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融合蛋白GST-PADI4可溶性表达条件的优化及纯化

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 404-408,411页

作者：柴政斌张更林王学政韩金祥卫生部生物技术药物重点实验室山东省罕少见病重点实验室山东省医药生物技术研究中心山东省医学科学院山东济南250062 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250062

目的优化融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并对蛋白进行纯化。方法对融合蛋白GST-PADI4工程菌的诱导温度(16、20、25、30、37℃)、诱导剂IPTG浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1 mmol/L)、诱导时菌液A600值(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0)、诱... 详细信息

目的优化融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并对蛋白进行纯化。方法对融合蛋白GST-PADI4工程菌的诱导温度(16、20、25、30、37℃)、诱导剂IPTG浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1 mmol/L)、诱导时菌液A600值(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0)、诱导时间(8、12、16、20、24 h)进行优化,分析融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达情况;按优化的表达条件进行大量表达后,采用Sepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果在16℃,菌液A600值约为0.4时,以0.1 mmol/L IPTG诱导12 h,融合蛋白GST-PADI4有较高的可溶性表达;纯化的融合蛋白纯度为91%。结论优化了融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并获得了高纯度的可溶性融合蛋白,为后续研究PADI4蛋白的功能奠定了基础。

关键词：肽酰基精氨酸脱亚胺酶Ⅳ 融合蛋白可溶性表达纯化

GST-pulldown技术在蛋白质相互作用中的应用

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中国生物制品学杂志 2014年第10期27卷 1354-1358页

作者：柴政斌张更林韩金祥卫生部生物技术药物重点实验室山东省罕少见病重点实验室山东省医药生物技术研究中心山东省医学科学院山东济南250062 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250062

蛋白间相互作用在细胞的生命活动中起着关键作用,GST-pull down技术被广泛用于体外验证蛋白间的直接相互作用。GST-pull down技术既可用来验证已知蛋白间的相互作用,也可用来寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。虽然该技术在体外验证蛋... 详细信息

蛋白间相互作用在细胞的生命活动中起着关键作用,GST-pull down技术被广泛用于体外验证蛋白间的直接相互作用。GST-pull down技术既可用来验证已知蛋白间的相互作用,也可用来寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。虽然该技术在体外验证蛋白间的相互作用上有着较强的特异性,但下结论时仍需慎重。本文就GST-pull down技术的原理及其应用及该技术在应用中需要注意的部分问题进行综述。

关键词： GST-pull down 蛋白质相互作用融合蛋白

牙本质基质蛋白1功能片段的融合表达及其胞内定位

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中国生物制品学杂志 2013年第4期26卷 491-494页

作者：王学政张更林崔亚洲刘建民柴政斌韩金祥山东省医药生物技术研究中心国家卫生部医药生物技术重点实验室山东省罕见病重点实验室山东省医学科学院济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250062 辽宁医学院附属第一医院检验科辽宁锦州121001

目的构建含单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点不同碱基的37 kD的N-牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和全长DMP1基因重组表达质粒,并分析重组蛋白在HEK293细胞中的表达及定位。方法利用定点突变改造... 详细信息

目的构建含单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点不同碱基的37 kD的N-牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和全长DMP1基因重组表达质粒,并分析重组蛋白在HEK293细胞中的表达及定位。方法利用定点突变改造DMP1基因,获得DMP1基因的SNP rs10019009的不同基因型,将含SNP位点不同碱基的37 kD N-DMP1和全长DMP1基因定向克隆入含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pcDNA3.1-EGFP中,构建重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP,通过脂质体法瞬时转染HEK293细胞,荧光显微镜观察重组融合蛋白DMP1-EGFP的表达及胞内定位。结果 DNA测序结果表明,定点突变后的DMP1基因的碱基序列与设计序列完全一致;PCR和DNA测序显示重组质粒pcDNA3.1-DMP1-EGFP构建正确;融合蛋白DMP1-EGFP在HEK293细胞中主要表达于细胞胞浆中。结论成功构建了含rs10019009-SNP位点不同碱基的37 kD的N-DMP1和全长DMP1基因重组表达质粒,并在HEK293细胞的胞浆中有效表达,为进一步研究DMP1基因的功能奠定了基础。

关键词：牙本质基质蛋白1 绿色荧光蛋白融合表达胞内定位

利用GST-pull down方法筛查PAD4相互作用蛋白及进行其核转运机制的初步研究

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利用GST-pull down方法筛查PAD4相互作用蛋白及进行其核转运机制...

