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丙型肝炎病毒血清学分型方法的建立及初步临床评价

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丙型肝炎病毒血清学分型方法的建立及初步临床评价

作者：杨锡琴中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

据世界卫生组织统计，目前全球约有1.8亿人（占全球人口的3%）感染HCV，其中1.3亿人为慢性HCV携带者。根据1992～1995年第二次病毒性肝炎血清学流行病调查结果显示，我国人群抗-HCV的阳性率平均为3.2%，属于中度流行。丙型肝炎易发展成... 详细信息

据世界卫生组织统计，目前全球约有1.8亿人（占全球人口的3%）感染HCV，其中1.3亿人为慢性HCV携带者。根据1992～1995年第二次病毒性肝炎血清学流行病调查结果显示，我国人群抗-HCV的阳性率平均为3.2%，属于中度流行。丙型肝炎易发展成慢性，约75%～85%急性肝炎可发展成慢性肝炎甚至肝硬化和肝癌。感染丙型肝炎病毒的病人在20～30年内肝硬化发生率为10～25%，HCV引发的肝硬化病人10年后肝功能失代偿发生率为30%，肝癌年发生率为1%～3%，给我国的公共卫生事业带来极大的危害。 HCV为单股正链RNA病毒，属黄病毒科，于1989年首次克隆成功，基因组全长约9.5kb，含有一个约9033个核苷酸构成的开放读码框，编码结构蛋白和非结构蛋白。结构蛋白包括核心蛋白(C)，包膜蛋白gp33(E1)、gp70(E2)，非结构蛋白有p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B等。由于RNA酶缺少校对功能，整个基因组呈现高度的变异性，目前HCV至少分为6个基因型和80多种以上的亚型。在我国，主要的基因型为1b，其次为2a，还有其它少见型别。根据我国《丙型肝炎防治指南》，慢性丙型肝炎标准治疗方案是以聚乙二醇化干扰素α和利巴韦林为主的联合治疗。其中，基因型是联合治疗方案的一个重要基线预测指标，对临床用药的剂量和时间具有重要指导意义。目前常用的基因分型主要方法包括特异性引物扩增后直接测序分析、限制性片段长度酶切多肽性（RFLP）分析、特异性探针PCR法及基因芯片法等，尽管方法的特异性和灵敏度很高，但由于基因分型方法需要HCV RNA提取等过程，操作复杂，技术要求高，一般实验室难以开展，而且当HCV-RNA阴性或由于保存不当及处理过程中HCV-RNA遭到破坏时，则不能进行基因分型。为此，学者提出了HCV血清学分型，即在HCV基因型特异性抗原表位筛选的基础上，采用血清学技术，根据患者体内型特异性抗体的存在情况，进行血清学分型。目前国际上商品化的HCV血清分型试剂主要有3种，分别是Murex HCV1-6型、Chiron RIBA1-3型和日本HCV1、2血清分型试剂盒。其中美国Abbott公司的Murex HCV1-6型血清分型试剂是根据HCV-NS4区基因片段合成1-6型的型特异性多肽，采用抗原竞争免疫酶联法，鉴定与基因型相对应的不同血清型。由于受到不同国家地区及标本选择的影响，该试剂临床评价结果不尽相同，分型率大致为60%～80%，与基因分型的符合率为90%～97%;Chiron公司研制生产的RIBAHCV血清分型试纸条采用免疫胶体金技术，根据NS4区型特异性表位多肽为主，Core区型特异性表位多肽为辅进行血清学分型，其分型率能达到80%以上，特异性在90%～96%;另外日本国际试药株式会社的HCV Gr分型试剂盒是根据NS4区型特异性的抗原肽建立的血清分型试剂，仅能鉴定1、2型，分型率为89.6%，特异性为96.0%。但这些商品化的血清分型试剂在我国尚未注册，且价格昂贵，难于获得，因此，本课题旨在研究建立针对我国主要流行基因型对应血清型的分型方法，填补国内空白。本课题根据文献报道，从HCV databases数据库（http://hcv.***.gov/content/index）下载丙型肝炎病毒NS4区的氨基酸序列，通过Biosun生物信息学软件对HCV-NS4区序列的抗原表位进行预测分析，确定HCV-NS4区抗原表位主要位于1693～1708aa，C区型别特异性抗原表位位于67～81aa，并通过HCVdatabases数据库在线进行同源性比对分析，最后确定NS4区Ⅰ型氨基酸序列为AⅡPDREVLYQEFDEM，Ⅱ型氨基酸序列为VVAPDKEVLYEAFDEM，C区I型氨基酸序列为KARRPEGRTWAQPGY， Ⅱ型氨基酸序列为KDRRTTGKSWGRPGY。根据确定的型别特异性氨基酸序列，采用大肠杆菌优势密码子推断出其对应的核苷酸序列，通过重叠延伸PCR技术合成C-Ⅰ、C-Ⅱ、NS4-Ⅰ、NS4-Ⅱ、C+NS4-Ⅰ型嵌合及C+NS4-Ⅱ型嵌合基因，酶切后插入PGEX-4T-2载体中，构建出6株高效表达质粒，并采用GST琼脂糖凝胶FF柱进行纯化，获得了6个纯度均为95%以上的抗原。通过间接ELISA方法，采用50例抗-HCV抗体阳性的基因分型血清对6个抗原的抗原活性进行初步检测，结果显示：获得的3个Ⅰ型抗原C-Ⅰ、NS4-Ⅰ及C+NS4-Ⅰ嵌合与HCV-1b型血清的反应性分别为25.71%、74.28%、88.57%，与HCV-2a型血清之间的交叉反应性分别为20.00%、40.00%、66.67%，Ⅰ型抗原与1b血清之间的反应性均高于与2a血清的反应性，表现出Ⅰ型抗原特有的型别特异性;获得的3个Ⅱ型抗原C-Ⅱ、NS4-Ⅱ、及C+NS4-Ⅱ嵌合与2a型血清的反应性分别为33.33%、66.67%、

