当今法学界与新闻传播学界共同关注的课题。监督司法本是新闻媒体舆论监督的应有之义,但是,随着传统的舆论格局发生变化,媒介审判现象频发。厘清舆论监督与媒介审判之边界问题,有利于新闻媒体明确自身角色与责任,形成媒体与司法之间良性互动的和谐关系,从而推动二者共同发展。本文通过系统归纳总结相关文献,并结合现有的各项规章制度,试图为划定舆论监督与媒介审判之边界提供建议,探索防止新闻媒体越界的具体举措。

关键词：舆论监督媒介审判边界建构

维生素C后处理对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响

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维生素C后处理对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响

作者：柴文静河北医科大学

学位级别：硕士

目的:心肌缺血再灌注损伤会引起心肌顿抑、心律失常、舒缩功能障碍等多种心脏不良事件的发生。维生素C是一种弱酸性维生素,具有强大的抗氧化作用,以往研究发现,VC能够清除氧自由基、抑制细胞膜脂质过氧化、减轻心肌超微结构的损伤,但其... 详细信息

目的:心肌缺血再灌注损伤会引起心肌顿抑、心律失常、舒缩功能障碍等多种心脏不良事件的发生。维生素C是一种弱酸性维生素,具有强大的抗氧化作用,以往研究发现,VC能够清除氧自由基、抑制细胞膜脂质过氧化、减轻心肌超微结构的损伤,但其是否对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤有保护作用及发挥保护作用的具体机制尚不清楚。本研究观察维生素C后处理对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤是否有保护作用,同时设立与其pH值相同的HCl对照组,探讨其发挥作用的相关机制。方法:健康雄性SD大鼠40只,体重230-280g,随机分为4组,每组10只:对照组(Control组)、缺血再灌注组(I/R组)、维生素C后处理组(VC组)、盐酸后处理组(HCl组)(pH值与VC组相同,均为5.80)。Control组连续灌流140min。I/R组平衡灌流20min,全心缺血30min,再灌注90min。VC组、HCl组在再灌注开始前分别给与浓度为10m M的VC溶液及与VC溶液相同pH值的HCl溶液推注,然后继续灌注90min。采用Langendorff离体心脏灌流装置进行模型制备,记录各时间点的心功能指标,包括心率(heart rate,HR)、左心室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左心室压力最大变化速率(±dp/dtmax)。收集平衡灌流20min末、复灌1min、3min、5min、10min、30min、60min、90min各时间点灌流液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性。复灌结束后,取下心脏,用TTC染色法检测心肌梗死面积,冷冻切片后行HE染色观察细胞形态,Western Blot检测相关蛋白的表达。采用SPSS 22.0统计学软件进行单因素方差(ANOVA)分析,以P0.05),而在缺血再灌注不同时间点大鼠心脏血流动力学指标变化各有不同。I/R组、VC组、HCL组经缺血30min再灌后,在再灌注早期,±dp/dtmax与相应对照组相比明显降低(P0.05);2 各组心肌梗死面积的比较与I/R组(37.92%±1.77%)相比,VC组(18.24%±1.67%)与HCl(21.58%±1.20%)心肌梗死面积显著减少(P0.05)。再灌注期间,I/R组、VC组和HCL组LDH活性均呈不同程度升高,再灌注3min时达到峰值,之后逐渐下降,90min时I/R组(171.87±47.75U/L)与HCl组(133.13±36.73U/L)LDH的含量较control组(30.02±13.13U/L)仍显著升高(P<0.05),而VC组(61.87±30.59U/L)与I/R组比较,LDH含量明显降低(P<0.05);4 各组心肌组织HE染色结果control组心肌细胞排列整齐,边界清楚,无炎性浸润。I/R组心肌细胞排列紊乱,出现不同程度细胞肿胀、坏死、溶解现象,心肌纤维断裂,肌间隙明显增宽,大量中性粒细胞浸润。VC组心肌细胞排列不规则,部分细胞出现肿胀、溶解、碎裂现象,肌间隙略增宽,少量中性粒细胞浸润。HCL组心肌纤维排列不规则,细胞肿胀,可见细胞溶解、碎裂,肌间隙增宽,中性粒细胞浸润。表明维生素C可以明显减轻缺血再灌注对心肌细胞的损伤;5 各组心肌组织中cyto-C、Bax、BCl-2、Caspase-9、P-ERK、ERK蛋白表达量的比较与control组相比,I/R组、VC组、HCL组中cyto-C、Bax、Caspase-9、P-ERK表达明显增多(P<0.05),VC组及HCl组中BCl-2的表达明显增多(P<0.05),提示心肌再灌注后,线粒体损伤,凋亡途径激活,ERK信号通路活化;与I/R组相比,相同pH值的VC组及HCl组中cyto-C、Bax、Caspase-9、P-ERK的表达均明显减少(P<0.05),BCl-2表达明显增加(P<0.05),提示VC及相同pH值的HCl组可通过下调cyto-C、Bax、Caspase-9的表达水平,上调BCl-2的表达水平起保护心肌的作用,同时二者均通过抑制ERK信号通路发挥作用。结论:1 维生素C后处理能够通过抑制ERK信号通路,下调cyto-C、Bax、Caspase-9的表达,同时上调BCl-2的表达,影响细胞凋亡,从而改善离体大鼠心脏缺血

