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海洋细菌Agarivorans ***105产琼胶酶的研究

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汕头海域几丁质酶产生菌的筛选及其几丁质酶编码基因研究

2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：胡忠林伯坤徐艳汕头大学生物学系

采用以琼脂为唯一碳源的选择培养基从海洋沉积物中筛选到一株产琼胶酶菌株,命名为 HZ105。菌株HZ105革兰氏染色呈阴性,菌体呈短杆状、极生鞭毛。通过16SrDNA序列分析发现,菌株HZ105与一类同样能降解琼脂Agarivorans的菌株存在很近的亲...

采用以琼脂为唯一碳源的选择培养基从海洋沉积物中筛选到一株产琼胶酶菌株,命名为 HZ105。菌株HZ105革兰氏染色呈阴性,菌体呈短杆状、极生鞭毛。通过16SrDNA序列分析发现,菌株HZ105与一类同样能降解琼脂Agarivorans的菌株存在很近的亲缘关系;同时结合HZ105的生理生化性质,该菌归属于Agarivorans sp.。2．5％NaCl、培养基起始pH8.0、

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应用与环境生物学报 2009年第4期15卷 511-514页

作者：王海东刘韫滔林伯坤宋小慧伦镜盛胡忠汕头大学生物系汕头515063 徐州生物工程高等职业学校徐州221006

在汕头海域表层沉积物中分离得到69株高产几丁质酶的菌株,对其中6株形态特征差异比较明显、几丁质酶活力比较高的菌株SWCH-1、SWCH-2、SWCH-3、SWCH-5、SWCH-6和SWCH-9进行了16S rDNA序列鉴定,发现它们分别归属于5个属,即短芽孢杆菌属(B... 详细信息

在汕头海域表层沉积物中分离得到69株高产几丁质酶的菌株,对其中6株形态特征差异比较明显、几丁质酶活力比较高的菌株SWCH-1、SWCH-2、SWCH-3、SWCH-5、SWCH-6和SWCH-9进行了16S rDNA序列鉴定,发现它们分别归属于5个属,即短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、气单胞菌属(Aeromonas)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas).采用兼并引物对6株菌几丁质酶编码基因的催化保守区片段进行了PCR扩增和序列分析,发现菌株均含有18家族几丁质酶编码基因;但是其编码的蛋白序列与NCBI收录的蛋白序列存在着差异,其中菌株SWCH-1和SWCH-3的蛋白序列与数据库中序列的相似性比较低,分别为85%和81%,菌株含有比较新的几丁质酶编码基因,其全基因序列的克隆和酶蛋白的纯化分析尚在进一步研究中.

关键词：汕头海域表层沉积物几丁质酶产生菌几丁质酶编码基因

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凡纳滨对虾血蓝蛋白的细菌凝集活性

中国水产科学 2006年第6期13卷 1006-1011页

作者：章跃陵林伯坤陈俊胡忠黄通旺严芳厦门大学生命科学学院汕头大学理学院生物学系汕头大学理学院生物学系广东汕头515063 福建厦门361005 细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

以凡纳滨对虾(Litopenaeaus vannamei)为研究对象,运用亲和层析、PAGE、SDS-PAGE、Western-blotting和细菌凝集实验等方法探索凡纳滨对虾血蓝蛋白的细菌凝集活性。结果发现,血蓝蛋白对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻酸弧菌(... 详细信息

以凡纳滨对虾(Litopenaeaus vannamei)为研究对象,运用亲和层析、PAGE、SDS-PAGE、Western-blotting和细菌凝集实验等方法探索凡纳滨对虾血蓝蛋白的细菌凝集活性。结果发现,血蓝蛋白对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻酸弧菌(Vibrio alginolyticus)、河弧菌(Vibrio fluvialis)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、嗜水气单胞菌(Aeromona hy-drophila)和金黄色葡萄球菌(Stphylococcus aureus)等6种虾类致病菌具有凝集活性,其凝集活性大小为0.27~1.08 mg/L,其中对副溶血弧菌和溶藻酸弧菌凝集活性最大,是哈维氏弧菌的4倍。在此基础之上,选取-αD-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-山梨糖、蔗糖、麦芽糖、α-D-乳糖、甘露醇和N-乙酰神经氨酸等9种糖考察其对血蓝蛋白细菌凝集活性的影响。结果显示,血蓝蛋白的细菌凝集活性可被α-D-葡萄糖和N-乙酰神经氨酸所部分抑制和全部抑制,其最低抑制浓度范围为50~100 mmol/L。由此推测,血蓝蛋白确实具有细菌凝集活性,这对进一步研究血蓝蛋白的抗菌机理具有重要意义。

关键词：凡纳滨对虾血蓝蛋白细菌凝集活性免疫

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空气理化检验课程思政教学改革设计与实践

学园 2024年第23期17卷 23-25页

作者：邵军丽郭莲仙林伯坤广东医科大学公共卫生学院广东省卫生检验与检疫实验教学示范中心广东东莞523808

空气理化检验作为卫生检验与检疫专业的核心课程,向学生传授专业知识的同时,要培养学生的思政素养。为更好地实现专业教学与思政教育的有机结合,教学团队在明确课程思政目标的基础上,不断丰富思政资源、优化教学方法、完善课程评价,并... 详细信息

