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山羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及耐药性分析

福建农业学报 2019年第8期34卷 925-932页

作者：黄丽丽林裕胜江锦秀张靖鹏游伟肖义军胡奇林福建师范大学生命科学学院福建福州350108 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】分离、鉴定福建省某养殖场病死山羊的病原,明确山羊病死原因,为山羊伪结核棒状杆菌病的防治提供科学依据。【方法】以无菌采集的病羊肺脏为材料,进行细菌分离纯化,鉴定分离菌株的形态特征及培养特性;提取菌株DNA,利用特异性引物... 详细信息

【目的】分离、鉴定福建省某养殖场病死山羊的病原,明确山羊病死原因,为山羊伪结核棒状杆菌病的防治提供科学依据。【方法】以无菌采集的病羊肺脏为材料,进行细菌分离纯化,鉴定分离菌株的形态特征及培养特性;提取菌株DNA,利用特异性引物和16S rRNA通用引物进行PCR,16S rRNA扩增片段送公司进行克隆测序并对序列进行分析;并进行生化、药敏和动物攻毒试验。【结果】该分离菌株在含10%脱纤维绵羊血的琼脂培养基上,生长成直径1 mm左右、中央凸起、乳白色、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,在营养琼脂培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。16S rRNA测序结果经NCBI在线软件Blast后显示与GenBank上的伪结核棒状杆菌的同源性高达100%;山羊伪结核棒状杆菌特异性PCR有目的扩增条带;生化试验结果与伯杰氏细菌鉴定手册中伪结核棒状杆菌相符,表明分离菌为山羊伪结核棒状杆菌,命名为FJ-PN。小鼠攻毒试验结果显示,小鼠腹腔与皮下注射0.3 mL含量为4×10^5 CFU·mL^-1的分离菌,在40 h内全部死亡;山羊攻毒试验结果显示,山羊经皮下注射2 mL、鼻腔接种1 mL含量为4×10^5 CFU·mL^-1的分离菌3 d后死亡。药敏试验结果显示该菌对克拉霉素、环丙沙星、青霉素、四环素、左氟沙星、氧氟沙星、庆大霉素高度敏感,对红霉素、氯霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢西丁、利福平低度敏感,对链霉素、甲氧苄啶表现耐药。【结论】本研究分离到的1株细菌为山羊伪结核棒状杆菌,具有较强的致病性,且对抗生素表现出一定的耐药性,为该病的诊断和合理用药提供了理论支持。

关键词：伪结核棒状杆菌山羊耐药性分离鉴定

猪流行性腹泻病毒E和M基因的克隆及变异分析

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福建农业学报 2015年第6期30卷 533-538页

作者：王隆柏王晨燕林裕胜车勇良吴学敏陈如敬周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

为了解2012-2014年福建省流行PEDV毒株E和M基因的变异情况,对19株PEDV的E基因和18株PEDV的M基因进行克隆和序列分析。结果表明：与CV777标准毒株相比较,福建流行PEDV毒株的E和M基因存在编码的部分氨基酸变异。19株PEDV E基因的核苷酸之... 详细信息

为了解2012-2014年福建省流行PEDV毒株E和M基因的变异情况,对19株PEDV的E基因和18株PEDV的M基因进行克隆和序列分析。结果表明：与CV777标准毒株相比较,福建流行PEDV毒株的E和M基因存在编码的部分氨基酸变异。19株PEDV E基因的核苷酸之间的同源性为97.4%-100.0%,与attenuated DR13弱毒株和CV777标准株同源性分别为97.4%-100.0%和97.0%-99.6%。18株PEDV M基因的核苷酸之间的同源性为97.4%-100.0%,与attenuated DR13弱毒株和CV777标准株同源性分别为97.2%-99.6%和97.5%-98.4%。核苷酸遗传进化树表明福建流行PEDV毒株的E基因与CV777亲缘关系较近,而M基因与2008年泰国流行的KU05CB08毒株亲缘关系较近,是个新的基因型,可能源于泰国。

