检索结果-南通市图书馆

非洲猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测方法的建立

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动物医学进展 2024年第3期45卷 42-47页

作者：林彦星翁巧玉阮周曦吴江黄超华金业陈鹏张彩虹杨俊兴曹琛福史卫军刘建利花群义深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 湖南普简生物科技有限公司湖南长沙410013 深圳市心月生物科技有限公司广东深圳518000

为建立一种非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法,以原核表达ASFV p72重组蛋白作为包被抗原,HRP标记的p72特异性单克隆抗体作为酶标抗体,建立了非洲猪瘟病毒抗体阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果显示,该方法中血清以1∶10稀释,... 详细信息

为建立一种非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法,以原核表达ASFV p72重组蛋白作为包被抗原,HRP标记的p72特异性单克隆抗体作为酶标抗体,建立了非洲猪瘟病毒抗体阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果显示,该方法中血清以1∶10稀释,酶标单抗以1∶6000稀释,临界值为50.12%。该方法特异性强,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清无交叉反应。对强阳性血清的最低稀释度为1∶640,弱阳性血清的最低稀释度为1∶10,具有较高的敏感性;重复性好,批内和批间变异系数均小于5%。应用所建立的方法与商品化同类检测试剂盒对174份血清进行检测,ASFV抗体阳性符合率为100%,阴性符合率为96.75%,总符合率为97.28%。建立的阻断ELISA方法可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。

关键词：非洲猪瘟病毒 p72蛋白单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验

小反刍兽疫病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法的建立

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中国兽医学报 2023年第10期43卷 2030-2034页

作者：黄超华阮周曦路平吴江曹琛福林彦星花群义深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛370200

为建立小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)可视化快速检测方法,本研究根据PPRV N基因的保守序列设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导恒温扩增(RT-RAA)特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA。结合侧向流试纸,... 详细信息

为建立小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)可视化快速检测方法,本研究根据PPRV N基因的保守序列设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导恒温扩增(RT-RAA)特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA。结合侧向流试纸,本研究建立了一种PPRV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法,并对该方法的性能进行了评估。结果显示,该方法特异性良好,与蓝舌病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、口蹄疫病毒(FMDV)、羊痘病毒(CaPV)、猪水泡病病毒(SVDV)、伪狂犬病毒(PRV)等病毒核酸无交叉反应;敏感性高,最低可检出4.30×10^(1)拷贝/μL的PPRV核酸;应用该方法及国家标准推荐的RT-qPCR方法对60个模拟样品进行平行检测,结果显示Kappa值为0.918,表明两者具有高度一致性。综上表明,本研究建立的PPRV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法特异性好、敏感性高,且操作简单、无需特殊仪器,可应用于野外或基层农场的PPRV快速筛查检测工作。

关键词：小反刍兽疫病毒 RT-RAA CRISPR/Cas12a

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涉嫌违法犯罪者家庭连带责任的合宪性分析

法律科学（西北政法大学学报） 2024年第3期42卷 71-82页

作者：林彦上海交通大学凯原法学院上海200030

由地方议事协调机构通过规范性文件针对违法犯罪嫌疑人的家庭成员和近亲属设定连带责任存在多重违宪风险。在实体内容方面,相关惩戒措施违背了责任自负原则、破坏了基于人格独立的以互惠和对等为基本准则的家庭秩序。在决策主体方面,由... 详细信息

由地方议事协调机构通过规范性文件针对违法犯罪嫌疑人的家庭成员和近亲属设定连带责任存在多重违宪风险。在实体内容方面,相关惩戒措施违背了责任自负原则、破坏了基于人格独立的以互惠和对等为基本准则的家庭秩序。在决策主体方面,由地方议事协调机构设置惩戒措施违背了人民代表大会制度下国家权力运行的基本要求。在决策形式方面,由不具立法位阶的规范性文件设定一系列限制基本权利的惩戒措施构成实质行使立法权,明显违背了法律保留原则。全国人民代表大会常务委员会法制工作委员会的备案审查对于保障公民基本权利、维护宪法权威具有重要的现实意义。

关键词：家庭连带责任责任自负法律保留职责法定基本权利保障

基于CRISPR/Cas12a技术的非洲马瘟病毒可视化检测方法的建立

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中国兽医科学 2023年第6期53卷 679-683页

作者：黄超华周华亮吴江曹琛福史卫军阮周曦林彦星花群义深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045

根据AHSVS7基因的保守序列,设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导的恒温扩增(RT-RAA)特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA,结合侧向流试纸建立了一种AHSV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法,并对其性能进行了评估。结果显示... 详细信息

