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新型鹅星状病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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福建农业学报 2021年第6期36卷 665-669页

作者：余明兴林裕胜福建省浦城县动物疫病预防控制中心福建浦城353400 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】建立一种新型鹅星状病毒(New goose astrovirus,NGAstV)的RT-PCR检测方法。【方法】根据ORF2基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过优化扩增条件,建立检测新型鹅星状病毒的RT-PCR方法,对其进行特异性及敏感... 详细信息

【目的】建立一种新型鹅星状病毒(New goose astrovirus,NGAstV)的RT-PCR检测方法。【方法】根据ORF2基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过优化扩增条件,建立检测新型鹅星状病毒的RT-PCR方法,对其进行特异性及敏感性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】RT-PCR最佳反应体系为:Premix 10μL,ORF2上下游引物浓度10μmol·L^(-1)各1μL,模板3μL,无菌去离子水补足至20μL。最佳反应程序为:94℃2 min;94℃30 s、55℃15 s、72℃15 s,30个循环;72℃10 min。该方法对新型鹅星状病毒能扩增出特异性片段,对其他鹅常见病原无特异性扩增;检测灵敏度为62 fg·μL^(-1)。对45份临床样品进行检测,结果检测出15份阳性样品,阳性率为33.33%。【结论】建立的新型鹅星状病毒RT-PCR方法特异性强、稳定性好,可作为新型鹅星状病毒快速检测和流行病学调查的实用技术。

关键词：新型鹅星状病毒 RT-PCR 检测

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一例羊口疮病的诊断体会

当代畜牧 2016年第6Z期45卷 68-69页

作者：林裕胜福建省福州农业科学院畜牧兽医研究所 350013

羊口疮是由羊传染性脓疱病毒引起的羊接触性、嗜上皮性、人兽共患的传染病,各个年龄段的羊群都能感染发病,主要临床症状表现为嘴唇、口腔黏膜、外阴等出现丘疹或水疱,其中羔羊的危害最严重。ORFV属于痘病毒科副痘病毒属成员,病毒的核酸... 详细信息

羊口疮是由羊传染性脓疱病毒引起的羊接触性、嗜上皮性、人兽共患的传染病,各个年龄段的羊群都能感染发病,主要临床症状表现为嘴唇、口腔黏膜、外阴等出现丘疹或水疱,其中羔羊的危害最严重。ORFV属于痘病毒科副痘病毒属成员,病毒的核酸为双链DNA,基因组全长约145Kb。2016年1月15日,福清市某养殖场出现羔羊死亡疫情,根据临床症状、病理剖检及实验室诊断结果,确诊为羊口疮病,现将该病的诊断情况报道如下。

关键词：羊口疮病症状诊断

山羊地方性鼻内肿瘤病毒和支原体混合感染山羊的诊断

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中国兽医杂志 2017年第10期53卷 59-61,I0001页

作者：林裕胜江锦秀游伟胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

2016年10月福州市一山羊养殖户的山羊发病,经临床症状、剖检病变及实验室检验,确诊为羊地方性鼻内肿瘤病毒（Enzootic nasal tumor virus,ENTV）、绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,Mo）和丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma myco... 详细信息

2016年10月福州市一山羊养殖户的山羊发病,经临床症状、剖检病变及实验室检验,确诊为羊地方性鼻内肿瘤病毒（Enzootic nasal tumor virus,ENTV）、绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,Mo）和丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma mycoides ***,Mmc）混合感染引起的山羊呼吸道疾病，报告如下。

关键词：肺炎支原体混合感染地方性山羊病毒肿瘤诊断鼻

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和胃平喘颗粒对生长猪生长性能的影响

福建畜牧兽医 2015年第3期37卷 6-7页

作者：林裕胜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

为探求生长猪日粮中添加和胃平喘颗粒对生长猪生长性能的影响,选取80头50 kg左右"杜长大"健康生长育肥猪作为试验动物,根据公母各半、体重相近的原则将其随机分为试验组和对照组,每个组设2个重复,每个重复20头。试验组在每千克基础日粮... 详细信息

为探求生长猪日粮中添加和胃平喘颗粒对生长猪生长性能的影响,选取80头50 kg左右"杜长大"健康生长育肥猪作为试验动物,根据公母各半、体重相近的原则将其随机分为试验组和对照组,每个组设2个重复,每个重复20头。试验组在每千克基础日粮中添加20 g和胃平喘颗粒(g/kg),对照组饲喂基础日粮。试验结果显示,在生长猪日粮中添加20 g/kg和胃平喘颗粒对生长育肥猪的生长性能没有产生显著影响(P>0.05)。

关键词：和胃平喘颗粒生长猪生长性能

地衣芽孢杆菌对仔猪和生长猪生长性能与腹泻率的影响

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中国畜牧兽医文摘 2016年第6期32卷 49-50页

作者：林裕胜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

本试验旨在研究地衣芽孢杆菌对仔猪和生长猪生长性能与腹泻率的影响。选取体重为25kg左右(杜×长×大)三元杂交仔猪80头和50kg左右(杜×长×大)三元杂交生长猪80头,随机分为对照组和试验组,每组设2个重复,每个重复20头,分别饲喂基础日粮... 详细信息

