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PI3K/mTOR双重抑制剂对体外培养血管瘤细胞的影响及机制

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PI3K/mTOR双重抑制剂对体外培养血管瘤细胞的影响及机制

作者：柳望舒遵义医学院

学位级别：硕士

目的:观察PI3K/m TOR双重抑制剂NVP-BEZ235对体外培养血管瘤内皮细胞增殖、凋亡及PI3K/AKt/m TOR信号通路中关键分子的影响,探讨PI3K/m TOR双重抑制剂对体外培养血管瘤内皮细胞的作用及机制。方法:1.选取手术切除的婴幼儿血管瘤标本,组... 详细信息

目的:观察PI3K/m TOR双重抑制剂NVP-BEZ235对体外培养血管瘤内皮细胞增殖、凋亡及PI3K/AKt/m TOR信号通路中关键分子的影响,探讨PI3K/m TOR双重抑制剂对体外培养血管瘤内皮细胞的作用及机制。方法:1.选取手术切除的婴幼儿血管瘤标本,组织块结合酶消化法培养原代血管瘤内皮细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞生长特点,绘制生长曲线。细胞传至第四代后,采用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定。3.无血清培养基处理血管瘤内皮细胞24h后,干预组加入0.50μM、1.00μM NVP-BEZ235,空白对照组加入完全培养基,共同孵育24h。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,免疫蛋白质印迹方法检测PI3K、p-Akt、m TOR及p70s6k蛋白的表达水平,分析血管瘤内皮细胞增殖及凋亡变化与四种蛋白表达水平的相互关系。结果:1.血管瘤原代培养1周后出现少量贴壁细胞,3周后细胞由组织块向周围成同心圆式分布并且生长速度加快,4周后细胞基本铺满培养瓶底,显微镜下观察可看到梭形或稍不规则形态的细胞,成铺路石样排列。第Ⅷ凝血因子相关抗原鉴呈阳性表达。***-BEZ235干预24h后,CCK-8细胞增殖检测显示,0.50μM、1.00μM NVP-BEZ235组的OD值分别为(0.88±0.03、0.59±0.05),与对照组(1.10±0.02)比较,差异均有显著性(P<0.01,t=7.05、13.07);且1.00μM组比0.50μM组对细胞增殖的抑制作用更强,差异具有显著性(P<0.01,t=9.23)。3.流式细胞术检测显示,0.50μM组G0/G1期细胞比例为(60.62±0.71)%,1.00μM组G0/G1期细胞比例为(65.99±2.55)%,均较对照组(53.71±1.43)%高,差异均有显著性(P<0.01,t=-7.51、-7.28);且1.00μM组较0.50μM组更高,差异有有统计学意义(P<0.05,t=-3.51)。4.流式细胞术检测显示,0.50μM组内皮细胞总凋亡率为(9.20±0.75)%,1.00μM组内皮细胞总凋亡率为(13.13±1.72)%,均较对照组(2.77±1.23)%升高,差异均有显著性(P<0.01,t=-9.80、-8.93);且1.00μM组较0.50μM组更高,差异有有统计学意义(P<0.05,t=-3.62)。5.蛋白免疫印迹检测显示,0.50μM NVP-BEZ235组PI3K(0.16±0.03)、p-Akt(0.13±0.01)、m TOR(0.12±0.02)蛋白表达水平较对照组PI3K(0.25±0.01)、p-Akt(0.17±0.01)、m TOR(0.19±0.00)下降,p70s6k(0.18±0.01)蛋白较对照组(0.10±0.02)升高,差异具有显著性(P<0.01,t=4.71、8.51、6.62、-6.26);1.00μM NVP-BEZ23组PI3K(0.10±0.01)、p-Akt(0.10±0.01)、m TOR(0.05±0.00)蛋白表达水平较对照组下降,p70s6k(0.31±0.02)蛋白较对照组升高,差异具有显著性(P<0.01,t=26.68、15.40、38.84、-14.77);且1.00μM NVP-BEZ235组较0.50μM NVP-BEZ235组,PI3K、p-Akt、m TOR蛋白水平下降更为明显,p70s6k蛋白蛋白水平上升更为明显,差异具有显著性(P 0.01,t=3.69、7.83、6.19、-11.55)。结论:***3K/AKt/m TOR信号通路参与了体外培养血管瘤内皮细胞增殖、凋亡过程;***-BEZ235可以通过调控PI3K/AKt/m TOR信号通路而抑制体外培养血管瘤内皮细胞的增殖,且可能有剂量依赖性。

