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半胱氨酰白三烯受体的基因转染及半胱氨酰白三烯受体2的信号转导

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半胱氨酰白三烯受体的基因转染及半胱氨酰白三烯受体2的信号转导

作者：林卡娜浙江大学

学位级别：硕士

半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes, CysLTs,包括LTC4、LTD4和LTE4)是花生四烯酸(arachidonic acid, AA)来源的一类重要炎症介质,通过激活其受体(CysLT受体)参与调节体内多种病理生理过程,如炎症、支气管哮喘、脑缺血再灌注损伤、... 详细信息

半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes, CysLTs,包括LTC4、LTD4和LTE4)是花生四烯酸(arachidonic acid, AA)来源的一类重要炎症介质,通过激活其受体(CysLT受体)参与调节体内多种病理生理过程,如炎症、支气管哮喘、脑缺血再灌注损伤、创伤和休克等。CysLTs主要通过CysLT1和CysLT2受体两种受体以及新发现的GPR17起作用。鉴于目前研究开发的受体拮抗剂大部分是CysLT1受体选择性拮抗剂,缺乏CysLT2受体选择性拮抗剂,所以,对CysLT1受体的功能研究较为深入,而对CysLT2受体的了解甚少。目前已克隆和鉴定两种半胱氨酰白三烯受体(CysLT1和CysLT2受体),但GPR17的研究较少,因此,构建GPR17真核表达质粒,可为研究其功能奠定基础。由于CysLT2受体与肺纤维化、动脉粥样硬化、脑缺血等疾病密切相关,因此,深入研究CysLT2受体功能特点非常必要。已有报道,CysLTs通过CysLT2受体可改变Egr-1和IL-8的表达,但是,具体通过哪条通路?Egr-1作为转录因子,对IL-8是否有调节作用?这些都不是很清楚。需要研究CysLT2受体激活后是否通过ERK1/2、Egr-1途径调节IL-8的分泌。第一部分大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定目的：构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对该受体功能进行初步研究。方法：从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD4处理后细胞内钙变化。结果：RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD4可诱导细胞内钙的增加。结论：成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞获得功能性表达。第二部分CysLT受体基因转染及CysLT2受体信号转导目的：建立稳定转染半胱氨酰白三烯(CysLT)受体的HEK293细胞,并在此基础上研究hCysLT2受体激活后的信号通路。方法：采用脂质体转染的方法将pcDNA3.1-hCysLT1、pcDNA3.1-hCysLT2、pcDNA3.1-rGPR17转到HEK293细胞中,并用600μg/ml G418筛选得到阳性单克隆细胞株。用双荧光素酶报告基因检测IL-8激活程度。同时用RT-PCR、Western blot和细胞免疫组织化学法等方法检测Egr-1的表达,用RT-PCR和ELISA检测IL-8的表达和分泌,Western blot方法检测信号通路分子的激活。结果：双荧光素酶报告基因检测表明,HEK293转染hCysLT2的细胞,与转染hCysLT1和rGPR17这两种细胞比较,LTD4能明显够激活IL-8,且LTC4的作用强于LTD4。在hCysLT2-HEK293细胞中,LTC4能够诱导细胞内Egr-1、IL-8的表达增加,刺激IL-8的分泌。ERK1/2抑制剂(U0126)可以抑制Egr-1、IL-8的表达;对Egr-1进行干扰抑制细胞内Egr-1,可抑制IL-8的表达及分泌。结论：成功构建稳定表hCysLT2和rGPR17受体的HEK293细胞株;在hCysLT2-HEK293细胞,白三烯(LTD4、LTC4)可通过ERKl/2-Egr-1通路引起IL-8的分泌。总结1.成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞获得功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础。2.成功构建稳定表达hCysLT1、hCysLT2和rGPR17受体的HEK293细胞株。3.在hCysLT2-HEK293细胞中白三烯(LTD4、LTC4)可引起IL-8的分泌,IL-8的分泌主要是通过ERK1/2-Egr-1通路。

关键词：半胱氨酰白三烯受体 HEK293细胞信号通路基因转染

葡萄籽原花青素对氯化钴诱导的视网膜神经节细胞RGC-5缺氧损伤的保护作用

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浙江大学学报（医学版） 2015年第1期44卷 24-29页

作者：林卡娜林美丽魏尔清浙江大学医学院附属第二医院药剂科浙江杭州310009 浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058

目的：探讨体外葡萄籽原花青素对氯化钴致视网膜神经节细胞RGC－5缺氧损伤模型的保护作用。方法：采用氯化钴（400μmol／L）诱导RGC－5细胞化学缺氧损伤，观察葡萄籽原花青素（40μg／mL ）对缺氧的抗损伤作用。以MTT法检测细胞存活率... 详细信息

