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纤维蛋白凝胶用于兔角膜缘上皮细胞移植培养的研究

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纤维蛋白凝胶用于兔角膜缘上皮细胞移植培养的研究

作者：柯红琴华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】研究成功构建兔全角膜缘干细胞缺乏模型的方法和时间，观察造模后各时间点模型眼角膜的病理结构。【方法】用手术刀360°切除角膜缘内1mm外2mm厚约10050μm的上皮组织和剩余的全部中央角膜上皮组织及其浅层基质，以角膜混浊、... 详细信息

【目的】研究成功构建兔全角膜缘干细胞缺乏模型的方法和时间，观察造模后各时间点模型眼角膜的病理结构。【方法】用手术刀360°切除角膜缘内1mm外2mm厚约10050μm的上皮组织和剩余的全部中央角膜上皮组织及其浅层基质，以角膜混浊、角膜新生血管和角膜上皮荧光素钠染色为观察指标，分别统计术后第2周时的模型得分，并将各时期成功模型眼标本进行HE染色、PAS染色和间接免疫荧光染色。【结果】术后第2周时的模型成功率分别为12.5%、62.5%、81.3%和87.5%，卡方检验结果示术后第3周造模成功率明显高于第2周，且差异有统计学意义(Χ2=8.533，P=0.003)，而第3周与第4周相比、第4周与第5周相比、第3周与第5周相比差异均无统计学意义。造模成功的平均时间是3.21±0.80周。成功模型眼的典型外观可见角膜明显混浊、角膜新生血管和荧光素钠染色阳性。病理切片HE染色示角膜基质水肿、较多炎症细胞浸润和新生血管。PAS染色仅在第5周时可见杯状细胞。造模成功的模型眼角膜在各时间点CK3染色均为阴性。【结论】手术切除角膜缘及全部中央角膜上皮和浅层基质可以成功构建全角膜缘干细胞缺乏的动物模型，模型成功的平均时间为3.2周。【目的】研究兔角膜缘干细胞在纤维蛋白凝胶上的最佳接种方式及其生长情况。【方法】取角膜缘上皮组织块进行细胞培养，MTT法测定细胞相对活性，并用针对抗角蛋白3(CK3)的单克隆抗体AE5和抗增殖性细胞核抗原单克隆抗体(PCNA)进行间接免疫荧光法来鉴定角膜缘干细胞。将传第二代的细胞分A、B两组分别接种到纤维蛋白凝胶表面和凝胶体内进行培养，在接种后第5天、10天和15天时将凝胶溶解离心后计数细胞数目，比较两种接种方式下细胞的增殖力。【结果】兔角膜缘干细胞传第一代时在接种后第三天细胞增殖活性最强，间接免疫荧光染色：CK3染色胞浆阳性，PCNA染色胞核阳性。以凝胶为载体培养干细胞时，第5d时A组细胞数低于B组，第10d和第15d时A组细胞数均高于B组。【结论】以纤维蛋白凝胶为载体培养角膜缘干细胞时将细胞接种在凝胶表面比包埋在凝胶体内更有利于细胞增殖，适合用于角膜缘干细胞移植培养的研究。

关键词：角膜缘干细胞缺乏动物模型兔纤维蛋白凝胶角膜缘干细胞角膜移植

对比经结膜入路开眶术和内外联合开眶术摘除视神经内侧眼眶海绵状血管瘤的临床效果

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昆明医科大学学报 2022年第4期43卷 38-43页

作者：杨亚斌柯红琴段聪张利伟云南大学附属医院/云南省第二人民医院眼科/云南省眼科医院/云南省眼部疾病临床医学研究中心云南昆明650021

目的评估经结膜入路前路开眶术,内外侧联合开眶术,2种不同入路手术摘除肌锥内视神经内侧眼眶海绵状血管瘤的临床效果。方法回顾性分析云南省第二人民医院2009年09月至2019年09月收治的68例眼眶海绵状血管瘤,根据术式分为A、B 2组。A组... 详细信息

