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引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建单链抗体库

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基础医学与临床 2012年第1期32卷 56-60页

作者：杨浩杨青平查成喜韩跃武兰州大学基础医学院甘肃省第三人民医院内分泌科甘肃兰州730000

目的引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建高库容量的单链抗体库。方法收集不同年龄、性别、健康状态的人的静脉血各5 mL,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL基因,应用易错PCR对VH和VL基因进行突变,同时用DNA-shuffling技... 详细信息

目的引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建高库容量的单链抗体库。方法收集不同年龄、性别、健康状态的人的静脉血各5 mL,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL基因,应用易错PCR对VH和VL基因进行突变,同时用DNA-shuffling技术对全长单链抗体基因进行体外改组,获得的分子与T载体连接,转化*** DH5α,选取阳性克隆,经菌落PCR后酶切鉴定抗体库多样性,计算分析单链抗体库容量。结果成功构建了库容量为4.37×1013的单链抗体库,经酶切鉴定,初步判定抗体库多样性良好。结论引入易错PCR和DNA-shuf-fling技术,成功构建了单链抗体库,为后续筛选高亲和力抗体奠定了实验基础。

关键词：易错PCR DNA-shuffling 单链抗体库

2010—2020年某三甲医院患者病毒性肝炎实验室结果特征分析

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甘肃科技 2021年第8期37卷 80-82,62页

作者：陈晓娥查成喜赵子莹甘肃省中医院检验科甘肃兰州730050

分析2010-2020年某三甲医院实验室病毒性肝炎检测结果,旨在为兰州地区病毒性肝炎流行病学数据提供参考,为防控提供依据。查询2010年1月1日至2020年12月31日某三甲医院就诊人群为兰州地区的甲肝抗体、乙肝表面抗原、丙肝抗体、戊肝抗体结... 详细信息

分析2010-2020年某三甲医院实验室病毒性肝炎检测结果,旨在为兰州地区病毒性肝炎流行病学数据提供参考,为防控提供依据。查询2010年1月1日至2020年12月31日某三甲医院就诊人群为兰州地区的甲肝抗体、乙肝表面抗原、丙肝抗体、戊肝抗体结果,用Excel和SPSS软件分析数据。2010-2020年总计检测2141740例,病毒性肝炎阳性病例29659例,检出率最高的是2010年(157518例,1.94%),检出患病率最低的是2020年(217219例,0.99%),整体检测人数逐年升高,但患病率呈下降趋势,全年散在分布,其中乙型肝炎病例最多,占总检测阳性的72%(21479例),其次为丙型肝炎14%(4149例),甲型肝炎13%(3815例),最低为戊型肝炎1%(198例);病毒性肝炎阳性病例中男性17257例,女性12402例,男女性别之比为1.66∶1,男性年均检出患病率为2.77%,女性年均检出患病率为2.24%;40~49岁年龄组检出病例最多(8478例,28.58%),其次50~59岁年龄组检出病例(7000例,23.60%),20岁以下年龄组检出病例最少(322例,1.09%),20~29岁年龄组检出病例(2304例,7.77%),30~39岁年龄组检出病例(4707例,15.87%),60~69岁年龄组检出病例(4283例,14.44%),70岁以上年龄组检出病例(2565例,8.65%);阳性患者职业主要以农民和自由职业者为主,占总病例数的42.3%和36.8%;其次是离退休人员和企事业人员,占总病例数的10.5%和9.9%。2010-2020年病毒性肝炎阳性率逐年下降,乙型肝炎为其主要型别,但防疫形势依然严峻,需进一步提高疫苗的免疫接种工作,规范病毒性肝炎的报告流程。