目的：探讨体外葡萄籽原花青素对氯化钴致视网膜神经节细胞RGC－5缺氧损伤模型的保护作用。方法：采用氯化钴（400μmol／L）诱导RGC－5细胞化学缺氧损伤，观察葡萄籽原花青素（40μg／mL ）对缺氧的抗损伤作用。以MTT法检测细胞存活率；Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡情况；以H2 DCFDA荧光法检测细胞内活性氧的变化；实时定量PCR检测细胞Bcl－2、半胱酰胺天冬氨酸蛋白酶（ caspase ）9和caspase 3 mRNA水平。结果：与缺氧对照组比较，葡萄籽原花青素预处理可提高细胞存活率（ P＜0．001）、减少细胞凋亡（ P＜0．001），并减少细胞内的活性氧（ P ＜0．001）；葡萄籽原花青素还显著升高 Bcl－2基因的表达（ P ＜0．001），显著降低caspase 9和caspase 3基因的表达（ P＜0．001）。结论：葡萄籽原花青素对氯化钴诱导的视网膜神经节RGC－5细胞缺氧损伤起保护作用，其保护作用可能与细胞内活性氧减少、Bcl－2基因表达上调及casepase 9和casepase 3基因表达下调有关。

关键词：葡萄/化学原花青素类/药理学钴/药理学视网膜神经节细胞/药物作用缺氧/治疗

G蛋白偶联受体17在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用

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浙江大学学报（医学版） 2018年第5期47卷 487-492页

作者：林卡娜林美丽顾莹芬张顺国黄诗颖上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心药剂科上海200127 浙江大学医学院附属第二医院药剂科浙江杭州310009

目的:探讨G蛋白偶联受体17(GPR17)在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用。方法:采用氯化钴(400μmol/L)诱导RGC-5细胞化学缺氧损伤,观察GPR17的表达及GPR17配体的作用,并通过小干扰RNA(siRNA)降低GPR17的表达深入研究GPR17在细胞缺氧损... 详细信息

目的:探讨G蛋白偶联受体17(GPR17)在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用。方法:采用氯化钴(400μmol/L)诱导RGC-5细胞化学缺氧损伤,观察GPR17的表达及GPR17配体的作用,并通过小干扰RNA(siRNA)降低GPR17的表达深入研究GPR17在细胞缺氧损伤中的作用。MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率; RT-PCR法检测GPR17 mRNA相对表达量。结果:氯化钴处理后,细胞中GPR17 mRNA相对表达量由0.26±0.08上调至0.36±0.05(P<0.01)。与未经GPR17配体预处理的缺氧细胞比较,GPR17激动剂尿苷5'-二磷酸二钠盐、尿苷5'-二磷酸葡萄糖二钠盐、LTD4预处理细胞的存活率分别降低了29.6%、31.8%、33.9%(均P<0.01);而其拮抗剂坎格雷洛预处理细胞的存活率升高了33.2%(P<0.01)。GPR17 siRNA处理可以抑制缺氧导致的GPR17 mRNA表达上调(P<0.01),减少缺氧导致的细胞凋亡[未加siRNA、NC siRNA和GPR17siRNA组细胞的凋亡率分别为(39.73±2.06)%,(42.50±3.64)%和(24.98±2.16)%,P<0.01]。结论:GPR17介导了RGC-5细胞的缺氧损伤,抑制GPR17表达可减轻缺氧损伤。

关键词：受体, G-蛋白偶联/拮抗剂和抑制剂钴/药理学视网膜神经节细胞/药物作用细胞系缺氧/药物疗法细胞凋亡细胞, 培养的

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环孢素A所致肝损伤的基因多态性研究进展

环孢素A所致肝损伤的基因多态性研究进展

双氯芬酸钠栓剂和曲马多针剂用于儿童骨折术后镇痛的对比研究

第二十九届全国儿科药学学术年会暨第十届全国儿科药学中青年药师论文报告会

作者：于丽婷林卡娜张顺国上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心

器官移植术后肝损伤发病率高达20%-50%,且与药物暴露水平密切相关。本文总结了国内外文献中ABCB1、ABCC2、CYP3A4、CYP3A5、HLA-B*1502等基因多态性对器官移植术后服用环孢素A患者肝损伤发生影响的研究,为器官移植患者肝损害的防治和环... 详细信息

器官移植术后肝损伤发病率高达20%-50%,且与药物暴露水平密切相关。本文总结了国内外文献中ABCB1、ABCC2、CYP3A4、CYP3A5、HLA-B*1502等基因多态性对器官移植术后服用环孢素A患者肝损伤发生影响的研究,为器官移植患者肝损害的防治和环孢素的合理应用提供理论依据。

关键词：环孢素A 肝损伤基因多态性 ABCB1 ABCC2 CYP3A4 CYP3A5 HLA-B*1502

来源： cnki会议评论

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儿科药学杂志 2018年第7期24卷 13-15页

作者：郑敏之薛彬林卡娜上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心上海200127

目的:比较双氯芬酸钠栓剂和曲马多针剂用于儿童骨折术后镇痛的效果。方法:将150例骨折手术的患儿随机分为A、B两组各75例,A组术后立即使用双氯芬酸钠栓剂塞肛,B组术后静脉注射曲马多,分别记录术后1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h东安大... 详细信息

