检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

成人原代肝细胞微囊化冷冻

中华肝脏病杂志 2014年第9期22卷 686-692页

作者：杭化莲禹亚彬卞建民夏强上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科 200127 南京医科大学附属南京医院普外科

目的建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人... 详细信息

目的建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个预置时间点（2、6、12、24、36、48、72 h）,在4℃人无血清培养基预置12 ～ 24 h后,使用海藻酸钠-多聚赖氨酸微球微囊化肝细胞,液氮保存.分析预置微囊冷冻组及对照组肝细胞的形态学、病理结构、白蛋白水平、尿素合成、细胞周期、肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白表达水平.各组间数据比较均采用方差分析,计数资料采用Fisher ＆#39;s exact test检验.结果在部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌流技术分离所得肝细胞活率和贴壁率分别是75.0％＆#177;4.6％和72.0％＆#177;6.0％.4℃预置12h或24h细胞的白蛋白分泌高于其他时间点,F=40.3,P值均＜0.05,差异有统计学意义.4℃预置12h或24h与立即冷冻（IC）组比较,解冻后贴壁肝细胞白蛋白和尿素合成水平明显增高,且肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白水平明显增高,此两个时间点是最适预置时间.预置微囊冷冻（PMC）组细胞与IC组比较,肝细胞形态保持的更为完整,细胞增殖周期、糖原染色及肝细胞功能特异性基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增强.PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天的白蛋白分泌分别与直接培养（DC）组分别比较,P值均＞ 0.05,差异均无统计学意义;而PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天,与IC组的白蛋白水平比较（119.2 ng/ml对比101.2 ng/ml,110.0 ng/ml对比87.6 ng/ml,98.2 ng/ml对比73.8 ng/ml）和尿素合成比较（7.83μg/ml对比6.79 μ g/ml,6.83 μ g/ml对比5.89μg/ml,5.85 μg/ml对比4.83 μg/ml）均较IC组明显增高,两组比较,F值分别为22.1、31.1,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.结论部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌注技术提供了一种创新、简单、可靠的肝细胞分离技术,人肝细胞在微囊化冷冻前4℃预置12 ～ 24h可更好地恢复形态和功能的完整性,为药理毒理学、生物人工肝以及细胞治疗的临床应用提供可能.

关键词：肝细胞细胞培养技术冷冻微囊化

HNF4α真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南京医科大学学报（自然科学版） 2012年第10期32卷 1356-1360页

作者：禹亚彬杭化莲卞建民南京医科大学附属南京医院普外科江苏南京210006

目的:构建pcDNA3.1/HNF4α重组质粒,转染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs),并检测其在HUMSCs中的表达。方法:采用基因重组技术构建载体pcDNA3.1/HNF4α,经酶切和DNA测序鉴定,通过脂质体法转染HUMSCs后,进行RT-PCR和Western blot分析,免疫荧光检测转染后1周肝特异性生化指标。结果:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1/HNF4α,转染人脐带间充质干细胞后,RT-PCR示转染后HNF4αmRNA表达,Western blot分析见HNF4α蛋白表达,免疫荧光示转染1周后HNF4α促进了HUMSCs向肝细胞方向分化。结论:成功构建真核表达载体,并在HUMSCs中正确表达,为进一步研究HNF4α在干细胞向肝细胞分化中作用提供了实验基础。

关键词：质粒构建 HNF4α 人脐带间充质干细胞肝细胞分化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

脂肪供肝对肝癌肝移植预后的作用研究

实用器官移植电子杂志 2022年第2期10卷 103-109页

作者：李哲沙朦夏雷童颖杭化莲上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科/肝移植中心上海200127

目的评估脂肪供肝对肝癌肝移植患者肿瘤复发及生存的作用影响。方法回顾性分析2015年1月1日至2018年12月31日在上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科因肝细胞癌行肝移植治疗的248例患者资料,其中供肝为非脂肪供肝有217例,脂肪供肝为3... 详细信息

目的评估脂肪供肝对肝癌肝移植患者肿瘤复发及生存的作用影响。方法回顾性分析2015年1月1日至2018年12月31日在上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科因肝细胞癌行肝移植治疗的248例患者资料,其中供肝为非脂肪供肝有217例,脂肪供肝为31例。通过收集患者病例资料和肿瘤特点,我们对总体生存率和无复发生存率进行统计分析,评估脂肪供肝对肝癌肝移植患者肿瘤复发及生存的作用影响及危险因素。结果在248例接受肝移植术的肝癌患者中,31例采用了脂肪供肝,脂肪供肝受者与非脂肪供肝受者在年龄、术前甲胎蛋白、性别、乙肝病毒感染、肝硬化、肿瘤个数、肿瘤最大直径、病理分级等方面无显著性差异。脂肪供肝受者与非脂肪供肝受者在1年、3年总体生存率和无复发生存率方面无显著性差异。进一步按照术前是否符合UCSF肝癌肝移植标准进行亚组分类后显示,符合UCSF标准的不同供肝患者总体生存率和无复发生存率无显著性差异。不符合UCSF标准的不同供肝患者的总体生存率无显著差异,但无复发生存率存在显著性差异,且脂肪供肝组的1年、3年无复发生存率较低。结论脂肪供肝受者在1、3年总体生存率和无复发生存率、术后肝功能恢复等方面均与对照组患者无显著性差异,因此轻度脂肪供肝在肝癌肝移植治疗中是安全可行的。同时我们观察到在超出UCSF标准的较大肿瘤、或多发肿瘤患者中,接受脂肪供肝患者的无复发生存率较非脂肪供肝受者低,因此超出UCSF标准的肝细胞癌患者应当尽量避免进行脂肪供肝的肝移植手术。我们期望在对脂肪供肝的脂肪程度进行分级并结合肿瘤分期,患者危险因素等进行更加细致的分层研究后,可进一步扩大供肝范围,合理化供肝分配,使更多的肝癌肝移植患者获益。

