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佛波醇酯对HeLa细胞Ha-ras基因启动子活性的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第4期23卷 14-18页

作者：张伟王永军柳惠图高萍中国 100875 北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖与调控生物学重点实验室北京师范大学生命科学学院教育部细胞增殖与调控生物学重点实验室北京

目的:研究佛波醇酯(PMA)对HeLa细胞Ha-ras基因启动子活性的影响.方法:利用MTT法检测PMA对HeLa细胞生长速率的影响,并通过逆转录聚合酶链反应法测定HeLa细胞Ha-ras基因表达水平,进一步将Ha-ras基因上游调控序列插入到不含启动子元件的EYF... 详细信息

目的:研究佛波醇酯(PMA)对HeLa细胞Ha-ras基因启动子活性的影响.方法:利用MTT法检测PMA对HeLa细胞生长速率的影响,并通过逆转录聚合酶链反应法测定HeLa细胞Ha-ras基因表达水平,进一步将Ha-ras基因上游调控序列插入到不含启动子元件的EYFP基因的上游,构建了重组质粒pRasEYFP,并将其瞬时转染到heLa细胞中.以EYFP,作为报告基因分析了PMA长期处理对Ha-ras基因启动子活性的影响.在此基础上对PMA处理的HeLa细胞中蛋白激酶C(PKC)的活性进行了检测.结果:与未处理细胞相比,PMA长期处理引起HeLa细胞生长速率明显降低.经PMA处理(100μg/L)48小时和72小时,与未处理细胞相比HeLa细胞中Ha-ras基因的表达降低,Ha-ras基因启动子活性分别下降了34.0％和26.7％,同时PKC的活性分别降低了76.3％和73.2％.结论:PMA在Ha-ras基因启动子活性的调节中扮演着重要的角色.其作用的机理可能与PKC信号通路有关.

关键词：蛋白激酶C ras基因佛波醇酯类 HeLa细胞

TGF-β信号通路中Smad蛋白与基因转录调节研究进展

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解剖学报 2000年第z1期31卷 13-17页

作者：汪娟柳惠图北京师范大学生命科学学院细胞增殖及凋控生物学教育部重点实验室北京100875

PKC对HeLa细胞G_1/S期进程调控及其机理的研究

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科学通报 1999年第19期44卷 2080-2084页

作者：胡江柳惠图北京师范大学

研究了PKC活性变化对HeLa细胞G1/S期进程的影响及其作用机理 ,结果表明 :( 1)HeLa细胞G1期PKC活性的变化影响其G1/S期进程 ,其中G1期PKC活性升高促进G1/S期进程 ,而PKC活性降低显著抑制G1/S期进程 ;( 2 )PKC的刺激剂TPA促进早期应答基因... 详细信息

研究了PKC活性变化对HeLa细胞G1/S期进程的影响及其作用机理 ,结果表明 :( 1)HeLa细胞G1期PKC活性的变化影响其G1/S期进程 ,其中G1期PKC活性升高促进G1/S期进程 ,而PKC活性降低显著抑制G1/S期进程 ;( 2 )PKC的刺激剂TPA促进早期应答基因c myc与c jun的表达 ,PKC的抑制剂GF 10 92 0 3X抑制其表达 ;( 3)HeLa细胞G1/S期进程中 ,TPA作用促进G1期CyclinD1的表达 ,GF 10 92 0 3X作用抑制其表达 ,两者对CDK4蛋白表达均无影响 .提示PKC通路可能通过调控HeLa细胞早期应答基因的表达和G1Cyclin

关键词： PKC 细胞周期调控 HeLa细胞 G1/S期进程

钙调素拮抗剂诱导人肺癌细胞PLA-801凋亡机理研究

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科学通报 1998年第5期43卷 519-523页

作者：张弘柳惠图北京师范大学细胞增殖与调控生物学实验室北京100875

用 2 0 μmolL- 1的TFP处理人肺癌细胞PLA_80 1,强烈抑制了细胞的增殖 .软琼脂实验发现加药组细胞集落形成率为对照组的 6 3 6 % ,这表明部分细胞失去了在软琼脂中形成集落的能力 .流式细胞光度术显示 ,加药组细胞G1期峰前出现了程序性... 详细信息