根据AHSVS7基因的保守序列,设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导的恒温扩增(RT-RAA)特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA,结合侧向流试纸建立了一种AHSV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法,并对其性能进行了评估。结果显示,该方法与蓝舌病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、伪狂犬病病毒(PRV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、马动脉炎病毒(EAV)、马流感病毒(EIV)的核酸均无交叉反应;敏感性试验结果显示,本方法最低可检出2.16×101 copies/μL的AHSV核酸;应用该方法及WOAH推荐的RT-qPCR方法对50份模拟样品进行平行检测,结果显示,Kappa值为0.956,表明两者具有高度一致性。综上表明,本研究建立的非洲马瘟病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法特异性好、敏感性高,且操作简单、无需特殊仪器,可应用于野外或口岸现场的AHSV快速筛查检测工作。

关键词：非洲马瘟病毒 RT-RAA CRISPR/Cas12a 检测

植原体免疫主导膜蛋白A的原核表达载体构建、表达及其抗血清制备

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第6期29卷 625-628页

作者：梁楠楠张丽君赵海泉刘仲健罗焕亮林彦星刘宵宵安徽农业大学生命科学学院安徽合肥230036 深圳职业技术学院广东深圳518055 深圳市兰科植物保护研究中心广东深圳518114 深圳市出入境检验检疫局广东深圳518045

目的构建植原体免疫主导膜蛋白A(IdpA)的原核表达载体,表达并纯化目的蛋白,制备抗血清。方法以重组克隆质粒pMD18-T-IdpA为模板PCR扩增IdpA基因片段,经酶切连接将IdpA基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),重组质粒转化感受态E.coli BL21(D... 详细信息

目的构建植原体免疫主导膜蛋白A(IdpA)的原核表达载体,表达并纯化目的蛋白,制备抗血清。方法以重组克隆质粒pMD18-T-IdpA为模板PCR扩增IdpA基因片段,经酶切连接将IdpA基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),PCR和双酶切进行鉴定。IPTG诱导重组菌表达IdpA蛋白,并进行纯化和鉴定,以纯化获得的IdpA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并采用ELISA和Western blot法检测抗血清的效价和特异性。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-IdpA,并在大肠杆菌中能稳定表达IdpA蛋白,经纯化获得了纯度大于90%的高纯度目的蛋白,用纯化的IdpA蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了效价高于1∶320 000的强特异性抗IdpA蛋白抗血清。结论成功进行了IdpA的原核表达并制备了抗血清。

关键词：植原体免疫主导膜蛋白原核表达重组蛋白IdpA 抗血清

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全国人大纵向立法授权的规范构造

四川师范大学学报(社会科学版) 2024年第4期 55-62+200页

作者：谭嘉玲林彦上海交通大学凯原法学院

当前的纵向立法授权制度存在授权主体范围扩张的问题。以往位阶理论的研究路径无法解释纵向立法授权行为的性质和规范要求。纵向立法授权本质上是立法权配置的例外方式，其实质依据是国家机构的基本法律制定权，形式依据是最高国家权力... 详细信息

当前的纵向立法授权制度存在授权主体范围扩张的问题。以往位阶理论的研究路径无法解释纵向立法授权行为的性质和规范要求。纵向立法授权本质上是立法权配置的例外方式，其实质依据是国家机构的基本法律制定权，形式依据是最高国家权力机关的兜底性职权条款，主观正当性支持则源于“两个积极性”原则。权限基础、民主要求和宪法惯例表明，授权主体只能是全国人大。但是，2023年《立法法》第八十四条将授权主体扩张至全国人大常委会，这与宪法原旨不符。《立法法》应当遵循纵向立法授权主体只能是全国人大的合宪性要求，并根据规范化、体系化要求完善当前第八十四条的内容设计和结构安排。

关键词：纵向立法授权最高国家权力机关《立法法》基本法律央地关系

鉴别ASFV野毒株与CD2v缺失株抗体检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2023年第5期53卷 545-551页

作者：王新凯杨芷翊朱忠武林彦星黄超华王友令曹琛福贾伟新华南农业大学兽医学院国家非洲猪瘟区域实验室(广州)人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室农业农村部人畜共患病重点实验室农业农村部兽用疫苗创制重点实验室广东省动物源性人兽共患病防控重点实验室广东广州510642 深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 长海海关技术中心湖南长沙410004 广州达农生物科技有限公司广东广州510665

本研究通过建立两种不同包被抗原的间接ELISA方法,旨在对ASFV野毒株与CD2v缺失株进行鉴别诊断。通过优化后的EP402R基因序列进行原核表达重组蛋白,纯化后作为包被抗原建立基于CD2v重组蛋白的间接ELISA方法;参考WOAH方法对灭活后的ASFV... 详细信息