探讨PDCA循环在提高医院感染管理质量中的效果

第八届全国医学生物化学与分子生物学第五届全国临床应用生物化学与分子生物学2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会

作者：柴政斌张更林韩金祥山东省罕少见病重点实验室山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省医学科学院

GST-pull down法作为蛋白质相互作用的体外研究方法之一,简单、方便、易操作,但研究未知的蛋白质相互作用难度较大,少有报道;肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PeptidylArginine Deiminase typeⅣPAD4)作为类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA... 详细信息

GST-pull down法作为蛋白质相互作用的体外研究方法之一,简单、方便、易操作,但研究未知的蛋白质相互作用难度较大,少有报道;肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PeptidylArginine Deiminase typeⅣPAD4)作为类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)易感基因,其介导的组蛋白瓜氨酸化是哺乳类固有免疫一中性粒细胞胞外陷阱(Neutrophil Extracellular Traps,NET)形成的必要条件。PAD4也可以作为共抑制因子下调抗癌基因P53诱导的下游基因的表达,被认为参与了肿瘤的发生,但具体作用机制尚不清楚;PAD4主要在免疫细胞中表达,是五种肽酰基精氨酸脱亚胺酶中唯一具有核定位信号的蛋白多肽瓜氨酸化酶。明确其相互作用蛋白及阐明其核转运机制,对于认识PAD4在正常生理状态和病变情况下的基因功能具有重要的意义,我们利用GST-pull down assay在这方面进行了尝试。首先利用重叠延伸PCR对PAD4唯一的和定位信号进行了敲除,分别构建带有GST标签的PAD4以及PAD4核定位信号缺失(PAD4-NLS)的原核表达载体;然后通过转化大肠杆菌BL21菌株,获得重组蛋白表达的工程菌,经过诱导表达条件优化,获得重组蛋白的可溶性过表达;再利用sepharose4B亲和层析柱分别纯化出重组蛋白GST-PAD4以及GST-PAD4-NLS,并将纯化的重组蛋白分别固定在sepharose4B的层析柱上,经来源于HL-60细胞中的总蛋白过柱,富集可与PAD4以及PADI4-NLS发生相互作用的蛋白;最后经蛋白质双向电泳筛选特异蛋白和差异蛋白,通过质谱鉴定蛋白种类。结果显示:纯化到了PAD4以及PAD4-NLS带有GST标签的重组蛋白,可以获得PAD4相互作用特异性蛋白,为研究PAD4的功能研究提供有益线索。

关键词： GST-pull down PAD4 Nuclear Localization Signal

来源： cnki会议评论

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中国卫生产业 2018年第32期15卷 78-80页

作者：崔娟柴政斌程永香山东省济南市传染病医院感染管理科山东济南250021

目的探讨PDCA循环在医院感染管理质量的提高方面的应用效果。方法该院于2017年3月—2018年3月实行PDCA循环管理模式,统计该段时间内的感染发生情况、清洁消毒操作合格情况以及操作考核情况。用回顾性分析对比的方法,与2016年2月—2017年... 详细信息

目的探讨PDCA循环在医院感染管理质量的提高方面的应用效果。方法该院于2017年3月—2018年3月实行PDCA循环管理模式,统计该段时间内的感染发生情况、清洁消毒操作合格情况以及操作考核情况。用回顾性分析对比的方法,与2016年2月—2017年2月的各类情况进行对比,探讨PDCA循环模式在医院感染管理方面的临床应用效果,得出结论。结果未实行PDCA循环的时间内1 983例患者中85例患者发生感染,感染率高达4.28%,实行PDCA循环后,2 177例患者中仅有50例发生感染,感染发生率为2.30%;进行医院日常清洁消毒操作考核,实施PDCA前合格率为75.38%,实施PDCA后合格率为91.54%,实施前后的临床对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论PDCA循环能够显著降低医院感染发生率,对临床工作人员有一定的监督与加强操作规范的作用,有效提高临床工作人员的操作合格率,值得临床推广。

关键词： PDCA循环感染管理临床效果

铜绿假单胞菌医院感染的临床分布及耐药性分析

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系统医学 2018年第22期3卷 29-30,33页

作者：崔娟柴政斌程永香山东省济南市传染病医院感染管理科山东济南250021

目的分析铜绿假单胞菌在临床的分布情况,并对铜绿假单胞菌的耐药性,总结并指导临床用药。方法选择该院2016年1月—2018年5月出现铜绿假单胞菌感染的患者标本1682份,对其进行耐药性分析,分析耐药性分析结果,总结铜绿假单胞菌出现耐药的... 详细信息

目的分析铜绿假单胞菌在临床的分布情况,并对铜绿假单胞菌的耐药性,总结并指导临床用药。方法选择该院2016年1月—2018年5月出现铜绿假单胞菌感染的患者标本1682份,对其进行耐药性分析,分析耐药性分析结果,总结铜绿假单胞菌出现耐药的药物种类,并对上述患者的感染分布进行观察和对比。结果 ICU重症监护病房感染发生率最高,占19.79%,其次为杂病科患者的感染发生率相对较高,患者中以庆大霉素、哌拉西林、左氧氟沙星、环丙沙星、亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、阿卡米星以及头孢吡肟,其中庆大霉素、哌拉西林、左氧氟沙星、环丙沙星超过40%,患者中以呼吸道标本中出现铜绿假单胞菌感染的发病率最高。结论铜绿假单胞菌感染患者以院内感染的发生率较高,且发生感染的科室分布广,分布相对均匀,需临床注意院内感染的预防,铜绿假单胞菌的耐药性相对较高,对患者的用药需临床注意其科学性。