关键词：病毒性肝炎阳性率特征分析

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内脂素在糖尿病模型小鼠糖脂代谢中的作用

中国生物制品学杂志 2019年第5期32卷 517-520页

作者：查成喜漆亚亚柳渊洁邢福军甘肃省中医院检验科甘肃兰州730050 兰州大学第一医院生物转化医学实验中心甘肃兰州730000

目的探讨内脂素在糖尿病模型小鼠糖脂代谢中的作用。方法通过基因工程技术构建内脂素转基因和基因敲除小鼠,同时以野生小鼠作为对照,3组小鼠均以高脂高糖饮食饲养1个月后,于空腹12 h、进食30 min及1、2和3 h用血糖检测仪检测血糖水平;... 详细信息

目的探讨内脂素在糖尿病模型小鼠糖脂代谢中的作用。方法通过基因工程技术构建内脂素转基因和基因敲除小鼠,同时以野生小鼠作为对照,3组小鼠均以高脂高糖饮食饲养1个月后,于空腹12 h、进食30 min及1、2和3 h用血糖检测仪检测血糖水平;小鼠禁食10 h用生化分析仪检测甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平;Western blot法检测小鼠体内内脂素表达水平;相应试剂盒检测小鼠体内胰岛素受体及胰岛素水平。结果除空腹12 h组外,进食30 min及1、2和3 h转基因组小鼠血糖水平明显低于基因敲除组和野生组(P 0. 05)。结论内脂素通过与胰岛素非竞争性结合胰岛素受体而发挥降低糖尿病小鼠血糖作用,且在脂代谢中具有促进脂肪积累的功能。

关键词：内脂素糖尿病脂代谢模型鼠

基于ssDNA适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞检测方法的建立

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中国生物制品学杂志 2011年第7期24卷 845-848页

作者：查成喜韩跃武张雪燕杨浩夏艳郭鹏兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所兰州730000

目的建立基于ssDNA适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞的检测方法。方法利用Cell-SELEX(Sys-tematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术获得针对K562细胞的高特异性ssDNA适配子,以双位点结合模式试验原理,结合生物... 详细信息

目的建立基于ssDNA适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞的检测方法。方法利用Cell-SELEX(Sys-tematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术获得针对K562细胞的高特异性ssDNA适配子,以双位点结合模式试验原理,结合生物素链霉亲和素磁珠技术,建立K562细胞的特异性检测方法,并验证其特异性及灵敏度。结果利用建立的方法分别检测K562细胞、HL-60细胞及空白对照细胞,K562组与HL-60组和空白对照组荧光强度值差异有统计学意义(P0.05),表明该方法特异性强;该方法能检测出数量小于100个的K562细胞,检测阈值低,灵敏度高。结论已成功建立了基于ssDNA适配子的检测K562细胞的新方法,为慢性粒细胞性白血病的分子诊断提供了一种新方法,也为分离K562细胞表面物质提供了新的思路。

关键词： K562细胞适配子双位点结合试验生物素-链霉亲和素磁珠分子诊断技术

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大容量人源肝癌核糖体展示单链抗体库的构建

亚太传统医药 2010年第7期6卷 11-14页

作者：王溪桥韩跃武杨浩查成喜兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所甘肃兰州730000

目的:构建人源肝癌天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体库,为开发治疗性人源抗体奠定良好的实验基础。方法:分别收集40例人新鲜外周血各2mL(包括健康成年人和肝癌患者),进行淋巴细胞分离和总RNA的提取,通过设计合适的优化引物用... 详细信息

目的:构建人源肝癌天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体库,为开发治疗性人源抗体奠定良好的实验基础。方法:分别收集40例人新鲜外周血各2mL(包括健康成年人和肝癌患者),进行淋巴细胞分离和总RNA的提取,通过设计合适的优化引物用RT-PCR技术扩增人抗体重链可变区基因(variable region of heavy chain,VH)、轻链可变区基因(variable region of light chain,VL)和作为间隔区的轻链恒定区基因(consis tregion of light chain,CK)。采用改进的重叠延伸PCR(SOEPCR)技术将VH和VL进行拼接,连接肽为Linker(Gly4Ser)3。之后引入构建核糖体展示单链抗体(scFv)库模板所需元件,包括一个T7启动子、一个核糖体结合位点(Kozak序列)和翻译起始密码,以及作为间隔区的CK基因。模板基因片段连接T-载体转化***5a大肠杆菌,对所构建的单链抗体库进行菌落PCR鉴定和测序分析。结果:①构建了库容量为2.65×1013的人源肝癌单链抗体库;②经菌落PCR鉴定和测序分析阳性重组子的序列,我们发现该抗体库具有丰富的多样性。结论:采用改进的重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,对构建库容量高、多样性好的人源性肝癌核糖体展示单链抗体库,提高了建库效率。成功构建的抗体库,为后续筛选抗体、抗体修饰等工作打下扎实的实验基础。