关键词：猪流行性腹泻病毒 E和M基因变异分析

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羊口疮病毒115基因的克隆及原核表达

福建农业学报 2022年第7期37卷 850-854页

作者：林裕胜黄丽丽江锦秀张靖鹏刘维巍刘庆华胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 新疆生产建设兵团第十一师第五中学新疆乌鲁木齐830000 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

[目的]获得羊口疮病毒(ORFV)115基因表达蛋白。[方法]利用Oligo 7软件设计并筛选出115基因特异性扩增引物,以ORFV FJ-ND株基因组为模板,通过PCR技术扩增获得其基因序列,再将115基因克隆至pGEX-6p-1上,重组质粒pGEX-6p-115,并对其进行测... 详细信息

[目的]获得羊口疮病毒(ORFV)115基因表达蛋白。[方法]利用Oligo 7软件设计并筛选出115基因特异性扩增引物,以ORFV FJ-ND株基因组为模板,通过PCR技术扩增获得其基因序列,再将115基因克隆至pGEX-6p-1上,重组质粒pGEX-6p-115,并对其进行测序鉴定,鉴定正确后转化RosettaganmiB(DE3)感受态细胞,通过优化IPTG浓度和诱导时间获得重组融合蛋白最佳表达条件,用SDS-PAGE对表达的目的蛋白进行分析。[结果]115基因全长450 bp,编码149个氨基酸;115基因可以在RosettaganmiB中表达,重组蛋白分子大小约42 kDa,主要以包涵体形式表达。[结论]成功克隆了ORFV 115基因,构建了pGEX-6P-115原核表达质粒,优化了重组蛋白表达条件并进行纯化,为进一步探索ORFV 115蛋白在感染宿主过程中的机制和作用奠定基础。

关键词：羊口疮病毒 115基因克隆原核表达

山羊内源性鼻内肿瘤病毒enENTV-FJ1株全基因组测序及生物信息学分析

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中国预防兽医学报 2020年第10期42卷 1062-1067页

作者：江锦秀张靖鹏林裕胜毛坤明游伟黄丽丽胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福清市畜牧兽医技术服务中心福建福州350300 福建师范大学福建福州350108

为了丰富山羊内源性鼻内肿瘤病毒(enENTV)全基因组序列资源,本研究从1份患羊地方性鼻内肿瘤(ENT)病羊的肾脏中经PCR扩增了1株enENTV全基因组序列,命名为enENTV-FJ1,分别对其全基因组、5’端长末端重复序列(5’LTR)基因、gag基因、env基... 详细信息