空气理化检验作为卫生检验与检疫专业的核心课程,向学生传授专业知识的同时,要培养学生的思政素养。为更好地实现专业教学与思政教育的有机结合,教学团队在明确课程思政目标的基础上,不断丰富思政资源、优化教学方法、完善课程评价,并加强师资队伍建设,形成了多维度、有重点、有专业特色、有反馈的课程思政体系,确保课程思政实践工作的深入开展。经过多年的实践,取得了良好的教学效果,为培养新时代具备高尚情操、强烈社会责任感和卓越专业能力的高素质卫生检验与检疫人才做出了积极贡献,同时也为卫生检验与检疫专业的课程思政教育改革提供了有益的借鉴和参考。

关键词：空气理化检验课程思政思政模块卫生检验与检疫专业

一种具有琼胶酶活性的海洋细菌淀粉酶的表达和分析

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生物技术通报 2017年第2期33卷 125-130页

作者：林伯坤宋燕陆国永赵敏钟名其胡忠广东医科大学公共卫生学院东莞市环境医学重点实验室东莞523808 汕头大学广东省海洋生物技术重点实验室汕头515063

旨在验证海洋新种细菌ZC1中可能存在的具有琼胶酶活性的淀粉酶。对菌株ZC1中的淀粉酶编码基因amy440进行基因克隆和重组原核表达,并用活性电泳法验证重组蛋白的淀粉酶和琼胶酶活性。结果显示,基因amy440的重组蛋白在淀粉酶和琼胶酶活性... 详细信息

旨在验证海洋新种细菌ZC1中可能存在的具有琼胶酶活性的淀粉酶。对菌株ZC1中的淀粉酶编码基因amy440进行基因克隆和重组原核表达,并用活性电泳法验证重组蛋白的淀粉酶和琼胶酶活性。结果显示,基因amy440的重组蛋白在淀粉酶和琼胶酶活性电泳上均出现活性显色条带。菌株ZC1中基因amy440的编码蛋白是一种具有琼胶酶活性的淀粉酶。

关键词：琼胶酶淀粉酶多功能酶基因克隆重组表达

海洋细菌Aquimarina agarilytica ZC1中β-琼胶酶M672的重组表达与酶学性质研究

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海洋细菌Aquimarina agarilytica ZC1中β-琼胶酶M672的重组表达...

2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会

作者：林伯坤陆国永宋燕胡忠汕头大学生物系

琼胶是一种重要的海藻多糖,由琼脂糖与硫琼胶两种成分组成的混合物,在食品工业、医药工业、日用化工、生物工程等许多方面有广泛的应用,是目前世界上用途最广泛的三大海藻胶之一。琼胶酶是一类能够降解琼胶的酶,根据其裂解糖苷键的不同... 详细信息

琼胶是一种重要的海藻多糖,由琼脂糖与硫琼胶两种成分组成的混合物,在食品工业、医药工业、日用化工、生物工程等许多方面有广泛的应用,是目前世界上用途最广泛的三大海藻胶之一。琼胶酶是一类能够降解琼胶的酶,根据其裂解糖苷键的不同,主要分为α-琼胶酶与β-琼胶酶。近年来,随着人们对琼胶酶的研究日益重视,越来越多性质不同的琼胶酶被发现;对琼胶酶的结构和功能特别是降解琼脂糖的作用机制的研究也获得较大的进展。海洋细菌ZC1是从汕头南澳海域的一株紫菜上分离得到的一株能够降解

关键词：琼胶酶重组表达酶活性琼胶寡糖

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海洋微生物产琼胶酶及其编码基因的研究

海洋微生物产琼胶酶及其编码基因的研究

海洋细菌Agarivorans ***105的琼胶降解酶系

中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：林伯坤伦镜盛谢伟胡忠广东汕头大学生物学系

琼胶酶(agarase)是可以将琼胶(琼脂)降解为琼胶寡糖的酶。不同聚合度的琼胶寡糖已被发现具有越来越多的生理功能活性,生产系列琼胶寡糖也成为了琼胶酶的一个主要应用。此外,琼胶酶还可以用于琼脂糖电泳中的核酸回收、制备海藻细胞原生...