关键词：缺血再灌注损伤维生素C 心肌保护自由基离体心脏灌流

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HX区市场局公务员绩效考核优化研究

HX区市场局公务员绩效考核优化研究

作者：柴文静河北科技大学

学位级别：硕士

公务员绩效考核是公务员管理的重要组成部分,对于提高公务员工作的积极性和工作效率有着重要的作用。随着我国《公务员法》及相关考核制度的制定和实施,HX市场局公务员绩效考核也得到了不断地完善和改进。但是,在HX区市场局公务员绩效... 详细信息

公务员绩效考核是公务员管理的重要组成部分,对于提高公务员工作的积极性和工作效率有着重要的作用。随着我国《公务员法》及相关考核制度的制定和实施,HX市场局公务员绩效考核也得到了不断地完善和改进。但是,在HX区市场局公务员绩效考核实际工作中仍然发现了一些问题,影响着行政效率的提高。本文以HX区市场局为例,综合运用文献资料法、实地调研法、案例分析法对HX区市场局公务员绩效考核进行优化研究。首先,阐述了研究的背景和意义,评述了国内外公务员绩效考核的研究现状,介绍了相关概念和理论。其次,分析了HX区市场局单位的概况、人员结构的情况和现行的考核制度,采用问卷调查的方法发现考核指标、考核方法、考核结果运用和考核监督机制这四个方面的问题。第三,具体分析了问题的成因,主要有公务员工作性质特殊,考核重要性认识不够,考核专业化程度低,考核体制存在缺陷,考核理论未有效指导实践这五个方面。第四,介绍了英国、美国、日本、韩国等国家以及国内考核水平较高地区的先进经验和方法。第五,运用360度考核法、目标考核法等方法提出优化建议,主要是思路、岗位分析、内容和方法的优化。最后,制定了组织、流程、方法、主体、监督和沟通这些方面的保障措施并进行了优化效果的分析。

关键词：公务员绩效考核优化设计保障措施

碳酸酐酶异源表达及在微藻中CO2固定作用机制的研究

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碳酸酐酶异源表达及在微藻中CO2固定作用机制的研究

作者：柴文静华北理工大学

学位级别：硕士

本文以雨生红球藻为研究对象,首先克隆嗜无机碳(Ci)微藻碳酸酐酶(CAs),研究CAs水合CO固碳效率,构建体外酶法固碳体系,增强CO的固定;此外,构建微藻遗传体系,转外源CAs至雨生红球藻中,以期进一步强化Ci的利用;同时采用转录组学分析雨生红... 详细信息