关键词：血管瘤/内皮细胞体外培养 PI3K/Akt/mTOR信号通路 NVP-BEZ235 调控

毛细血管瘤患儿增生期和退化期瘤组织中AMPK、mTOR表达对比观察

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山东医药 2016年第47期56卷 90-91页

作者：李娟俞松王凯柳望舒季一发甘永桥遵义医学院附属医院贵州遵义563003

目的对比观察增生期和退化期小儿毛细血管瘤组织中磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达,探讨AMPK/m TOR通路在小儿毛细血管瘤消退过程中的作用。方法收集50例小儿毛细血管瘤患者的瘤组织标本,按照Mulliken... 详细信息

目的对比观察增生期和退化期小儿毛细血管瘤组织中磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达,探讨AMPK/m TOR通路在小儿毛细血管瘤消退过程中的作用。方法收集50例小儿毛细血管瘤患者的瘤组织标本,按照Mulliken分类法24例患儿瘤组织处于增生期(增生期组),26例患儿瘤组织处于退化期(退化期组),采用免疫组织化学法检测其中AMPK、m TOR的积分光密度。结果增生期组AMPK、m TOR的积分光密度分别为33.94±12.78、182.43±47.10,退化期组分别为85.87±19.53、47.22±44.52。两组毛细血管瘤组织AMPK、m TOR积分光密度相比,P均<0.01。50例小儿毛细血管瘤患者瘤组织AMPK、m TOR积分光密度值呈负相关(r=-0.78,P<0.01)。结论与增生期小儿毛细血管瘤组织相比,消退期小儿血管瘤组织中AMPK表达升高,m TOR表达降低。AMPK/m TOR信号通路参与小儿毛细血管瘤的消退过程。

关键词：血管瘤毛细血管瘤儿童 5磷酸腺苷活化蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白血管瘤分期

PI3K/AKt/mTOR信号通路与肿瘤关系的研究进展

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实用医院临床杂志 2016年第4期13卷 20-23页

作者：柳望舒俞松遵义医学院附属医院小儿矫形外科贵州遵义563003

近年来,随着人们对肿瘤信号通路的不断研究,其中尤以PI3K/AKt/m TOR信号通路已逐渐成为研究热点,胞內磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)作为该信号转导通路中重要的介导分子,发挥着不可或缺的作用。因此,本文就PI3K/AKt/m TOR信号通路的激活及其... 详细信息

近年来,随着人们对肿瘤信号通路的不断研究,其中尤以PI3K/AKt/m TOR信号通路已逐渐成为研究热点,胞內磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)作为该信号转导通路中重要的介导分子,发挥着不可或缺的作用。因此,本文就PI3K/AKt/m TOR信号通路的激活及其主要效应分子的作用机制,与肿瘤及血管瘤之关系的研究进展作一介绍。

关键词： PI3K/AKt/m TOR信号通路胞內磷脂酰肌醇-3-激酶肿瘤血管瘤

MEK／ERK信号通路在体外培养血管瘤内皮细胞中的表达及意义

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中华小儿外科杂志 2014年第12期35卷 890-894页

作者：唐诗鹏俞松闫陶然陆建国卓金伟柳望舒于怀景遵义医学院附属医院小儿矫形外科 563003

目的观察MEK、ERK及p-ERK在体外培养血管瘤内皮细胞中的表达，探讨MEK／ERK信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用。方法用组织块结合酶消化法原代培养血管瘤内皮细胞，待细胞处于对数生长期，换无血清培养基培养48h，使... 详细信息