目的评估经结膜入路前路开眶术,内外侧联合开眶术,2种不同入路手术摘除肌锥内视神经内侧眼眶海绵状血管瘤的临床效果。方法回顾性分析云南省第二人民医院2009年09月至2019年09月收治的68例眼眶海绵状血管瘤,根据术式分为A、B 2组。A组为结膜入路前路开眶术共33例,B组为内外侧联合开眶术共35例,评估2组患者在平均住院时间、手术时间、手术操作空间、术中出血量、肿瘤完整摘、术后并发症等指标,差异无统计学意义(P>0.05)。结果A组平均住院天数为(5.03±1.63)d,B组为(8.34±2.13)d,两者相比差异有统计学意义(t=-4.926,P=0.000)。A组平均手术时间为(55.62±5.43)min,B组为(109.21±13.72)min,两者相比差异有统计学意义(t=-16.428,P=0.000)。手术操作空间用注水法测量,用所注水的体积表示,A组平均为(5.22±0.21)mL,B组平均为(16.501±1.22)mL,两者相比差异有统计学意义(t=-48.362,P=0.000)。术中出血量:A组平均为(17.22±1.65)mL,B组平均为(59.29±6.42)mL,两者相比差异有统计学意义(t=-28.098,P=0.000)。肿瘤完整摘除率:A组为90.9%(30/33),B组为97.14%(34/35);术后视力:A组患者术后视力提高和不变者占93.9%(31/33),术后视力下降占6.06%(2/33);B组术后视力提高和不变者占85.71%(30/35),术后视力下降或丧失者占14.3%(5/35)。结论结膜入路前路开眶术和内外侧联合开眶术在神经内侧眼眶海绵状血管瘤摘除术中各有优缺点,正确选择手术方式是完整摘除眼眶海绵状血管瘤的关键,术前应根据影像学资料准确判断肿瘤位置和大小。

关键词：眼眶海绵状血管瘤经结膜入路前路开眶术内外侧联合开眶术

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兔全角膜缘干细胞缺乏模型的构建和鉴定

中华实验眼科杂志 2013年第2期31卷 151-155页

作者：柯红琴刘磊栗静王虎杰黎冬平华中科技大学同济医学院附属同济医院眼屈光治疗中心武汉430030

背景角膜缘干细胞缺乏（LSCD）可导致各种眼表功能异常，严重的LSCD会导致角膜结膜化、慢性炎症、持续的角膜上皮缺失、角膜混浊和伴发的长期视力丧失。目的研究成功构建兔全LSCD模型的适宜方法和最佳时间，观察造模后各时间点模型眼角... 详细信息

背景角膜缘干细胞缺乏（LSCD）可导致各种眼表功能异常，严重的LSCD会导致角膜结膜化、慢性炎症、持续的角膜上皮缺失、角膜混浊和伴发的长期视力丧失。目的研究成功构建兔全LSCD模型的适宜方法和最佳时间，观察造模后各时间点模型眼角膜的病理结构改变。方法选择3～5月龄健康日本大耳白兔20只，用手术刀切除左眼360。角膜缘内1mm、角膜缘外2mm的角膜缘上皮组织和剩余的全部中央角膜上皮组织和浅层基质，切除组织厚度为100～150μm。分别在术后2～5周行裂隙灯检查，以角膜混浊、角膜新生血管情况和上皮荧光素钠染色情况为观察指标，按照国际通用LSCD模型评分标准对模型眼进行评分。分别于术后2、3、4、5周获取模型眼的角膜组织标本，行苏木精一伊红染色和过碘酸希夫染色观察角膜组织结构和杯状细胞的改变，用间接免疫荧光染色法检测细胞角蛋白3（CK3）在角膜组织中的表达。手术后不同时间点造模成功率的差异比较采用Fisher精确概率法。结果术后第2、3、4、5周时的模型成功率分别为12．5％、62．5％、81．3％和87．5％，术后第3周造模成功率明显高于第2周，差异有统计学意义（P=0．009）；第3周与第4周相比差异无统计学意义（P=0．465），第3周与第5周相比差异有统计学意义（P=0．049），第4周与第5周相比差异无统计学意义（P=0．200）。造模成功的平均时间为（3．21±0．80）周。造模成功的标准为模型眼角膜明显混浊，角膜新生血管形成和荧光素钠染色阳性。模型眼的组织病理学检查示角膜基质水肿，较多炎性细胞浸润和新生血管形成。过碘酸希夫染色发现，仅在造模后第5周的角膜组织中发现杯状细胞。各时间点造模成功模型眼角膜组织中均未见到CK3阳性表达。结论用手术切除角膜缘及全部中央角膜上皮的方法可以成功构建全LSCD动物模型，造模成功的时间约为手术后3．2周。

关键词：角膜缘干细胞缺乏动物模型兔

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结晶样视网膜变性一家系患者二例

中华实验眼科杂志 2016年第8期34卷 723-724页

作者：柯红琴胡竹林张书林刘海云南省第二人民医院眼科昆明650021

先证者,男,36岁,因驾校体检发现左眼视力差及双眼色觉异常数月就诊,眼部检查：视力右眼为0.5,矫正后为0.8,左眼0.15,矫正后为0.25;双眼角膜透明,前房深度中等,瞳孔直径约为3 mm,对光反射灵敏,双侧瞳孔等大等圆,晶状体及玻璃体透明.扩瞳... 详细信息

先证者,男,36岁,因驾校体检发现左眼视力差及双眼色觉异常数月就诊,眼部检查：视力右眼为0.5,矫正后为0.8,左眼0.15,矫正后为0.25;双眼角膜透明,前房深度中等,瞳孔直径约为3 mm,对光反射灵敏,双侧瞳孔等大等圆,晶状体及玻璃体透明.扩瞳后查眼底可见视盘边界清晰,色正常,杯盘比为0.2,动脉变细,反光增强,动静脉比为1∶2,视网膜呈青灰色,后极部散在大量结晶样闪光小点,密度较高,向周边视网膜闪光小点逐渐减少,周边视网膜散在骨细胞样色素沉着（图1）.患者主诉夜间视物不清加重.查色觉图谱示红绿色觉明显异常,患者拒绝其余眼部辅助检查.诊断：双眼结晶样视网膜变性（bietti crystalline corneoretinal dystrophy,BCD）,未予治疗.