关键词：肝移植肝癌边缘性供肝脂肪供肝

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

干细胞移植的现状和展望

中华肝胆外科杂志 2013年第12期19卷 951-955页

作者：吴宁杭化莲卞建民夏强南京医科大学附属南京市医院普外科 210006 上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科

干细胞是指未分化或未充分分化、具有再生成为各种组织器官并且可以自我扩增的一类细胞。诸多研究证实，干细胞具有强大的自我更新能力、分化能力、免疫调节能力以及靶向治疗能力。这使得干细胞成为较为理想的移植来源。干细胞移植治疗... 详细信息

干细胞是指未分化或未充分分化、具有再生成为各种组织器官并且可以自我扩增的一类细胞。诸多研究证实，干细胞具有强大的自我更新能力、分化能力、免疫调节能力以及靶向治疗能力。这使得干细胞成为较为理想的移植来源。干细胞移植治疗是近年来众多学者研究的热点。干细胞移植的基本理论和临床应用研究都取得了很大的进展。由于干细胞的这种强大的能力，干细胞移植很有希望能够用于促进肝再生、抑制肝脏纤维化等一系列疾病的治疗。

关键词：干细胞移植肝细胞

不同胆道灌洗方法对大鼠肝内胆管冷保存再灌注损伤的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华实验外科杂志 2007年第7期24卷 805-807页

作者：杭化莲仇毓东毛谅朱新华丁义涛南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科 210008

目的观察不同胆道灌洗方法对大鼠移植肝肝内胆管冷保存再灌注损伤的影响。方法应用大鼠原位肝移植模型,将88只SD大鼠随机分为假手术组、胆道非灌洗组、UW液胆道灌洗组、生理盐水(NS)胆道灌洗+UW液肝内胆道灌注保存组、HTK液胆道灌洗+UW... 详细信息

目的观察不同胆道灌洗方法对大鼠移植肝肝内胆管冷保存再灌注损伤的影响。方法应用大鼠原位肝移植模型,将88只SD大鼠随机分为假手术组、胆道非灌洗组、UW液胆道灌洗组、生理盐水(NS)胆道灌洗+UW液肝内胆道灌注保存组、HTK液胆道灌洗+UW液肝内胆道灌注保存组、HTK液胆道灌洗+HTK液肝内胆道灌注保存组。移植肝置于4℃林格液中保存2 h后行原位肝移植。移植肝再灌注后24 h,检测血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷酰转肽酶(GGT)及胆汁中GGT、葡萄糖(Glu)含量。在光镜及电镜下观察肝内胆管上皮细胞的形态学变化。结果与非灌洗组比较,胆道灌洗组术后各项指标明显改善(P<0.01);HTK液及NS灌洗组较UW液灌洗组术后指标改善明显(P<0.05)。病理检测发现非灌洗组胆道损伤明显,各灌洗组胆道损伤程度明显改善,HTK液灌洗+UW或HTK液灌注组对胆管上皮细胞的损伤较轻。结论移植肝冷保存前进行胆道灌洗可以明显减轻胆管上皮细胞的损伤,4℃HTK液灌洗+4℃UW或HTK液灌注保存效果比较理想。

关键词：肝移植胆道灌洗再灌注损伤冷保存

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

成人原代肝细胞的分离、培养及冻存

世界华人消化杂志 2011年第19期19卷 2016-2021页

作者：杭化莲张磊施晓雷卞建民丁义涛南京医科大学附属南京第一医院普外科江苏省南京市210006 南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科江苏省南京市210008

目的:建立一种稳定的成人原代肝细胞分离、培养、冻存方法,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急慢性肝病以及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法:20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个不同的预... 详细信息