为了丰富山羊内源性鼻内肿瘤病毒(enENTV)全基因组序列资源,本研究从1份患羊地方性鼻内肿瘤(ENT)病羊的肾脏中经PCR扩增了1株enENTV全基因组序列,命名为enENTV-FJ1,分别对其全基因组、5’端长末端重复序列(5’LTR)基因、gag基因、env基因及其编码的氨基酸序列进行同源性分析并构建系统进化树,对enENTV的5’LTR进行酶切位点分析,并分析该株病毒的gag、env序列与enENTV、山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)、绵羊鼻内肿瘤病毒1型(ENTV-1)等相关病毒参考株相应序列的差异性。结果显示,enENTV-FJ1基因组结构为LTR-gag-pro-pol-env-LTR,长度为7923 bp;全基因组同源性分析结果显示,enENTV-FJ1株与enENTVCHN1~enENTV-CHN66个参考株的同源性为95.7%~97.3%,同源性最近;与ENTV-2参考株的同源性为87.0%~93.2%;enENTV-FJ1的5’LTR基因序列、gag基因及其编码的氨基酸序列与enENTV参考株相应序列的同源性分别为92.8%~99.1%、92.6%~97.5%、92.2%~97.7%;enENTV-FJ1 env基因及其编码的氨基酸序列与内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)参考株相应序列的同源性分别为93.3%~93.8%、94.3%~94.8%。全基因组进化树结果显示,enENTV-FJ1与enENTV-CHN1~enENTV-CHN6处于同一个进化分支;5’LTR进化树结果显示,enENTV-FJ1株与enENTV-CHN2处于同一进化分支;gag基因进化树结果显示enENTV-FJ1与ENTV-CHN9处于一个小的进化分支,与enENTV-CHN6同处于一个较大的进化分支;env基因进化树结果显示,enENTV-FJ1株与ENTV-2/Spain株处于同一进化分支;所有enENTV的5’LTR区均无ENTV-2参考株所含有的Hpy188Ⅰ、NlaⅣ、MowⅠ这3个酶切位点。gag基因序列分析结果显示,与enJSRV、外源ENTV-2、ENTV-1及绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的gag基因相比,enENTV-FJ1株在697 bp^705 bp有9个核苷酸的插入,该基因编码的氨基酸在aa229~aa232处插入3个脯氨酸。env基因编码的氨基酸结果显示,enENTV-FJ1株与ENTV-2株在aa1~aa7处插入了7个氨基酸(MFVFFRR)。与外源性病毒相比,enENTV-FJ1株在跨膜蛋白(TM)胞质尾区无YXXM基序。上述结果表明,enENTV-FJ1与enENTV属于同种病毒,其5’LTR、gag基因、env基因与来自山羊的ENTV-2病毒株亲缘关系更近;其全基因组序列与外源性ENTV和JSRV的差别主要在5’LTR区、gag基因和env基因。本研究明确了enENTV-FJ1株全基因组序列,为鉴定内外源鼻内肿瘤病毒(ENTV)以及研究ENTV-2的致瘤机制奠定了基础。

关键词：山羊内源性山羊鼻内肿瘤病毒全基因组测序生物信息学分析

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一起仔猪流行性腹泻的诊断

福建畜牧兽医 2013年第4期35卷 49-50页

作者：林裕胜王晨燕王隆柏陈如敬周伦江吴学敏邵良平福建农林大学动物科学学院福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

2010年以来,我国多数省份发生了哺乳仔猪以腹泻为主、伴有呕吐和脱水为临床特征的疫病,具有传染性。暴发该病的猪场,哺乳仔猪的死亡率高达90%以上,给养猪业带来巨大的损失。研究表明：猪流行性腹泻病毒（PEDV）是该病的主要病原。PEDV... 详细信息

2010年以来,我国多数省份发生了哺乳仔猪以腹泻为主、伴有呕吐和脱水为临床特征的疫病,具有传染性。暴发该病的猪场,哺乳仔猪的死亡率高达90%以上,给养猪业带来巨大的损失。研究表明：猪流行性腹泻病毒（PEDV）是该病的主要病原。PEDV可感染各种年龄段的猪，主要引起猪流行性腹泻（porcineepidemic diarrhea，PED）、呕吐及脱水。虽然哺乳仔猪及中大猪均可感染发病，但以哺乳仔猪的发病和死亡最为严重，也是仔猪早期死亡的重要病因之一。1978年英国首次报道PED，并确定为一种冠状病毒引起的疾病。

关键词：猪流行性腹泻病毒哺乳仔猪诊断 PEDV 早期死亡临床特征冠状病毒传染性

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地衣芽孢杆菌对仔猪生长性能和腹泻率的影响

福建畜牧兽医 2014年第1期36卷 11-12页

作者：林裕胜林智涛林水龙林文星姚厉强杨玉芬乔建国邵良平福建农林大学动物科学学院福州350002 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

为研究地衣芽胞杆菌对仔猪生长性能和腹泻率的影响,选取体重25 kg左右(杜×长×大)三元杂交仔猪80头,作为试验动物,根据体重相近、公母各半的原则将其随机分为对照组和试验组,每组设2个重复,每个重复20头。对照组饲喂基础日粮,试验组在... 详细信息