关键词：丙型肝炎病毒竞争抑制酶联免疫技术基因分型血清分型

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分层限时课上完成——改革语文作业的尝试

天津教育 1990年第9期 26-27页

作者：杨锡琴

目前,量大、质劣、“一刀切”的作业已成为学生的严重负担,障碍着他们全面和谐的发展。为此,作业必须改革。经过实验,我们对作业实行了“分层限时,课上完成”的办法。一、“分层限时,课上完成”的做法 1.满足所需,设计必做、选做题。必... 详细信息

目前,量大、质劣、“一刀切”的作业已成为学生的严重负担,障碍着他们全面和谐的发展。为此,作业必须改革。经过实验,我们对作业实行了“分层限时,课上完成”的办法。一、“分层限时,课上完成”的做法 1.满足所需,设计必做、选做题。必做题是“达标”题,即为实现教学要求必须练习的题目;选做题是“发展”题,即依据不同学生学习过程中亟需解决的问题设计两个以上的练习,或补缺,或巩固,或提高。以“注音识字,提前读写”实验教材第六册中《小音乐家扬科》为例,必做题:朗读第三段,写出段意——段的训练是本文重点训练项目。选做题:①以“我的风筝‘红金鱼’升上了蓝天”开头写一段话,写出实在的事物和联想——满足优等生提高写作能力的需要;②选抄一个比喻句,写出用什么比喻什么,把什么比作什么——巩固对

关键词：小学生选做题课余活动比喻句

抗小鼠干扰素调节因子7多克隆抗体的制备及鉴定

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军事医学 2022年第9期46卷 673-676,681页

作者：杨锡琴邹滔张耀林张纪岩军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京100850

目的获得小鼠干扰素调节因子7(IRF7)抗原,制备抗小鼠IRF7多克隆抗体并鉴定。方法构建原核表达质粒pET‐28a(+)‐IRF7,在大肠杆菌中表达IRF7,用Ni柱纯化获得抗原后,分别采用MnJ胶体锰佐剂和弗氏佐剂制备免疫原,3次免疫后心脏取血分离血清... 详细信息