本文以雨生红球藻为研究对象,首先克隆嗜无机碳(Ci)微藻碳酸酐酶(CAs),研究CAs水合CO固碳效率,构建体外酶法固碳体系,增强CO的固定;此外,构建微藻遗传体系,转外源CAs至雨生红球藻中,以期进一步强化Ci的利用;同时采用转录组学分析雨生红球藻碳代谢网络,为微藻综合固碳解决温室气体,生产高质产品奠定基础。具体结果如下:1.使用PCR扩增技术得到CAs DNA目的片段,构建pCold-CAs蛋白表达载体,转入BL21(DE3)中表达并优化诱导条件。结果表明:16°C、1 mM IPTG诱导24 h条件下可溶性融合目的蛋白质量达21.15 mg/L。将CAs蛋白用镍柱结合超滤离心管纯化,得到分子质量在110 kD左右的目的CAs蛋白,使用Xa因子蛋白酶(Factor Xa)去除His标签后获得单一的、高纯度的CAs,并进行质谱鉴定,确认该多肽序列为α-CA2。2.利用酸碱指示剂(溴百里酚蓝)法测得酶活为726.8 WAU,在此基础上构建CAs体外固碳体系,通过探索Tris、NaOH、KOH等3种碱液在不同温度、不同浓度NaCl溶液条件下对固碳效果的影响,结果显示100μg CAs在1 M Tris(pH 9.5)、45°C条件下固碳效果最好,固碳产生碳酸钙质量为21.00 mg,固碳效率可达商业Sigma-CAs效率的91.3%。利用水合反应检测CAs的稳定性,结果显示CAs在第7 d酶活保持较好达到90.95%,高于商业酶的77.61%。3.对雨生红球藻进行抗性筛选,确定30μg/mL博来霉素致死率100%。通过PCR扩增、酶切、酶连等手段构建含卡那霉素抗性基因的表达载体pCAMBIA1301-CAs,采用农杆菌侵染法将构建的载体转入藻细胞,成功获得9株阳性转化子。4.使用Ilumina Hi Seq TM 2000测序平台分析高碳培养下雨生红球藻碳代谢途径,结果显示CO固定通路、糖酵解途径、脂肪酸及虾青素合成相关基因表达量显著增强,揭示了雨生红球藻中碳从CO到次级代谢物合成网络,为微藻固碳生产高值产品提供理论支持。图41幅;表20个;参67篇。

关键词：碳酸酐酶雨生红球藻遗传转化碳代谢

经导管射频消融去肾交感神经术治疗难治性高血压的相关器械及研究

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中华高血压杂志 2016年第7期24卷 685-688页

作者：柴文静刘德敏崔炜河北医科大学第二医院心内科河北省心脑血管病研究所河北石家庄050000

高血压是一项重要的公共卫生问题,预计到2025年全球高血压患者将增加60%,达到15.6（15.4-15.8）亿,其中10%-30%为难治性高血压（resistant hypertension,RH）;高血压人群中,RH患者占15%-20%。经皮经导管射频消融去肾交感神经术（renal d... 详细信息

高血压是一项重要的公共卫生问题,预计到2025年全球高血压患者将增加60%,达到15.6（15.4-15.8）亿,其中10%-30%为难治性高血压（resistant hypertension,RH）;高血压人群中,RH患者占15%-20%。经皮经导管射频消融去肾交感神经术（renal denervation,RDN）作为一种有前景的非药物疗法,

关键词：难治性高血压经导管射频消融高血压人群非药物疗法肾动脉诊室血压消融导管动态血压公共卫生降压效应

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超体验

作者：苏醒柴文静黄璠

来源：南通市图书馆图书评论

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超大型钢桁架液压同步提升有限元分析

建筑技术 2017年第2期48卷 152-154页

作者：柴文静张新爱保定职业技术学院河北保定071000

某工程顶部共设有4榀片式主桁架,12榀片式次桁架,桁架跨度达34 m,最大重量达45 t;因结构自重较大,安装位置较高,利用液压提升器将桁架整体提升,可降低现场高空施工量和安装施工难度。提升平台最大下挠度约6.8 mm,杆件最大应力比约0.48,... 详细信息

某工程顶部共设有4榀片式主桁架,12榀片式次桁架,桁架跨度达34 m,最大重量达45 t;因结构自重较大,安装位置较高,利用液压提升器将桁架整体提升,可降低现场高空施工量和安装施工难度。提升平台最大下挠度约6.8 mm,杆件最大应力比约0.48,满足提升要求;吊具最大应力约223 MPa,最大变形约0.33 mm,满足提升施工要求。3榀桁架跨中最大下挠度约9.6 mm,结构杆件应力比均小于0.5,桁架最大提升反力约451 k N;单片桁架提升工况下最大变形约3.3 mm,杆件应力比均小于0.5,满足提升要求。

关键词：钢桁架同步提升最大下挠度应力比最大变形