目的观察MEK、ERK及p-ERK在体外培养血管瘤内皮细胞中的表达，探讨MEK／ERK信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用。方法用组织块结合酶消化法原代培养血管瘤内皮细胞，待细胞处于对数生长期，换无血清培养基培养48h，使细胞同步化，然后加入0．1ng／L雌二醇，50μmol／L普萘洛尔作为干预组，加入完全内皮细胞培养基作为对照组继续孵育24h。采用Western blot法检测血管瘤内皮细胞MEK、ERK及p-ERK的表达水平，同期用流式细胞计数仪检测血管瘤内皮细胞细胞周期及凋亡的变化，并分析MEK、ERK及p-ERK的表达水平与血管瘤内皮细胞周期及凋亡的关系。结果雌二醇干预后，MEK（0．14±0．01）、ERK1／2（1．36±0．11／0．52±0．10）和p-ERK1／2（0．12±0．03／0．85±0．10）与对照组MEK（0．08±0．00）、ERK1／2（1．16±0．06／0．29±0．04）和p-ERK1／2（0．06±0．02／0．42±0．08）比较，差异均有统计学意义（t=10．01，2．86／3．45，3．57／5．95，P〈0．05）；G0／G1期比例为（90．52±1．28）％，较对照组（94．02±0．85）％明显降低，差异有统计学意义（t=-3．98，P〈0．05）；细胞总凋亡率为（0．70±0.10）％，较对照组（1．77±0．21）％明显降低，差异有统计学意义（t=-8．00，P〈0．05）。普萘洛尔干预后，MEK（0．06±0．01）、ERK1／2（0．87±0．05／0．14±0．02）和p-ERK1／2（0．02±0．01／0．11±0．05）与对照组各项比较，差异均有统计学意义（t=-2．88，-6．79／-6．20，-3．96／-5．74，P〈0．05）；G0／G1期比率为（96．42±1．16）％，较对照组明显升高，差异有统计学意义（t=-2．89，P〈0．05）；细胞总凋亡率为（2．87±0．57）％，对照组明显升高，差异有统计学意义（t=3．14，P〈0．05）。结论MEK／ERK信号通路可能参与调控体外培养血管瘤内皮细胞的细胞周期和凋亡。雌激素、普萘洛尔可能通过干预MEK／ERK信号通路来调控体外培养血管瘤内皮细胞的增殖与凋亡。

关键词：血管瘤内皮血管基因表达调控

调控P13K／Akt信号通路对裸鼠移植血管瘤的影响

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中华小儿外科杂志 2015年第9期36卷 671-674页

作者：彭岗俞松陆建国闫陶然卓金伟柳望舒徐艳朋遵义医学院附属医院小儿矫形外科 563003 贵州省人民医院小儿外科

目的观察人血管瘤裸鼠移植模型中P13Kp85、p-Akt表达，并进行正负调控，探讨PDK／Akt信号通路在小儿血管瘤演变过程中的作用。方法建立血管瘤裸鼠移植模型，生长45d后，将移植成功标本48例，按区组随机平均分成3组。其中，对照组每个瘤... 详细信息