关键词：肝癌核糖体展示技术重叠延伸PCR 单链抗体库

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养阴生肌膜治疗复发性口腔溃疡102例

西部中医药 2013年第12期26卷 91-92页

作者：李晋凤李新翔查成喜甘肃省中医院甘肃兰州730050 白银市第一人民医院

目的:观察养阴生肌膜治疗复发性口腔溃疡的临床疗效。方法:将307例患者随机分为3组。养阴生肌膜组给予养阴生肌膜口腔患处贴敷,3次/d。养阴生肌散给予养阴生肌散组口腔患处贴敷,3次/d。奥硝唑膜组给予奥硝唑膜口腔患处贴敷,3次/d。3组... 详细信息

目的:观察养阴生肌膜治疗复发性口腔溃疡的临床疗效。方法:将307例患者随机分为3组。养阴生肌膜组给予养阴生肌膜口腔患处贴敷,3次/d。养阴生肌散给予养阴生肌散组口腔患处贴敷,3次/d。奥硝唑膜组给予奥硝唑膜口腔患处贴敷,3次/d。3组均以用药10天为1个疗程,治疗5个疗程后进行病例回访,随访时间1.5年。结果:临床疗效养阴生肌膜组、养阴生肌散组与奥硝唑膜组相比差异显著(P0.05)。疼痛消失时间、溃疡愈合时间、复发间隔时间养阴生肌膜组、养阴生肌散组与奥硝唑膜组相比差异显著(P0.05)。结论:养阴生肌膜治疗复发性口腔溃疡临床疗效显著。

关键词：口腔溃疡,复发性养阴生肌膜临床疗效

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不同穿刺方法对透析患者动静脉内瘘的影响

西部中医药 2013年第7期26卷 115-117页

作者：王小萍邢福军查成喜甘肃省中医院甘肃兰州730050 甘肃省中医药研究院

目的:探讨不同穿刺方法对血液透析患者动静脉内瘘的影响,为患者选择最佳穿刺方法提供依据。方法:将透析1年以上的124例患者分为治疗组和对照组各62例,分别采用阶梯式或纽扣式穿刺法和常规穿刺方法,观察穿刺时渗血、血肿、内瘘血管内膜... 详细信息

目的:探讨不同穿刺方法对血液透析患者动静脉内瘘的影响,为患者选择最佳穿刺方法提供依据。方法:将透析1年以上的124例患者分为治疗组和对照组各62例,分别采用阶梯式或纽扣式穿刺法和常规穿刺方法,观察穿刺时渗血、血肿、内瘘血管内膜壁厚度及内瘘瘤、内瘘狭窄、堵塞等并发症发生情况。结果:治疗组不良事件发生情况均明显少于常规随意点穿刺法,差异具有统计学意义(P<0.05);在穿刺50次后实验组血管内膜壁厚度小于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);穿刺1年后,治疗组患者动脉瘤、内瘘狭窄、堵塞等不良并发症发生情况均明显少于常规随意点穿刺法,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:阶梯式或纽扣式穿刺方法,能够明显减少穿刺渗血、血肿、穿刺失败等不良事件的发生率,减少血管内膜壁的增生,降低内瘘瘤、血管狭窄、血管堵塞等并发症的发生。