目的:比较双氯芬酸钠栓剂和曲马多针剂用于儿童骨折术后镇痛的效果。方法:将150例骨折手术的患儿随机分为A、B两组各75例,A组术后立即使用双氯芬酸钠栓剂塞肛,B组术后静脉注射曲马多,分别记录术后1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h东安大略儿童医院疼痛评分(CHEOPS)及术后不良反应发生情况。结果:A组和B组术后疼痛镇痛效果良好,在术后1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h CHEOPS比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组不良反应发生率为10.67%(8/75),B组不良反应发生率为34.67%(26/75),两组比较差异有统计学意义(χ~2=12.323,P<0.01)。两组患儿均未发现药物过敏、呼吸抑制等严重不良反应。结论:双氯芬酸钠栓剂用于骨折术后镇痛的效果与曲马多针剂无差异,但不良反应更少,用法更简单。

关键词：双氯芬酸钠栓剂曲马多针剂术后镇痛儿童

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儿科肠外营养液稳定性及影响因素研究

儿科肠外营养液稳定性及影响因素研究

大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

第二十九届全国儿科药学学术年会暨第十届全国儿科药学中青年药师论文报告会

作者：顾莹芬洪莉张顺国林卡娜上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心药剂科上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心临床营养科

目的考察儿科肠外营养液的稳定性,研究稳定性的影响因素,为提高临床应用的安全性提供可靠依据。方法随机抽取儿科肠外营养液,肉眼观察其外观,采用动态光散射法测定脂肪乳平均粒径大小(MDS),采用光阻法测定脂肪乳粒径大于5μm的乳粒百分... 详细信息

目的考察儿科肠外营养液的稳定性,研究稳定性的影响因素,为提高临床应用的安全性提供可靠依据。方法随机抽取儿科肠外营养液,肉眼观察其外观,采用动态光散射法测定脂肪乳平均粒径大小(MDS),采用光阻法测定脂肪乳粒径大于5μm的乳粒百分比(PFAT5)及颗粒分布。采用多元回归分析探讨肠外营养液稳定性的影响因素。结果 (1)长链脂肪乳组(n=13)MDS为272.88±11.13nm,PFAT5为0.004

关键词：脂肪乳注射液光阻法 PFAT5 儿科肠外营养液稳定性

来源： cnki会议评论

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浙江大学学报（医学版） 2009年第6期38卷 584-590页

作者：林卡娜方三华蔡蓓蕾王欣欣卢韵碧张纬萍魏尔清浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058

目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究。方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD4处理后细胞内钙变化。结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD4可诱导细胞内钙的增加。结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础。

关键词：半胱氨酸/遗传受体白三烯/遗传遗传载体 GPR17 真核表达载体 HEK293细胞细胞内钙

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药品生产批号及有效期标注方式标准化研究

药品生产批号及有效期标注方式标准化研究

第二十九届全国儿科药学学术年会暨第十届全国儿科药学中青年药师论文报告会

作者：林卡娜施芳红李浩黄诗颖张顺国陈敏玲上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心药剂科上海交通大学医学院附属仁济医院药剂科

目的:分析现有药品生产批号及有效期印制模式,为我国药品生产批号及有效期规范化提供参考。方法:以上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心为样本医院,统计样本医院所有药品的生产批号及有效期印制方式,并进行汇总分析。结合日常药品... 详细信息

目的:分析现有药品生产批号及有效期印制模式,为我国药品生产批号及有效期规范化提供参考。方法:以上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心为样本医院,统计样本医院所有药品的生产批号及有效期印制方式,并进行汇总分析。结合日常药品生产批号效期管理中遇到的问题,提出药品生产批号及有效期规范化改进建议。结果:样本医院药品生产批号及有效期印制方式以墨印(占44.31%)和钢印(占39.08%)为主。印制位置以包装

关键词：药品生产批号有效期标准化

来源： cnki会议评论

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医疗机构药品输入码编码现存问题研究

中国药业 2021年第10期30卷 17-19页

作者：赵薇黄诗颖李浩林卡娜郭薇薇上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心上海200127 上海交通大学中国城市治理研究院上海200030 上海交通大学中国医院发展研究院儿童健康管理研究所上海200127

目的为我国建立药品输入码编码体系提供参考。方法以上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心为样本医院,收集该院现阶段提供的药品信息和输入码信息,依据药品的通用名、商品名、俗称、主要成分、剂型、规格、药品生产企业等信息,归类... 详细信息

目的为我国建立药品输入码编码体系提供参考。方法以上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心为样本医院,收集该院现阶段提供的药品信息和输入码信息,依据药品的通用名、商品名、俗称、主要成分、剂型、规格、药品生产企业等信息,归类分析现有药品输入码编码存在的问题。结果该院共供应776种药品,其中编码结构合理的有325种(41.88%),较合理的有205种(26.42%),不规范的有197种(25.39%);编码中存在错误信息的有49种(6.31%);现有药品输入码字符长度集中在3~10个。结论医疗机构药品输入码编码不规范情况较严重,全国需规范、统一药品输入码编码体系。

关键词：医疗机构药品输入码编码信息系统药事管理