琼胶酶(agarase)是可以将琼胶(琼脂)降解为琼胶寡糖的酶。不同聚合度的琼胶寡糖已被发现具有越来越多的生理功能活性,生产系列琼胶寡糖也成为了琼胶酶的一个主要应用。此外,琼胶酶还可以用于琼脂糖电泳中的核酸回收、制备海藻细胞原生质体、筛选信号肽序列等。目前的琼胶酶主要来自海洋细菌。本文在海藻养殖区采集海底沉积物和富含琼胶的红藻样品,从中筛选得到多株产琼胶酶的海洋细菌,并主要研究了其中两株菌株 HZ105 和 ZC1。16SrDNA 序列分析结合细胞形态、部分生理生化性质表明,菌株 HZ105归属于 Agarivorans,命名为 Agarivorans ***105。16SrDNA 序列分析结合细胞形态、全细胞脂肪酸组分、碳源利用、部分生理生化性质、基因组 GC 含量等分析表明,菌株 ZC1应属于新种。此外初步优化了该两株菌的生长和产琼胶酶条件,其中菌株 HZ105在 pH7-10、NaCl 浓度为1-3 %范围内培养16h 产琼胶酶最好,说明菌株 HZ105偏好碱性环境,其所产琼胶酶也可能耐碱性。此外,菌株 HZ105的胞外琼胶酶粗酶液在室温存放2天后还能保持90.9%的酶活力。菌株 ZC1在 pH7-8、NaCl 浓度为2-3%范围内产琼胶酶最好。菌株 ZC1的营养需求比较特别,只能利用 Biolog 系统的 GN2板95种碳源中葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉、糊精等少数碳源, 但是在上述碳源培养下,菌株 ZC1亦可以产生琼胶酶,并不依赖于琼脂诱导。采用从聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶回收蛋白的方法分离纯化了菌株 HZ105的三个胞外琼胶酶,并通过 SDS-PAGE 电泳测得了其分子量54kDa、58kDa、105kDa,接着进一步运用串联质谱技术鉴定了该三个琼胶酶,发现这三个酶均为β琼胶酶,属于糖基水解酶50家族。根据琼胶酶的串联质谱结果, 通过 PCR 克隆了其中分子量为105kDa 的琼胶酶的基因,成熟蛋白编码序列长2931bp。目前正在努力实现该基因的高效重组原核表达

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生物技术通报 2015年第1期31卷 160-166页

作者：林伯坤陆国永宋燕谢锐权陈鸿霖胡忠汕头大学医学院汕头515041 汕头大学理学院生物学系汕头515063 汕头市雅壳生物科技有限公司汕头515041

通过克隆得到菌株Agarivorans ***105中3个琼胶酶基因,长度分别为2 988 bp、1 437 bp和1 362 bp,分别编码琼胶酶HZ1、HZ3和HZ4,分别属于糖苷水解酶GH50、GH118和GH16家族。将这些琼胶酶基因与质粒p ET-32(a)构建重组表达载体,转化大肠杆... 详细信息

通过克隆得到菌株Agarivorans ***105中3个琼胶酶基因,长度分别为2 988 bp、1 437 bp和1 362 bp,分别编码琼胶酶HZ1、HZ3和HZ4,分别属于糖苷水解酶GH50、GH118和GH16家族。将这些琼胶酶基因与质粒p ET-32(a)构建重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了琼胶酶基因的重组原核表达,制备了重组酶,研究了琼胶酶的酶解产物。琼胶酶HZ1降解琼脂糖以及高聚合度新琼寡糖(聚合度为8、10、12和14)得到新琼二糖和新琼四糖;琼胶酶HZ3降解琼脂糖的终产物是高聚合度新琼寡糖;琼胶酶HZ4降解琼脂糖和高聚合度新琼寡糖为新琼四糖和新琼六糖。因此推测菌株HZ105主要先用琼胶酶HZ3和HZ4降解琼脂糖为较高聚合度的新琼寡糖,随后这些寡糖被琼胶酶HZ1和HZ2(课题组先前报道的另一个琼胶酶)降解为低聚合度新琼寡糖。首次研究报道了Agarivorans属中能产生4个琼胶酶的细菌菌株及其琼胶降解酶系,丰富了有关细菌降解琼胶酶体系及其中各琼胶酶作用的研究和认识,也有利于菌株HZ105琼胶酶的有效开发应用。

关键词：琼胶酶基因克隆 Agarivorans 酶系降解产物

小规模专属在线课程和导学互动加式教学方法在《化妆品安全与检验》中的应用

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中国卫生检验杂志 2022年第6期32卷 759-762页

作者：刘欣林伯坤邵军丽李林秋广东医科大学广东东莞523808

《化妆品安全与检验》是利用化妆品检验技术及评价方法对化妆品中有毒有害成分进行检测及安全性评价一门学科,对化妆品的安全、科学使用具有重要意义[1];是卫生检验与检疫专业(本科)的主干课程[2]。该课程采用传统教学模式,存在知识点... 详细信息

《化妆品安全与检验》是利用化妆品检验技术及评价方法对化妆品中有毒有害成分进行检测及安全性评价一门学科,对化妆品的安全、科学使用具有重要意义[1];是卫生检验与检疫专业(本科)的主干课程[2]。该课程采用传统教学模式,存在知识点分散、尚未形成系统的理论体系等问题,教和学都存在很大难度[3]。因此,本教学团队利用互联网优势,采用SPOC和BOPPPS启发式线上线下混合教学模式[4],解决《化妆品安全与检验》教学过程中存在的上述问题,探索信息化有效课堂教学创新,并取得了一定效果。

关键词：小规模专属在线课程导学互动加式教学方法化妆品安全与检验思维导图