为研究地衣芽胞杆菌对仔猪生长性能和腹泻率的影响,选取体重25 kg左右(杜×长×大)三元杂交仔猪80头,作为试验动物,根据体重相近、公母各半的原则将其随机分为对照组和试验组,每组设2个重复,每个重复20头。对照组饲喂基础日粮,试验组在每吨基础日粮中添加100 g地衣芽孢杆菌。结果表明,与对照组相比,试验组仔猪日增重提高11.94%(P﹤0.05),仔猪腹泻率减少10%(P﹤0.05),说明日粮中添加地衣芽孢杆菌能有效提高仔猪生长性能,降低腹泻率。

关键词：地衣芽孢杆菌仔猪生长性能腹泻率

猪流行性腹泻病毒结构蛋白基因的遗传变异分析

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猪流行性腹泻病毒结构蛋白基因的遗传变异分析

福建省畜牧兽医学会2015年学术年会

作者：王隆柏林裕胜王晨燕车勇良陈如敬吴学敏严山周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

为探明2012-2014年福建省流行PEDV毒株结构蛋白基因的变异情况,本研究对19株PEDV的E基因和18株PEDV的M基因进行了克隆和序列分析。结果表明:与CV777标准毒株相比较,福建流行PEDV毒株的E和M基因存在部分别氨基酸变异。19株PEDV E基因的... 详细信息

为探明2012-2014年福建省流行PEDV毒株结构蛋白基因的变异情况,本研究对19株PEDV的E基因和18株PEDV的M基因进行了克隆和序列分析。结果表明:与CV777标准毒株相比较,福建流行PEDV毒株的E和M基因存在部分别氨基酸变异。19株PEDV E基因的核苷酸之间的同源性分别为97.4%00.0%,与attenuated DR13弱毒株和CV777标准株同源性分别为97.4%00.0%和97.0%9.6%。18株PEDV M基因的核苷酸之间的同源性为97.4%00.0%,与attenuated DR13弱毒株和CV777标准株同源性分别为97.2%9.6%和97.5%8.4%。核苷酸遗传进化树表明福建流行PEDV毒株的E基因与CV777亲缘关系较近,而M基因与2008年泰国流行的KU05CB08毒株亲缘关系较近,是个新的基因型,可能源于泰国。

关键词：猪流行性腹泻病毒 E和M基因变异分析

来源： cnki会议评论

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福建省猪流行性腹泻流行病学调查

中国农学通报 2014年第35期30卷 83-86页

作者：林裕胜王隆柏吴秋玉王晨燕邵良平周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013 福建农林大学动物科学学院福州350002 泉州市动物疫病预防控制中心福建泉州362000

为探求2012—2013年猪流行性腹泻病毒(PEDV)在福建省的流行情况,本研究采用RT-PCR方法对采自福建省125个规模猪场的257份发生腹泻病料进行PED病原检测,并分析PEDV致猪群的发病情况。结果表明:被检病料PEDV的阳性率为63.04%(162/257),能... 详细信息

为探求2012—2013年猪流行性腹泻病毒(PEDV)在福建省的流行情况,本研究采用RT-PCR方法对采自福建省125个规模猪场的257份发生腹泻病料进行PED病原检测,并分析PEDV致猪群的发病情况。结果表明:被检病料PEDV的阳性率为63.04%(162/257),能导致不同阶段猪群发病,尤其是哺乳仔猪的发病率最严重,死亡率高达100%。表明:PEDV在福建省发病仍较为严重,应加强防控,以减少损失。

关键词：猪流行性腹泻流行病学调查

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复合酶制剂对仔猪生产性能和腹泻率的影响

福建畜牧兽医 2014年第3期36卷 12-12页

作者：林裕胜王隆柏福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 福建农林大学动物科学学院福州350002

为探明添加复合酶制剂对仔猪生长性能以及腹泻率的影响，选取80头体重为25kg左右的三元杂交仔猪作为试验动物，随机分为对照组和试验组，每个组设2个重复，每个重复20头。

关键词：三元杂交仔猪复合酶制剂腹泻率生产性能生长性能试验动物试验组对照组