关键词：结晶样视网膜变性患者周边视网膜家系色觉异常眼部检查瞳孔直径前房深度

毛囊性鱼鳞病伴畏光、秃发综合征继发角膜溃疡穿孔一例

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中华眼科杂志 2019年第10期55卷 788-789页

作者：柯红琴杨亚斌王莹婷刘海云南省第二人民医院眼科昆明医科大学第四附属医院眼科云南省眼部疾病临床医学研究中心云南省眼病临床医学中心 650021

患者男性,47岁,因右眼疼痛、畏光伴视力下降2个月就诊,患者全身皮肤鱼鳞样改变、秃发、眉毛和睫毛缺失,双眼眼睑睑板腺开口闭锁,右眼角膜溃疡穿孔。诊断为毛囊性鱼鳞病伴畏光、秃发综合征。于眼科行右眼结膜瓣覆盖术和双眼睑缘融合术,... 详细信息

患者男性,47岁,因右眼疼痛、畏光伴视力下降2个月就诊,患者全身皮肤鱼鳞样改变、秃发、眉毛和睫毛缺失,双眼眼睑睑板腺开口闭锁,右眼角膜溃疡穿孔。诊断为毛囊性鱼鳞病伴畏光、秃发综合征。于眼科行右眼结膜瓣覆盖术和双眼睑缘融合术,使用保湿润滑眼液和眼膏,取得了较好的效果。

关键词：鱼鳞病毛囊性角膜溃疡穿孔睑板腺眼膏融合术秃发视力下降

影响近视患者LASIK手术前后暗环境下低对比度视力的因素

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中国激光医学杂志 2011年第6期20卷 366-370页

作者：徐曼刘磊栗静王虎杰柯红琴华中科技大学同济医学院附属同济医院眼屈光治疗中心武汉市430030

目的探索影响近视患者准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)前后暗环境下低对比度视力(lowcontrast visual acuity,LCVA)的相关因素。方法行LASIK术的患者61例122只眼。使用ZyQv视力表测量患者手术前后暗环境... 详细信息

目的探索影响近视患者准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)前后暗环境下低对比度视力(lowcontrast visual acuity,LCVA)的相关因素。方法行LASIK术的患者61例122只眼。使用ZyQv视力表测量患者手术前后暗环境下10%对比度视力。术前及术后3个月检查裸视力、瞳孔直径、LCVA值、球镜度、等效球镜度、总像差、总高阶像差、K值、Q值和柱镜等。结果 (1)术前LCVA值与瞳孔直径、球镜度绝对值、等效球镜度绝对值、总像差及总高阶像差正相关,与K值、柱镜度、Q值及球差不相关。(2)术后3个月LCVA值与Q值、总像差、总高阶像差及球差正相关,与瞳孔直径及K值不相关;ΔLCVA与Δ总高阶像差、Δ球差、ΔQ值及预矫屈光度绝对值正相关。结论近视患者LASIK术前、术后其LCVA值受眼部不同因素的影响。

关键词：激光准分子激光原位角膜磨镶术低对比度视力

云南省文山州40岁及以上壮族和苗族人群翼状胬肉患病率及其影响因素

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国际眼科杂志 2022年第2期22卷 347-351页

作者：柯红琴张文佳刘海何利平杨极张乾母凤婷王莹婷段聪胡竹林云南大学附属医院眼科云南省眼科医院云南省眼科疾病临床医学中心云南省眼部疾病临床医学研究中心中国云南省昆明市650021 昆明医科大学中国云南省昆明市650500

目的:调查云南省文山州40岁及以上壮族和苗族人群的翼状胬肉患病率及其影响因素。方法:采用手持式裂隙灯和Keratograph-D眼表综合分析仪对云南省壮族和苗族目标人群进行流行病学调查,采用Logistic回归分析研究性别、年龄、职业、是否户... 详细信息

