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棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其对大豆分离蛋白的水解

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食品科学 2023年第20期44卷 175-182页

作者：周迪邱小娴柯野胡秋怡韶关学院英东生物与农业学院广东韶关512005

为开发木霉天冬氨酸蛋白酶的应用潜能,采用实时聚合酶链式反应技术,从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)中克隆蛋白酶基因asp,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中成功表达,进一步对重组蛋白酶rAsp进行分离纯化,分析其生化特性及对大... 详细信息

为开发木霉天冬氨酸蛋白酶的应用潜能,采用实时聚合酶链式反应技术,从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)中克隆蛋白酶基因asp,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中成功表达,进一步对重组蛋白酶rAsp进行分离纯化,分析其生化特性及对大豆分离蛋白的水解作用。结果显示,asp基因编码的蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶家族,其序列与本家族成员序列相似性最高为47.74%。在三角瓶中诱导表达时,发酵液中rAsp的酶活力为25.8 U/mL。rAsp最适反应pH值和温度分别为2.5和45℃,在pH 2.0~6.0范围和45℃以下具有较强的稳定性。Cu^(2+)和Mn2+具有促进rAsp活性的作用,而Fe^(3+)、十二烷基硫酸钠和胃蛋白酶抑制剂显著抑制rAsp的活性。rAsp对大豆分离蛋白的水解效率较商业化胃蛋白酶高7.7%;同时,降低β-伴大豆球蛋白和球蛋白致敏性的能力分别是胃蛋白酶的1.4倍和1.8倍。因此,rAsp在大豆蛋白加工应用中具有潜在的开发价值。

关键词：棘孢木霉重组天冬氨酸蛋白酶生化特性大豆分离蛋白致敏性

总状毛霉丝氨酸蛋白酶基因结构和功能的生物信息学分析

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2012年第4期38卷 370-376页

作者：柯野曾松荣郑秋桦韶关学院英东生命科学学院广东韶关512005

利用PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)技术从总状毛霉中克隆获得1个丝氨酸蛋白酶新基因,利用生物信息学方法对该基因序列、编码的酶序列以及酶性质和结构进行预测。结果表明:该基因编码区序列长1 421bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码由42... 详细信息

利用PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)技术从总状毛霉中克隆获得1个丝氨酸蛋白酶新基因,利用生物信息学方法对该基因序列、编码的酶序列以及酶性质和结构进行预测。结果表明:该基因编码区序列长1 421bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码由429个氨基酸残基组成的多肽;对该多肽的组成和进化分析表明,其成熟肽属于蛋白酶K家族的胞外蛋白酶;通过同源建模结构分析表明,该酶没有二硫键,有152个氢键和29个盐键,酶的Glu190、Ala192和Asp215残基与一个Ca2+相结合,酶活性位点残基Asp44和Ser241溶剂可及表面积较大,分别达到0.211 42和3.309 32;该酶的底物结合区域中,S1和S4口袋结构明显,S2次之,S3最不明显,部分组成S1和S4口袋的氨基酸残基不保守,这可能使该酶具有独特的水解性。上述结果可为该蛋白酶基因的异源表达和结构与功能关系等方面的研究提供参考。

关键词：总状毛霉丝氨酸蛋白酶基因生物信息学分析

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蔗渣栽培赤芝的配方初探

食用菌 2006年第3期28卷 27-28页

作者：方白玉郑传进柯野韶关学院生物工程系广东512005

以甘蔗渣为主要原料进行赤芝栽培实验的结果表明: 赤芝最佳栽培培养基配方:甘蔗渣38％,棉子壳30％,麸皮 30％,石膏1％,过磷酸钙1％。通过实验得出纯蔗渣也能栽培灵芝,配方为:甘蔗渣68％,麸皮30％,石膏1％,过磷酸钙1％。

关键词：甘蔗渣栽培技术灵芝正交实验

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米曲霉碱性蛋白酶基因的克隆表达及水解特性

华南理工大学学报（自然科学版） 2012年第8期40卷 88-94页

作者：柯野陈丹李家洲谢明权罗晓春华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广东轻工职业技术学院食品与生物工程系广东广州510300

米曲霉碱性蛋白酶对植物蛋白具有高效的水解能力和较好的脱苦作用.为了便于大量获得该酶以利于工业上的应用,文中通过RT-PCR克隆获得米曲霉碱性蛋白酶基因,将之转化到毕赤酵母KM71菌株中并成功表达,之后用该酶进行牛胰岛素氧化链B链及... 详细信息

米曲霉碱性蛋白酶对植物蛋白具有高效的水解能力和较好的脱苦作用.为了便于大量获得该酶以利于工业上的应用,文中通过RT-PCR克隆获得米曲霉碱性蛋白酶基因,将之转化到毕赤酵母KM71菌株中并成功表达,之后用该酶进行牛胰岛素氧化链B链及大豆和花生蛋白的水解试验.结果显示:在10 L发酵罐中诱导表达时,发酵液中重组碱性蛋白酶的酶活达4100U/mL;该蛋白酶最适反应pH值和温度分别为8.5～9.5和50℃,在pH值为6.0～10.0和温度低于40℃时具有较好的稳定性;该酶具有广泛的肽键选择性;该酶对大豆和花生蛋白显示出了强于部分商品化蛋白酶的水解能力.以上结果表明:该重组蛋白酶具有较大的开发利用潜力.