目的观察人血管瘤裸鼠移植模型中P13Kp85、p-Akt表达，并进行正负调控，探讨PDK／Akt信号通路在小儿血管瘤演变过程中的作用。方法建立血管瘤裸鼠移植模型，生长45d后，将移植成功标本48例，按区组随机平均分成3组。其中，对照组每个瘤体内注射生理盐水0．05ml;正性调控组每个瘤体内注射0．5μmol／L的胰岛素样生长因子0．05ml；负性调控组每个瘤体内注射25μmol／L的LY2940020．05ml。于药物注射当日（用药前）、注射后3d、1周、2周肉眼大体观察移植瘤形态变化，光镜观察移植瘤组织结构变化，同期免疫组化检测P13Kp85、p-Akt蛋白的分布及表达情况，RT-PCR检测PDKp85mRNA、p-AktmRNA的表达情况。结果负性调控组P13Kp85、p-Akt阳性表达率分别为80．00％和86．67％，而对照组及正性调控组P13Kp85及p-Akt阳性表达率均为100％。负性调控组PDKp85、p-Akt表达均较对照组降低，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01），瘤体呈消退表现；正性调控组P13Kp85、p-Akt表达均较对照组增高，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01），血管瘤瘤体呈增生表现；P13Kp85与p-Akt的表达呈正相关。结论P13K／Akt信号通路可能参与了裸鼠移植血管瘤增生与消退的调控；LY294002、胰岛素样生长因子可以通过干预P13K／Akt信号通路中相应的靶点，抑制或激活P13K／Akt信号通路来促使瘤体消退及增生。

关键词：血管瘤模型动物信号传递基因表达调控

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高精度WENO格式的发展与展望

中国科学：数学 2024年第2期54卷 121-138页

作者：朱君舒其望邱建贤南京航空航天大学数学学院南京211106 Division of Applied Mathematics Brown UniversityProvidenceRI 02912USA 厦门大学数学科学学院厦门361005

加权本质无振荡(weighted essentially non-oscillatory, WENO)格式是用于求解双曲守恒律方程和对流占优问题的一类高精度数值方法. WENO格式设计的思想是在解的光滑区域中获得高阶数值精度,而在解的间断附近保持本质无振荡的性质.以这... 详细信息

加权本质无振荡(weighted essentially non-oscillatory, WENO)格式是用于求解双曲守恒律方程和对流占优问题的一类高精度数值方法. WENO格式设计的思想是在解的光滑区域中获得高阶数值精度,而在解的间断附近保持本质无振荡的性质.以这种思想设计的有限差分和有限体积高精度WENO格式在计算流体力学等领域中得到了广泛应用.本文首先回顾WENO格式设计的基本思想和性质,简要介绍近年来WENO格式研究方面的一些进展,并阐述US-WENO (unequal-sized WENO)格式、MR-WENO (multi-resolution WENO)格式和HWENO (Hermite WENO)格式的构造策略.此外,本文还介绍高精度WENO格式在结构网格和非结构网格上的一些进展,展望这些高精度格式在多个领域中的应用以及未来的发展趋势.

关键词：计算流体力学本质无振荡格式加权本质无振荡格式 US-WENO格式 MR-WENO格式 HWENO格式

不同溶解再生方式对壳聚糖膜结构及性能的影响

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食品科学 2024年第20期45卷 214-219页

作者：望运滔刘荣钦张文舒冯静莹王旭冉白艳红郑州轻工业大学食品与生物工程学院河南省冷链食品质量安全控制重点实验室食品生产与安全河南省协同创新中心

本研究比较了酸溶-碱中和（CS-Na）、碱/尿素体系低温溶解-热诱导（CS-60℃）、碱/尿素体系低温溶解-乙醇絮凝（CS-C2H6O）3种方法对所制备壳聚糖膜性能（机械强度、透光率、水蒸气透过率）及结构（基团变化、结晶结构、微观结构）的影... 详细信息

本研究比较了酸溶-碱中和（CS-Na）、碱/尿素体系低温溶解-热诱导（CS-60℃）、碱/尿素体系低温溶解-乙醇絮凝（CS-C2H6O）3种方法对所制备壳聚糖膜性能（机械强度、透光率、水蒸气透过率）及结构（基团变化、结晶结构、微观结构）的影响规律。结果表明，CS-Na的拉伸强度为0.064 MPa，断裂伸长率为34.72%，碱/尿素体系所制备的两种壳聚糖膜拉伸强度和断裂伸长率均有明显的提升，表明碱/尿素体系所制备的壳聚糖膜具有更好的机械性能；在紫外光区内，CS-C2H6O的透光率最强，CS-60℃的透光率次之，CS-Na的透光率最弱，表明3种壳聚糖膜均具有良好的阻挡紫外线的能力；3种壳聚糖膜的水蒸气透过率在饱和Na Cl和饱和Mg Cl2条件下均呈现出CS-60℃2H6O2H6O、CS-Na两种膜的横截面呈现出更加致密均匀的多孔结构，其表面也更加平整光滑。综合表明，CS-60℃具有更强的机械性能和更加均匀紧凑的多孔结构。因此，碱/尿素体系溶解壳聚糖在热水浴条件下所制备的高强度壳聚糖膜在食品包装等方面具有更好的应用前景。