本试验旨在研究地衣芽孢杆菌对仔猪和生长猪生长性能与腹泻率的影响。选取体重为25kg左右(杜×长×大)三元杂交仔猪80头和50kg左右(杜×长×大)三元杂交生长猪80头,随机分为对照组和试验组,每组设2个重复,每个重复20头,分别饲喂基础日粮(对照组)、基础日粮+100mg/kg地衣芽孢杆菌粉剂的试验日粮。结果表明,在日粮中添加100mg/kg的地衣芽孢杆菌对仔猪日增重提高11.94%(P0.05)腹泻率也没有影响。由此可见饲料中添加地衣芽孢杆菌对于提高仔猪生长性能和降低腹泻率具有一定的促进作用,对生长猪生长性能及腹泻率效果不显著。

关键词：地衣芽孢杆菌仔猪生长猪生长性能腹泻率

ORFV和Mo双重PCR检测方法的建立及应用

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农业生物技术学报 2017年第8期25卷 1374-1380页

作者：林裕胜江锦秀江斌游伟胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所

羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此两种病原混合感染日益增多,目前采用单一PCR方法检测这两种病原,临床上迫切需要能同时快速检测这两种病原的方法。为了建立能够直接从样品中同时检测ORFV核酸和Mo核酸的双重PCR方法,本研究根据ORFV的主要膜蛋白B2L基因(major envelope protein B2L gene)和Mo的膜蛋白P80基因(membrane protein P80 gene)序列,设计合成了2对特异性引物。结果显示,该方法可以同时扩增出ORFV的402 bp和Mo的700 bp特异性片段,而对其他常见病原的DNA模板均无扩增,显示出良好的特异性,该方法对ORFV和Mo的最低检出量分别为1.1×10~3copies/μL和3.47×10~3copies/μL,比单一PCR敏感10倍。对来自福建省部分羊场的883份病山羊(Capra hircus)临床样品进行检测,双重PCR检出ORFV阳性样品28份(阳性率为33.7%),Mo阳性样品33份(阳性率为39.8%),同时感染ORFV和Mo的阳性样品9份(阳性率为10.8%),检测结果与单一ORFV和Mo PCR结果一致。本研究所建立的双重PCR方法可用于ORFV和Mo的临床检测,为CE和MPGS的临床快速鉴别诊断和流行病学调查提供了有效的方法。

关键词：羊传染性脓疱病毒(ORFV) 绵羊肺炎支原体(Mo) 双重PCR

绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种多重PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2018年第9期40卷 812-817页

作者：林裕胜江锦秀江斌游伟胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法。该方法... 详细信息

为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法。该方法可以同时扩增出Mo、Mmc和Mccp的特异性片段,而对大肠杆菌、巴氏杆菌、羊传染性脓疱病毒等常见羊病病原无交叉反应,对Mo、Mmc和Mccp的最低检出量分别为3.62×10~4拷贝/μL、4.03×10~5拷贝/μL和6.78×10~5拷贝/μL。应用该方法对75份临床样品进行检测,结果与单一PCR检测结果一致。对32份临床样品同时用该多重PCR方法与分离鉴定法进行检测,结果显示,两种方法对Mo、Mmc、Mccp的检测符合率分别为87.5%、100%、100%。本研究建立的多重PCR方法特异性强、敏感性较高,适用于Mo、Mmc和Mccp临床快速检测及流行病学调查。

关键词：绵羊肺炎支原体丝状支原体山羊亚种山羊支原体山羊肺炎亚种多重PCR

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羊传染性脓疱病毒研究进展

动物医学进展 2016年第2期37卷 91-96页

作者：林裕胜江锦秀林甦胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的特... 详细信息

羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的特征、致病性、致病机理、免疫机理、免疫逃逸机制、检测方法和疫苗研究进行了综述。

关键词：羊传染性脓疱病毒致病机理免疫机理检测方法疫苗

羊口疮病毒和丝状支原体簇双重PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 292-295页

作者：林裕胜江锦秀江斌游伟胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

为建立一种同时快速检测羊口疮病毒(ORFV)和丝状支原体簇(Mm cluster)的方法,本研究根据ORFV的B2L基因和Mm cluster的16S r RNA基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了同时检测ORFV核酸和Mm cluster核酸的双重PCR方法。... 详细信息

为建立一种同时快速检测羊口疮病毒(ORFV)和丝状支原体簇(Mm cluster)的方法,本研究根据ORFV的B2L基因和Mm cluster的16S r RNA基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了同时检测ORFV核酸和Mm cluster核酸的双重PCR方法。该方法可以同时扩增出ORFV和Mm cluster的特异性片段,而对其它常见病原的DNA模板均无扩增,对ORFV和Mm cluster的最低检出量分别为3.8×10~4拷贝/μL和1.3×10~3拷贝/μL。利用该方法对36份临床样品进行检测,结果显示双重PCR检测结果与单一PCR检测结果符合率为100%。本研究建立的双重PCR方法特异性强,敏感性高,可重复性好,为临床ORFV和Mm cluster的快速检测、诊断及流行病学调查提供了方法。

关键词：羊口疮病毒丝状支原体簇双重PCR 检测