关键词：血液透析穿刺方法不良事件并发症

白银地区女性生殖道感染HPV基因型调查分析

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甘肃科技 2017年第12期33卷 100-101,83页

作者：秦建梅李明淑查成喜陶桂云王毅邢福军甘肃省中医院白银分院甘肃白银730900 甘肃省中医院甘肃兰州730050

调查白银地区女性生殖道感染HPV基因型分布状况,了解不同亚型HPV在女性中的感染情况及流行病学意义。对甘肃省中医院白银分院健康体检、门诊和住院的患者共640例,采集阴道分泌物标本,采用PCR-反向斑点杂交法检测21个HPV基因型。640例样... 详细信息

调查白银地区女性生殖道感染HPV基因型分布状况,了解不同亚型HPV在女性中的感染情况及流行病学意义。对甘肃省中医院白银分院健康体检、门诊和住院的患者共640例,采集阴道分泌物标本,采用PCR-反向斑点杂交法检测21个HPV基因型。640例样本中检出HPV阳性者65例,检出率为10.2%。共查出15种亚型。HPV阳性者中低危型占4.6%,高危型占78.5%,两型和两型以上混合感染占16.9%;640例样本中感染率最高的为高危HPV39型(2.2%)和HPV16(2.2%),其它分别为HPV58(1.9%),HPV52(1.3%),HPV66(0.7%),HPV6(0.6%),HPV51(0.6%),HPV56(0.6%),HPV18(0.5%),HPV53%(0.5%),HPV31(0.3%),HPV68(0.3%),HPV33(0.3%),HPV42(0.3%),HPV,81(CP8304)(0.2%)。白银地区女性生殖道感染HPV基因分布有区域特点,HPV检测具有重要的流行病学意义。

关键词：人乳头状瘤病毒亚型 PCR反向点杂交法

细胞色素P450 2C19基因多态性与氯吡格雷抗血小板作用相关性的Meta分析

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循证医学 2013年第5期13卷 285-291页

作者：查成喜邢福军杨邵华韩跃武甘肃省中医院检验科兰州730050 兰州大学基础医学院兰州730000

目的利用Meta分析的方法评估氯吡格雷抗血小板作用的效果和细胞色素P450 2C19基因(CYP2C19)多态性之间的相关性。方法计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、Cochrane图书馆、SCI、EMBASE和PubMed数据库,并手工检索... 详细信息

目的利用Meta分析的方法评估氯吡格雷抗血小板作用的效果和细胞色素P450 2C19基因(CYP2C19)多态性之间的相关性。方法计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、Cochrane图书馆、SCI、EMBASE和PubMed数据库,并手工检索相关杂志,收集氯吡格雷使用患者CYP2C19 A/G位点多态性的基因频率和抗血小板效应的独立病例对照研究,提取有效的数据,用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果共纳入8个病例对照研究,包括1 538例GG基因型患者和4 413例GA或者AA患者。Meta分析结果表明:使用氯吡格雷作为抗血小板药物的患者中,CYP2C19突变型(GA或者AA)携带者比野生型GG携带者的药物敏感性差[比值比=0.23,95%可信区间(0.13,0.40)];血浆药物浓度前者远低于后者[均数差=-17.38,95%可信区间(-25.59,-9.16)];血小板反应指数前者较后者明显降低[均数差=12.87,95%可信区间(8.48,17.26)];支架植入后血栓形成情况前者较后者有明显增加[比值比=3.68,95%可信区间(2.17,6.24)];血栓导致的死亡率前者也较后者增高[比值比=3.68,95%可信区间(1.82,7.43)];然而,对于心肌梗死的情况前者与后者之间无差异[比值比=1.25,95%可信区间(0.96,1.63)]。结论 Meta分析结果表明,CYP2C19基因多态性与氯吡格雷药物反应作用之间存在着一定的相关性,且易导致由于血小板凝集而造成的患者死亡。

关键词：细胞色素P450 CYP2C19基因多态性氯吡格雷 Meta分析