关键词：壳聚糖高强度壳聚糖膜碱/尿素体系微观结构

不同溶解再生方式对壳聚糖膜结构及性能的影响

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食品科学 2024年

本文比较了酸溶-碱中和(CS-Na)、碱/尿素体系低温溶解-热诱导(CS-60℃)、碱/尿素体系低温溶解-乙醇絮凝(CS-C2H6O)三种方法对所制备壳聚糖膜性能(机械强度、透光率、水蒸气渗透率)及结构(基团变化(FTIR)、结晶结构(XRD)、微观结构(SEM)... 详细信息

本文比较了酸溶-碱中和(CS-Na)、碱/尿素体系低温溶解-热诱导(CS-60℃)、碱/尿素体系低温溶解-乙醇絮凝(CS-C2H6O)三种方法对所制备壳聚糖膜性能(机械强度、透光率、水蒸气渗透率)及结构(基团变化(FTIR)、结晶结构(XRD)、微观结构(SEM))的影响规律。结果表明，CS-Na的拉伸强度为0.064 MPa，断裂伸长率为34.72%，碱/尿素体系所制备的两种壳聚糖膜的拉伸强度和断裂伸长率均有明显的提升，表明碱/尿素体系所制备的壳聚糖膜具有更好的机械性能；在紫外光区内，CS-C2H6O的透光率最强，CS-60℃的透光率次之，CS-Na的透光率最弱，表明三种壳聚糖膜均具有良好的阻挡紫外线的能力；三种壳聚糖膜的水蒸气渗透速率在饱和NaCl和饱和MgCl2条件下均呈现出以下规律：CS-60 ℃

关键词：壳聚糖高强度壳聚糖膜碱/尿素体系微观结构

反馈式健康教育结合强化心理护理对肺结核吸毒患者心理状态及应对方式的影响

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中国科技期刊数据库医药 2024年第3期 0124-0127页

作者：舒石望露宜昌市第三人民医院内三科监管病区湖北宜昌443000

探究肺结核(PTB)吸毒患者接受强化心理护理(SPN)结合反馈式健康教育(FBHE)干预对应对方式及心理状态的影响。方法本次筛选PTB吸毒患者共60例,试验于2021.06~2023.05内开展,分组法为随机法,分组病例数为30例。甲组PTB吸毒者接受常规措... 详细信息

探究肺结核(PTB)吸毒患者接受强化心理护理(SPN)结合反馈式健康教育(FBHE)干预对应对方式及心理状态的影响。方法本次筛选PTB吸毒患者共60例,试验于2021.06~2023.05内开展,分组法为随机法,分组病例数为30例。甲组PTB吸毒者接受常规措施干预,乙组PTB吸毒者接受SPN结合FBHE干预。比较应对方式、心理状态及生活状况。结果两组PTB吸毒者干预后应对方式各评分较干预前改善,且乙组PTB吸毒者各评分较甲组PTB吸毒者更优(P<0.05)。两组PTB吸毒者干预后心理状态得分较干预前降低,且乙组PTB吸毒者各评分较甲组PTB吸毒者更低(P<0.05)。乙组PTB吸毒者生活状况各评分较甲组PTB吸毒者更高(P<0.05)。结论 PTB吸毒患者接受SPN结合FBHE干预后,既能促使其对疾病积极应对,又能改善其生活状况和心理状态,可借鉴研究。

关键词：肺结核吸毒强化心理护理反馈式健康教育应对方式心理状态