关键词：米曲霉重组碱性蛋白酶毕赤酵母克隆表达水解特性

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十种中草药对白色念珠菌的药敏试验研究

山东医药 2005年第23期45卷 38-39页

作者：曾松荣曾晓君黄晓敏柯野韶关学院广东韶关512005

2003年12月～2004年6月,我们选择虎杖等10种中草药对白色念珠菌进行了体外药物敏感试验,旨在进一步分析单味药中抗真菌最有效的药物成分,为开发利用抗真菌的有效中草药奠定基础.

关键词：中草药白色念珠菌乙醇提取物药敏试验

雅致放射毛霉蛋白酶SP1基因的克隆及序列分析

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华南理工大学学报（自然科学版） 2012年第12期40卷 128-133,144页

作者：柯野黄伟谦李家洲谢明权罗晓春华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广东轻工职业技术学院食品与生物工程系广东广州510300

雅致放射毛霉蛋白酶具有较好的脱苦味和水解豆类蛋白的能力.为了揭示其结构和功能的关系,促进其开发应用,文中通过RACE和PCR技术克隆获得丝氨酸蛋白酶SP1基因.根据生物信息学中的理论和方法,对SP1进行了较全面的预测和分析.结果表明:SP... 详细信息

雅致放射毛霉蛋白酶具有较好的脱苦味和水解豆类蛋白的能力.为了揭示其结构和功能的关系,促进其开发应用,文中通过RACE和PCR技术克隆获得丝氨酸蛋白酶SP1基因.根据生物信息学中的理论和方法,对SP1进行了较全面的预测和分析.结果表明:SP1基因由4个外显子和3个内含子组成,编码454个氨基酸残基.SP1属于蛋白酶K家族,与Rhizopus microsporus ***的丝氨酸蛋白酶同源性最高,亲缘关系最近.以蛋白酶K晶体结构(PDB code:1IC6)作为模板进行同源建模,通过对模拟结构的分析可知:SP1分子内无二硫键,具有1个Ca2+结合位点;SP1与蛋白酶K在底物结合区域、氢键、盐键和二硫键等方面均存在差异,这些差异可能就是SP1具有独特的水解作用和脱苦能力的原因.

关键词：雅致放射毛霉丝氨酸蛋白酶基因克隆序列分析

地方本科院校生物工程专业应用型人才培养的探讨与实践——以韶关学院为例

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西南师范大学学报（自然科学版） 2018年第11期43卷 190-195页

作者：柯野曾松荣郑秋桦韶关学院英东生命科学学院广东韶关512005

在国内产业转型升级背景下,该文针对地方本科院校韶关学院生物工程专业的具体情况,在树立面向企业的办学理念、设置与企业实际需求相关的课程体系、建立多种类型的学生培养平台以及培养"双师型"师资队伍等方面进行了探索与实践,建立了... 详细信息

在国内产业转型升级背景下,该文针对地方本科院校韶关学院生物工程专业的具体情况,在树立面向企业的办学理念、设置与企业实际需求相关的课程体系、建立多种类型的学生培养平台以及培养"双师型"师资队伍等方面进行了探索与实践,建立了对该专业应用型人才的培养模式,为同类地方院校应用型人才的培养提供参考.

关键词：地方本科院校生物工程专业应用型人才培养

大豆分离蛋白重组蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响

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食品与生物技术学报 2021年第7期40卷 97-102页

作者：曾松荣庞彦韬柯野何璐娜刘玉萍韶关学院英东生物与农业学院广东韶关512005

为了研究重组酱油曲霉碱性蛋白酶(rAp)水解大豆分离蛋白获得的大豆肽对小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响,将诱导表达后分离纯化的rAp对大豆分离蛋白进行水解,然后将水解液灌胃小白鼠,测定其水解液对小鼠免疫器官指数、小鼠血清溶菌酶活... 详细信息

为了研究重组酱油曲霉碱性蛋白酶(rAp)水解大豆分离蛋白获得的大豆肽对小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响,将诱导表达后分离纯化的rAp对大豆分离蛋白进行水解,然后将水解液灌胃小白鼠,测定其水解液对小鼠免疫器官指数、小鼠血清溶菌酶活性和小鼠血清抗菌活力等对小鼠免疫功能的影响;通过测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及丙二醛(MDA)浓度等,进一步检测对小鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)浓度的影响。结果表明,大豆肽对小鼠免疫器官指数没有显著影响,但可显著提高小鼠血清溶菌酶活性和小鼠血清抗菌活力;对小鼠血清中的GSH-PX的活力影响不显著,但能显著提高血清中的CAT活力和显著降低MDA浓度。由此可见,rAp水解大豆分离蛋白获得的大豆活性肽在一定程度上能增强小鼠机体的免疫功能和抗氧化活性,在保健品行业为大豆的高值化利用提供了实验依据。

关键词：酱油曲霉碱性蛋白酶大豆分离蛋白大豆肽免疫功能抗氧化

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植酸酶的来源及合成研究进展

中国饲料 2009年第8期 11-12,18页

作者：赵翠燕许钦坤柯野韶关学院英东生物工程学院农业科学系 512005

植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇和磷酸的一类酶的总称。植酸酶在单胃动物中的推广和应用往往受到其酶性质的局限。本文综述了植酸酶的来源、基因工程和蛋白质工程合成植酸酶的研究进展。

关键词：植酸酶基因工程蛋白质工程