目的:建立一种稳定的成人原代肝细胞分离、培养、冻存方法,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急慢性肝病以及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法:20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个不同的预培养时间点(2、6、12、24、36、48和72h),分离所获肝细胞按上述不同预培养时间在4℃人无血清培养基(HepatoZYME-SFM)中培养,然后收集预培养肝细胞转移到含100mL/L胎牛血清和DMSO的HepatoZYME-SFM中,再立即放入-80℃异丙醇冷冻盒过夜,次日投入液氮.分析比较各肝细胞在解冻后细胞活力率、贴壁率、白蛋白分泌及尿素合成.结果:在部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌流技术分离所得肝细胞活率和贴壁率分别是75.0%±4.6%和72.0%±6.0%.4℃预培养12或24h被证明是最适预培养时间,这两个时间点的白蛋白分泌高于其他时间点(P<0.05).与立即冷冻组相比较,预培养12或24h肝细胞解冻后活力(61.4%±4.8%,62.0%±5.6%vs53.4%±4.2%)、贴壁率(63.2%±5.8%,62.6%±3.6%vs55.2%±4.6%)、白蛋白分泌及尿素合成水平明显提高(均P<0.05).结论:人肝细胞在冷冻前4℃预培养12-24h可以获得较理想的肝细胞,为药理毒理学、生物人工肝以及细胞治疗的临床应用提供了可能性.

关键词：人原代肝细胞肝细胞分离冷冻保存

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

肝移植治疗慢加急性肝衰竭研究进展

上海交通大学学报（医学版） 2021年第2期41卷 257-261页

作者：张天翼于也萍夏强杭化莲上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科上海200127

慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)指在慢性肝病的基础上由各种损伤因素引发的急性肝功能失代偿。该病常伴肝外器官衰竭且短期死亡率极高。目前ACLF缺乏有效的治疗手段,肝移植手术是唯一有潜在治愈概率的治疗方式。... 详细信息

慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)指在慢性肝病的基础上由各种损伤因素引发的急性肝功能失代偿。该病常伴肝外器官衰竭且短期死亡率极高。目前ACLF缺乏有效的治疗手段,肝移植手术是唯一有潜在治愈概率的治疗方式。肝移植的术前评估十分重要。我国由于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染群体基数较大,需着重考虑HBV相关ACLF的术前情况,并根据COSSH-ACLF、CLIF-ACLF等评分对患者术前情况进行评估。手术时机方面,在患者处于ACLF2级时进行肝移植也许能够提高患者生存获益,但相关结论需要进一步的研究讨论。围手术期主要以病因处理以及多器官衰竭处理为主。术中则需要注意合理安排供体修整和受体游离的时间安排。术后除了肝移植常规并发症外,还需注意感染、肝性脑病、器官衰竭等ACLF相关并发症的处理。术前与术后的器官衰竭情况均与患者长期预后相关。该文结合笔者所在科室大量ACLF肝移植实际工作经验,在查阅大量文献的基础上,就ACLF肝移植术前评估、手术时机选择、围手术期管理、术中注意事项、术后并发症以及长期预后作一综述。

关键词：慢加急性肝衰竭肝移植多器官衰竭死亡率并发症

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胆道疾病的手术并发症

国际外科学杂志 2013年第8期40卷 574-576页

作者：杭化莲夏强上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科上海200127

胆道手术并发症与胆道疾病类型、手术方法及围手术期处理关系甚为密切。随着影像学的发展、手术方法的更新、临床医师经验的积累，胆道手术并发症的发病率总体上在下降。然而实际临床诊疗过程中胆道疾病的手术并发症仍然居高不下，

关键词：胆道手术并发症胆道疾病围手术期处理手术方法临床医师疾病类型诊疗过程影像学

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

永生化人肝细胞系的建立及其生物学特性

江苏医药 2011年第22期37卷 2624-2627页

作者：杭化莲张磊施晓雷卞建民丁义涛南京医科大学附属南京第一医院普通外科 210006 南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科

目的建立一种由慢病毒载体表达人端粒酶反转录酶亚单位,具有原代肝细胞的特性的永生化肝细胞系。方法采用离体两步胶原酶灌注法无菌条件下分离肝细胞,构建慢病毒载体并包装高滴度慢病毒,肝细胞被采用表达永生化基因的慢病毒转染。通过... 详细信息

目的建立一种由慢病毒载体表达人端粒酶反转录酶亚单位,具有原代肝细胞的特性的永生化肝细胞系。方法采用离体两步胶原酶灌注法无菌条件下分离肝细胞,构建慢病毒载体并包装高滴度慢病毒,肝细胞被采用表达永生化基因的慢病毒转染。通过筛选功能基因阳性表达克隆建立永生化肝细胞系,倒置相差显微镜观察形态学变化,免疫组化检测细胞角蛋白18(CK18)表达,RT-PCR及Westernblot检测功能基因及蛋白表达。结果采用功能基因阳性表达筛选建立了永生化肝细胞系,其可连续扩增传代,具有原代肝细胞的特性并未呈现致瘤性,揭示出肝脏实质细胞的形态学特征并且表达肝细胞主要的功能基因标志。结论通过功能基因阳性表达筛选成功建立具有原代肝细胞特性的永生化肝细胞系。

关键词：人原代肝细胞永生化