目的获得小鼠干扰素调节因子7(IRF7)抗原,制备抗小鼠IRF7多克隆抗体并鉴定。方法构建原核表达质粒pET‐28a(+)‐IRF7,在大肠杆菌中表达IRF7,用Ni柱纯化获得抗原后,分别采用MnJ胶体锰佐剂和弗氏佐剂制备免疫原,3次免疫后心脏取血分离血清,采用间接ELISA法测定血清效价、纯化试剂盒纯化抗体、Western印迹和免疫沉淀对抗体生物学活性进行鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达IRF7并获得纯蛋白。两种佐剂制备的多抗血清,效价均可达到810×10^(3)倍。血清纯化后获得抗IRF7抗体,经Western印迹鉴定,两个多克隆抗体均能够特异识别真核表达的IRF7蛋白,并在免疫沉淀外源表达IRF7时,其效果明显优于商业化抗体。结论成功制备了抗IRF7多克隆抗体,为后续研究IRF7功能及作用机制奠定了基础。

关键词：干扰素调节因子7 表达纯化多克隆抗体鉴定

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2014年中考实验探究题例析

中学化学 2015年第7期 35-37页

作者：杨锡琴河北省秦皇岛市第七中学

探究实践是培养学生的创新精神和实践能力的重要途径，实验探究题型是考查学生科学探究水平的重要载体。2014全国各地中考试题，实验探究题已成为中考必考的热点题型，该题型综合考查水平一般为C级，属应用、独立操作、领悟水平，本文... 详细信息

探究实践是培养学生的创新精神和实践能力的重要途径，实验探究题型是考查学生科学探究水平的重要载体。2014全国各地中考试题，实验探究题已成为中考必考的热点题型，该题型综合考查水平一般为C级，属应用、独立操作、领悟水平，本文解析几例。例1（河北）某兴趣小组对”蜡烛燃烧的产物”进行探究。

关键词：实验探究题中考试题例析热点题型实践能力创新精神科学探究综合考查

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铁及其化合物计算题解题技巧

中学化学 2010年第4期 24-26页

作者：杨锡琴河北省秦皇岛市海港区第七中学 066000

在中学化学知识体系中“铁及其化合物”一直是一个重要组成部分，而关于这部分知识的计算题也是教学中的重点和难点，下面就“铁及其化合物的计算题的解题技巧”与大家共同分享。

关键词：解题技巧计算题化合物铁知识体系中学化学教学

强化优化专业人才队伍建设提升重大科技基础设施效能

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中国科学院院刊 2024年第4期39卷 737-747页

作者：杨锡怡张玲玲柳卸林周小宇上海科技大学创业与管理学院上海201210 中国科学院大学经济与管理学院北京100190 中国科学院大数据挖掘与知识管理重点实验室北京100190 中国科学院大学数字经济监测预测预警与政策仿真教育部哲学社会科学实验室(培育) 北京100190

重大科技基础设施(以下简称“大设施”)的建设和运行不仅涉及基础科研问题,还涉及复杂的工程和管理问题。强化优化专业人才队伍建设是全面提升大设施效能的关键因素。目前我国在大设施人员经费支持、人才考核和激励制度建设上对设施专... 详细信息

重大科技基础设施(以下简称“大设施”)的建设和运行不仅涉及基础科研问题,还涉及复杂的工程和管理问题。强化优化专业人才队伍建设是全面提升大设施效能的关键因素。目前我国在大设施人员经费支持、人才考核和激励制度建设上对设施专业工程、技术和管理人才的关注不足,严重降低了大设施专业人才队伍的稳定性和工作积极性,进而直接制约了大设施科学和社会效益的发挥。通过对我国多个大设施进行调研,梳理了在人才队伍建设方面的问题与困难。在此基础上,结合国际相关设施的先进经验,提出了3点政策建议,旨在推动我国更好地依托大设施建设世界科技强国。

关键词：重大科技基础设施人才队伍建设经费管理绩效考核

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铁及其化合物计算题解题技巧

基于改进无模型自适应控制的漂浮式海上风机转矩-变桨协调控制策略研究

中学化学教与学 2010年第6期 24-26页

作者：杨锡琴

在中学化学知识体系中“铁及其化合物”一直是一个重要组成部分，而关于这部分知识的计算题也是教学中的重点和难点，下面就“铁及其化合物的计算题的解题技巧”与大家共同分享。一、利用金属与硝酸反应特殊规律例1 某稀硝酸溶液中，加...