用 2 0 μmolL- 1的TFP处理人肺癌细胞PLA_80 1,强烈抑制了细胞的增殖 .软琼脂实验发现加药组细胞集落形成率为对照组的 6 3 6 % ,这表明部分细胞失去了在软琼脂中形成集落的能力 .流式细胞光度术显示 ,加药组细胞G1期峰前出现了程序性细胞死亡的特征峰 ,荧光染料Heochst33342 染色后 ,荧光显微镜下观察 ,可见到部分细胞凋亡时核凝集、边化、断裂的情形 .提取细胞总DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ,可见加药组细胞出现了凋亡细胞特有的DNA“梯子” .这些结果表明 :2 0 μmolL- 1TFP诱导了细胞的凋亡 ,这可能是细胞增殖受到抑制的原因之一 .进一步测定 2 0 μmolL- 1TFP处理细胞时细胞内CaM的活性和细胞内cAMP的水平 ,发现 2 0 μmolL- 1TFP处理使细胞内钙调素的活性抑制了 95 1%而cAMP水平迅速上升至 2 8倍 .在细胞内钙离子的主要受体—钙调素的活性被强烈抑制时 ,cAMP水平的迅速上升可能是PLA_80 1凋亡的主要原因 .

关键词：钙调素拮抗剂细胞凋亡肺癌细胞 PLA-801

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G_1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响

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解剖学报 2005年第1期36卷 37-40页

作者：高萍冯怡柳惠图北京师范大学生命科学学院细胞所教育部细胞增殖与调控生物学重点实验室北京100875

目的　探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1 期相关调控因子的影响。　方法　通过细胞转染技术将PKCαcDNA正向插入的真核表达质粒PXJ4 1 PKCα导入正常肝细胞 (L 0 2 ) ,并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1 期相关调控因子的影响。　方法　通过细胞转染技术将PKCαcDNA正向插入的真核表达质粒PXJ4 1 PKCα导入正常肝细胞 (L 0 2 ) ,并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )检测细胞的生长曲线 ,细胞周期以及细胞对G1 期相关调控因子cylinD1和cyclinE的影响。　结果　构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,过表达PKCα可促进L 0 2细胞增殖 ,促进细胞由G1 期向S期的过渡 ;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升 ,反之表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )增殖被抑制 ,阻抑细胞由G1 期向S期的过渡 ,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降。　结论　从正反两个方面表明 ,PKCα可通过作用于G1 期相关周期蛋白的水平影响G1 S期的进程。

关键词：蛋白激酶Cα L-02细胞 BEL-7402细胞细胞周期 G1期相关调控蛋白

佛波酯对CKI p15^(INK4B)高表达的人黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

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生物化学与生物物理进展 2001年第2期28卷 198-202页

作者：童迎凯柳惠图刘军北京师范大学生命科学学院

通过DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有p15基因全长的质粒 pXJ 41 p15转染p15缺失的人黑色素瘤细胞A375 ,经G418筛选出阳性单克隆 ,并经PCR、蛋白质印迹等检测 ,证明建立了 p15稳定高表达的细胞模型 .实验表明 ,经佛波酯 (PMA)... 详细信息

通过DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有p15基因全长的质粒 pXJ 41 p15转染p15缺失的人黑色素瘤细胞A375 ,经G418筛选出阳性单克隆 ,并经PCR、蛋白质印迹等检测 ,证明建立了 p15稳定高表达的细胞模型 .实验表明 ,经佛波酯 (PMA)长期处理 ,实验组细胞中的 p15表达水平进一步上升 ,同时观察到蛋白激酶C (PKC)活性下降 ,与对照组细胞相比 p15高表达的细胞PKC活性及细胞生长均受到较强烈的抑制 ,并能引起约 30 %的实验组细胞发生凋亡 .凋亡细胞中Caspase3P2 0亚基的水平上升 .结果表明 ,CKIp15与PKC信号系统在调节细胞增殖、凋亡的过程中具有一定的相关性 ,它们的协同作用可能启动了细胞中与Caspase相关的凋亡通路 ,使细胞发生凋亡 .

关键词： p15 周期蛋白依赖激海抑制因子佛波酯蛋白激酶C 细胞凋亡

新抑癌基因p1^(5MTS2/INK4B)的研究进展

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科学通报 1999年第8期44卷 793-799页

作者：童迎凯柳惠图北京师范大学生物系细胞增殖及调控生物学开放实验室北京100875

近年来发现 ,细胞中抑制肿瘤发生、发展的机制除了有Rb ,p5 3等抑癌基因发挥作用外 ,一类CKI分子 (cyclin dependentkinaseinhibitor,细胞周期引擎分子的抑制剂 )也具有非常重要的作用 .在已知的CKIp2 1和p1 6两大家族中 ,p1 5是与p1 6... 详细信息