本研究通过建立两种不同包被抗原的间接ELISA方法,旨在对ASFV野毒株与CD2v缺失株进行鉴别诊断。通过优化后的EP402R基因序列进行原核表达重组蛋白,纯化后作为包被抗原建立基于CD2v重组蛋白的间接ELISA方法;参考WOAH方法对灭活后的ASFV进行纯化,并作为包被抗原建立基于全病毒蛋白的间接ELISA方法。通过对抗原包被浓度等条件的优化,建立的基于CD2v重组蛋白的间接ELISA方法灵敏性可达1∶1280,批内变异系数小于4.15%,批间变异系数小于9.48%;建立的基于ASFV全病毒蛋白的间接ELISA方法灵敏性可达1∶2560,批内变异系数小于3.83%;批间变异系数小于5.04%。这两种方法均不与PRRSV、CSFV、PCV2等常见猪病阳性血清发生反应,特异性强。在96份临床猪血清样本中检出79份阴性血清、12份野毒株感染阳性血清和5份CD2v缺失株感染的阳性血清,与商品化试剂盒符合率分别达到87.5%与97.9%。本试验基于CD2v重组蛋白和ASFV全病毒蛋白建立了两种特异性强、敏感度高的间接ELISA方法,两者结合使用可以从血清学方法上区分ASFV野毒株感染和CD2v缺失株感染的临床样本,对非洲猪瘟的流行病学调查与精准防控提供了技术支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 ELISA 鉴别诊断

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农业生物质废弃物转化功能材料的研究进展

环境科学 2024年第7期45卷 4332-4351页

作者：林彦萍任源王晓娥王佳高影王延臣杨晓东吉林工程技术师范学院生物质功能材料交叉学科研究院吉林省秸秆基功能材料重点实验室长春市黑土地保护监测中心吉林工程技术师范学院生物与食品工程学院吉林工程技术师范学院机械与车辆工程学院

农业生物质废弃物的数量正在迅速增加，导致许多环境和治理问题.因此，将农业生物质废弃物回收利用并增值应用越来越受到关注.近些年农业生物质废弃物利用和衍生功能材料的研究进展主要包括以下两个方面：(1)提取天然聚合物并增值应用；... 详细信息

农业生物质废弃物的数量正在迅速增加，导致许多环境和治理问题.因此，将农业生物质废弃物回收利用并增值应用越来越受到关注.近些年农业生物质废弃物利用和衍生功能材料的研究进展主要包括以下两个方面：(1)提取天然聚合物并增值应用；(2)直接制备新型碳基材料，包括吸附、催化、储能电极和复合功能材料等.农业生物质废弃物转化功能材料已逐步实现且应用范围广泛；未来的研究需要评估农业生物质废弃物衍生产品的质量和安全性，并开发高度可行且具有成本效益的生物质废弃物转化方法，以期实现规模化工业生产.

关键词：农业生物质废弃物回收功能材料吸附材料催化材料储能电极材料复合材料研究进展

明胶或聚多巴胺修饰的聚己内酯电纺膜对MC3T3-E1细胞生物学行为及成骨分化的影响

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实用口腔医学杂志 2024年

作者：谢泽宇林彦吟王鸿赖颖真厦门医学院口腔医学系·口腔生物材料福建省高校工程研究中心

目的:比较明胶(Gel)和聚多巴胺(PDA)分别修饰聚己内酯(PCL)后对成骨细胞生物学行为和成骨功能的差异。方法:利用静电纺丝技术制备PCL电纺膜,化学自组装技术于PCL表面分别修饰Gel、PDA,记为G/PCL和D/PCL,用扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶... 详细信息

目的:比较明胶(Gel)和聚多巴胺(PDA)分别修饰聚己内酯(PCL)后对成骨细胞生物学行为和成骨功能的差异。方法:利用静电纺丝技术制备PCL电纺膜,化学自组装技术于PCL表面分别修饰Gel、PDA,记为G/PCL和D/PCL,用扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶红外光谱(FTIR)、X线光电子能谱(XPS)、接触角测量仪等测定表征电纺膜的理化性能。通过SEM,免疫荧光染色后共聚焦显微镜观察MC3T3-E1细胞在2种材料上的粘附形态,CCK-8试剂法检测细胞1、 3、 5 d增殖情况,碱性磷酸酶、茜素红染色及实时荧光定量PCR检测成骨基因表达水平。结果:D/PCL膜表面有PDA颗粒涂覆层, FTIR和XPS显示Gel与PDA的特征峰,接触角测量G/PCL和D/PCL未见明显液滴。G/PCL组细胞密度较高,粘附形态好,伪足明显。细胞增殖结果显示G/PCL组最高(P<0.05)。碱性磷酸酶和茜素红染色中D/PCL组的颜色深于其余2组。q RT-PCR结果显示D/PCL组ALP、COL-1、RUNX2、OCN成骨相关基因表达较其余两组明显提高。结论:Gel和PDA修饰均可提升PCL支架的细胞粘附、增殖和成骨性能,Gel修饰提升增殖作用更明显,PDA修饰提升成骨作用更显著。

关键词：聚己内酯明胶多巴胺成骨