目的:调查云南省文山州40岁及以上壮族和苗族人群的翼状胬肉患病率及其影响因素。方法:采用手持式裂隙灯和Keratograph-D眼表综合分析仪对云南省壮族和苗族目标人群进行流行病学调查,采用Logistic回归分析研究性别、年龄、职业、是否户外活动和民族等因素对翼状胬肉的影响。结果:于2019-03/11选取调查对象共1239人,确诊翼状胬肉437人,翼状胬肉总体患病率为35.27%。双眼翼状胬肉占59.27%,单眼翼状胬肉占40.73%。胬肉患病率在壮族人群为34.84%(224人),在苗族人群为35.74%(213人),两者无差异(P=0.740)。Logistic回归分析结果显示,睑板腺开口有无堵塞是翼状胬肉发生的影响因素(P=0.019),优势比OR=1.348。性别、年龄、受教育程度、是否户外活动、高血压和饮食习惯不是翼状胬肉的影响因素。用等级资料的Logistic回归进行胬肉侵入程度的多因素分析,结果显示泪河高度是翼状胬肉侵入程度的影响因素(P=0.048),泪河高度值越低,侵入程度越大。结论:云南省文山州40岁及以上壮族和苗族人群翼状胬肉患病率较高,睑板腺开口有无堵塞、泪河高度影响翼状胬肉的发生和侵入程度。

关键词：翼状胬肉患病率云南省苗族壮族

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以纤维蛋白凝胶为载体培养兔角膜缘上皮细胞

眼科新进展 2013年第2期33卷 113-117页

作者：柯红琴刘磊栗静王虎杰徐曼昆明医学院第四附属医院眼科云南省昆明市650000 华中科技大学同济医学院附属同济医院眼屈光治疗中心湖北省武汉市430030 武汉市爱尔眼科医院湖北省武汉市430030

目的研究兔角膜缘上皮细胞(corneal limbus epithelialcell,CLEC)在纤维蛋白凝胶上的最佳接种方式及其生长情况。方法取角膜缘上皮组织块进行细胞培养。用针对鼠抗兔角蛋白3(CK3)的单克隆抗体AE5和抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体行间接免... 详细信息

目的研究兔角膜缘上皮细胞(corneal limbus epithelialcell,CLEC)在纤维蛋白凝胶上的最佳接种方式及其生长情况。方法取角膜缘上皮组织块进行细胞培养。用针对鼠抗兔角蛋白3(CK3)的单克隆抗体AE5和抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体行间接免疫荧光鉴定。MTT法测定CLEC增殖活性。将传第二代的细胞分A、B两组分别接种到纤维蛋白凝胶表面和凝胶体内进行培养,在接种后5d、10d、15d时将凝胶溶解离心后计数细胞数,比较两种接种方式下细胞的增殖力。结果传第一、二代细胞培养3～5d后胞浆AE5染色阳性,胞核PCNA染色阳性,传第一代阳性细胞比例分别为31%、65%,传第二代阳性细胞比例分别为45%、79%。传第一代细胞在接种后6h内贴壁,1～2d时处于潜伏期,2～3d时处于快速生长期,3d时达85%以上汇合,细胞增殖活性最高,4d时细胞汇合达95%以上,增殖活性逐渐降低。接种后5d时A组细胞数低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);10d和15d时A组细胞数均高于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论以纤维蛋白凝胶为载体培养CLEC时将细胞接种在凝胶表面比包埋在凝胶体内更有利于细胞增殖,适合用于CLEC移植培养的研究。

关键词：角膜缘上皮细胞纤维蛋白凝胶角膜移植

碳纤维增强树脂基复合材料的层间颗粒增韧技术研究进展

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材料导报 2024年第S1期38卷 575-582页

作者：赵涵怡柯红军汪东张洋李琪航天特种材料及工艺技术研究所北京100074

碳纤维增强树脂基复合材料(CFRP)具有高强高模的优点,被广泛应用于汽车、体育、船舶、航空航天等领域,达到了材料轻量化的要求。目前使用较多的树脂基体以环氧树脂(EP)等热固性树脂为代表,普遍存在脆性大、韧性差的问题,导致复合材料层... 详细信息

碳纤维增强树脂基复合材料(CFRP)具有高强高模的优点,被广泛应用于汽车、体育、船舶、航空航天等领域,达到了材料轻量化的要求。目前使用较多的树脂基体以环氧树脂(EP)等热固性树脂为代表,普遍存在脆性大、韧性差的问题,导致复合材料层合板容易在层间发生开裂。层间增韧是一种有效的增韧方式,它可以在不改变基体树脂粘度的情况下对特定区域进行增韧,提高材料的断裂韧性。本文介绍了层间断裂模式并总结了层间断裂韧性(ILFT)测试的数据处理方法,总结了聚合物颗粒与无机纳米颗粒(主要是碳纳米管)的颗粒种类、增韧机制、引入方式,并主要通过层间断裂韧性评价了各种颗粒的增韧效果。

关键词：碳纤维增强树脂基复合材料层间增韧层间断裂韧性聚合物颗粒无机纳米颗粒碳纳米管