关键词：铜绿假单胞菌感染分布耐药性分析

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布鲁氏菌血培养阳性报警时间的分析

医学检验与临床 2020年第2期31卷 42-45页

作者：秦晓华柴政斌黄海燕济南大学/山东省医学科学院医学与生命科学学院/山东省医学科学院基础研究所山东济南250200 济南市传染病医院检验科山东济南250021

目的:探讨布鲁氏菌血培养阳性报警时间的特点及临床意义.方法:选择2017年1月~2018年12月124例布病患者为观察组,随机选择性别、年龄相仿的其它细菌感染者为对照组,其中葡萄球菌112例,肠杆菌科菌91例.回顾性分析各组血培养的阳性报警时间... 详细信息

目的:探讨布鲁氏菌血培养阳性报警时间的特点及临床意义.方法:选择2017年1月~2018年12月124例布病患者为观察组,随机选择性别、年龄相仿的其它细菌感染者为对照组,其中葡萄球菌112例,肠杆菌科菌91例.回顾性分析各组血培养的阳性报警时间.结果:布鲁氏菌48h内未见阳性报警者,48~72h、72~96h、96~120h、120~168h的阳性报警率分别为1.6%、14.5%、45.2%、35.5%;葡萄球菌和肠杆菌科菌48h内阳性报警率分别为87.5%、94.5%,均未见超过120h阳性报警者.组血培养平均阳性报警时间分别为:布鲁氏菌117.4h(103.4h^126.8h)、葡萄球菌24h(18h^34h)、肠杆菌科菌11h(9.5h^15h).组间比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:布鲁氏菌血培养阳性报警时间明显长于于其它病原菌,对疑似布病的患者,血培养的孵育时间至少设置为7d.综合分析血培养阳性报警时间与典型的菌落、革兰氏染色形态,对鉴定布鲁氏菌具有重要意义.

关键词：布鲁氏菌血培养报警时间

2012-2018年山东省济南市A族β溶血性链球菌分子分型特征研究

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疾病监测 2019年第5期34卷 394-397页

作者：白爱英刘岚铮柴政斌刘尊玉单晓英济南市疾病预防控制中心山东济南250021 济南市传染病医院山东济南250021

目的了解济南市A族β溶血性链球菌(GAS)的emm分型特点,为猩红热病原学监测提供数据。方法收集2012-2018年济南市GAS菌株,应用PCR方法扩增emm基因,扩增产物经测序、比对,获得菌株emm基因型。结果共获得GAS菌株143株,检测到5个emm基因型,... 详细信息

目的了解济南市A族β溶血性链球菌(GAS)的emm分型特点,为猩红热病原学监测提供数据。方法收集2012-2018年济南市GAS菌株,应用PCR方法扩增emm基因,扩增产物经测序、比对,获得菌株emm基因型。结果共获得GAS菌株143株,检测到5个emm基因型,其中emm12占55.2%(79/143),emm1占42.0%(60/143),其他emm基因型占2.8%(4/143)。2015年和2016年仅分到11株菌,均为emm12。患者分离菌株116株,分为4种emm基因型,emm1(46株)和emm12(67株)共占97.4%(113/116),emm22(1株)和emm75(2株)共占2.6%(3/116)。143株GAS菌株中,菌株数量排在前3位的分别为市中区(85株)、槐荫区(35株)和历城区(9株)。结论2012-2018年济南市GAS菌株优势基因型为emm12和emm1。2013年和2014年以emm1为主,其余年份以emm12为主。

关键词： A族β溶血性链球菌猩红热分子分型

戊戌——庚子之际的“湖南”与晚清政治——以三种日本人湘游行纪为线索

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社会科学辑刊 2025年

作者：戴海斌复旦大学中外现代化进程研究中心暨历史学系

就戊戌以后的湖南而言，实际面临了两层紧迫的压力：一是不甘失败的维新人士视湖南为日本的萨摩、长州，据为基地意图再举，其主要联络对象为本地“南学会”及哥老会，后发生分裂，一部分人转向激进“革命”，有日本人卷入其中；二是围... 详细信息

就戊戌以后的湖南而言，实际面临了两层紧迫的压力：一是不甘失败的维新人士视湖南为日本的萨摩、长州，据为基地意图再举，其主要联络对象为本地“南学会”及哥老会，后发生分裂，一部分人转向激进“革命”，有日本人卷入其中；二是围绕湖南内河航运、矿山开采等权益的国际争夺加剧，日本势力急欲深入此前一直遭排拒的号称“铁门之城”的湖南，为此必须调试与清朝大吏及地方士绅的关系。在这一历史节点，以平山周、白岩龙平、宗方小太郎为代表的旅华日本人不约而同进入湖南，然而背景、取向各异，他们对于以唐才常为代表的湖南维新派的看法也远非一致。考辨史事，厘清当时旅华日本人网络及其与湖南趋新士人交往实态，有助于深化对晚清政治史与中日关系史语境中“湖南”的理解。

关键词：湖南旅华日本人维新派哥老会南学会晚清政治