在中学化学知识体系中“铁及其化合物”一直是一个重要组成部分，而关于这部分知识的计算题也是教学中的重点和难点，下面就“铁及其化合物的计算题的解题技巧”与大家共同分享。一、利用金属与硝酸反应特殊规律例1 某稀硝酸溶液中，加入5.6g铁粉恰好完全反应后，放出一氧化氮气体，溶液质量增加3.2g，求溶液中含硝酸的物质的量。相关知识：铁和稀硝酸反应有如下三种情况：常规解法首先判断发生的反应，据质量守恒定律5.6g-3.2g=2.4g为NO质量（物质的量为0.08mol），假设5.6g(0.1 mol)铁粉全按①反应则生成NO 3.0g，若全按②反应则生成NO2.0g，所以为上述第三种情况①②反应均发生，可设参加①②反应的硝酸的物质的量分别为x、y，列方程x/4+3y/8=0.1 mol;x/4+2y/8=0.08 mol结组求解，则得出溶液中含硝酸的物质的量为：x+y=0.32 mol。技巧方法事实上金属和稀硝酸生成NO的反应有特殊规律，即：无论金属表现任何价态，生成NO的物质的量与参加反应的物质的量永远为1∶4的关系，据此特殊规律，不用讨论发生反应情况，只要恰好完全反应，那么很容易直接得出溶液中含硝酸的物质的量为：0.08mol×4=0.32mol，非常快捷方便。二、利用守恒关系守恒方法是化学计算中最重要的技巧方法之一，学会守恒思维不仅能够快捷解题，更能加深对相关知识原理的理解；常用的有质量守恒、元素守恒、电荷守恒、电子转移守恒等。例2 将a g Fe、Mg合金溶解在一定量的稀硝酸中，当合金完全溶解后，收集到标准状况下的NO气体b L（设的还原产物只有NO）。再向反应后的溶液中加入足量煮沸过的NaOH溶液，得到沉淀物，求沉淀物的质量。相关知识 Fe与稀硝酸反应有例1中三种情况，

关键词：

来源：人大复印报刊资料评论

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动力工程学报 2024年第4期44卷 607-615页

作者：张艳峰杨锡运王忻哲华北电力大学控制与计算机工程学院北京102206

针对漂浮式海上风机建模困难、频繁变桨造成的严重疲劳损伤等问题,提出一种基于改进无模型自适应控制的转矩-变桨协调控制策略。该策略不依赖漂浮式海上风机的数学模型,通过集成迭代学习控制策略改进无模型自适应控制方法,设计发电机电... 详细信息

针对漂浮式海上风机建模困难、频繁变桨造成的严重疲劳损伤等问题,提出一种基于改进无模型自适应控制的转矩-变桨协调控制策略。该策略不依赖漂浮式海上风机的数学模型,通过集成迭代学习控制策略改进无模型自适应控制方法,设计发电机电磁转矩和桨距角作为控制变量的多输入多输出控制器进行协调控制,允许非零度桨距角下风机用做动能缓冲,在平滑输出功率的同时减少变桨动作量。为证明所提出控制策略的有效性,在多种风场景下,与增益调度PI控制等方法进行了对比实验。结果表明:所提出的控制策略使漂浮式海上风机在满足发电功率平稳性的同时减缓了漂浮平台的俯仰运动,可有效降低漂浮式海上风机的疲劳载荷。

关键词：海上风电漂浮式海上风机无模型自适应控制转矩-变桨协调控制

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解析化学中考题启迪教学智慧

教育教学论坛 2015年第36期 251-252页

作者：杨锡琴河北省秦皇岛市第七中学河北秦皇岛066000

本文通过对中考试题中图像图表题、实验探究题等题型的解题分析,并结合自己的教学实践,阐述了在初中教学过程中对学生各种能力及答题技巧培养的点滴体会。

关键词：初中化学中考题教学智慧