近年来发现 ,细胞中抑制肿瘤发生、发展的机制除了有Rb ,p5 3等抑癌基因发挥作用外 ,一类CKI分子 (cyclin dependentkinaseinhibitor,细胞周期引擎分子的抑制剂 )也具有非常重要的作用 .在已知的CKIp2 1和p1 6两大家族中 ,p1 5是与p1 6同源性很高的一个CKI分子 ,大量肿瘤以及多种癌细胞系中的调查表明 ,p1 5基因的异常表达 (如缺失、突变和重排等 )在许多肿瘤及癌细胞系中存在 ,并与其中一些肿瘤的发展密切相关 ,这为确定p1 5作为一个新的抑癌基因提供了证据 .在此基础上 ,进一步对p1 5在细胞周期中调控细胞增殖和分化机理的研究发现 :p1 5能抑制一些肿瘤细胞的增殖 ,并可作为细胞生长抑制因子TGF β发挥作用的中介者 ,另外在某些类型细胞的分化过程中 ,p1 5水平的上升与细胞分化表型的出现具有相关性 .这些关于p1 5的研究进展为进一步阐明细胞周期调控及细胞癌变的分子机制提供了线索 ,并可能为p1

关键词： CKI 抑癌基因细胞周期诱导分化癌治疗

P15^(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞G1/S进程的阻滞及与MAPK信号相关性之初探

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细胞生物学杂志 2002年第4期24卷 232-236页

作者：刘军柳惠图谭信高萍北京师范大学生命科学学院细胞增殖与调控生物学教育部重点实验室北京100875 首都医科大学细胞遗传教研室

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15^(IN... 详细信息

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15^(INK4B)对G_1/S相关调控蛋白的影响,在M期细胞释放8h(晚G_1期细胞)后,与对照组MLC2细胞相比,实验组MLIK6细胞中CyclinD1,CyclinE,Cdk4,C-Myc蛋白水平均降低。相反,P27^(KIP1)的表达却上升。同时探讨了MAPK信号在P15^(INK4B)阻抑A375细胞G_1/S转换中的作用与相关性,结果显示晚G_1期的MLIK6细胞中ERK1,ERK2水平变化不大,而具有活性的P-ERK1和P-ERK2均表现出下降。上述实验表明,P15^(INK4B)可能通过作用于G_1期相关的周期调节蛋白和抑制ERK1和ERK2活性,阻滞G_1/S转换与抑制DNA合成。

关键词： P15^INK4B 高表达人黑色素瘤细胞 G1/S进程阻滞 MAPK信号相关性细胞周期

复方中药白龙对G_1期人胃癌细胞中抑癌基因的影响及与PKA信号通路的相关性

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中国中西医结合杂志 1999年第10期19卷 613-616页

作者：刘军柳惠图梁云燕王代树北京师范大学生命科学院细胞所北京医科大学临床肿瘤学院北京肿瘤防治研究所北京100034

目的 :探讨复方中药白龙 (简称白龙 )对人胃癌BGC82 3G1期细胞周期蛋白激酶抑制因子(CKI) p16INK4a、p2 1以及Rb、c myc等基因转录的影响和cAMP PKA信号通路的调节关系。方法 :通过实验室常规分子生物学手段 (细胞同步化、分子杂交—... 详细信息

目的 :探讨复方中药白龙 (简称白龙 )对人胃癌BGC82 3G1期细胞周期蛋白激酶抑制因子(CKI) p16INK4a、p2 1以及Rb、c myc等基因转录的影响和cAMP PKA信号通路的调节关系。方法 :通过实验室常规分子生物学手段 (细胞同步化、分子杂交———Northern杂交、Western杂交等 )检测相关基因的表达变化。结果 :白龙对G1期细胞p16INK4a表达有强烈促进作用 ,mRNA和蛋白水平均显著升高 ;处理细胞的同时加入PKA抑制剂阻断该信号通路后 ,白龙作用丧失 ,p16INK4a mRNA和蛋白水平明显下降 ;白龙还可以促进抑癌基因Rb、p2 1的mRNA表达和抑制癌基因c mycmRNA的表达 ;同样在白龙作用的同时阻断该信号通路 ,则白龙的上述作用随之丧失。结论 :白龙可以通过影响BGC82 3G1期细胞中众多抑癌基因 (包括p16INK4a、p2 1、Rb)和癌基因 (包括c myc)的转录发挥其抑瘤生理效应 ,而这种变化发生的机理是与cAMP PKA信号通路的调节机制密切相关的。

关键词：复方中药白龙 G1期胃癌 PKA抑制剂 CKI