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食源性甲型肝炎病毒快速检测技术研究进展

食品安全质量检测学报 2024年第6期15卷 74-82页

作者：魏莹杨艳歌赵健淞李涛李红娜孙冬梅袁飞黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院大庆163000 中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全)北京100176

病毒在食源性疾病的爆发中起着至关重要的作用,其中,甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)感染后能够致人衰弱,并引发急性肝衰竭。由于其传染迅速,影响范围广,HAV污染已经给消费者带来了严重的健康风险,且在全球范围内造成了大规模的食... 详细信息

病毒在食源性疾病的爆发中起着至关重要的作用,其中,甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)感染后能够致人衰弱,并引发急性肝衰竭。由于其传染迅速,影响范围广,HAV污染已经给消费者带来了严重的健康风险,且在全球范围内造成了大规模的食源性疫情和经济损失。因此,早期快速准确的检测HAV对于食品安全和疫情暴发的溯源至关重要,以便及时确定并召回受污染的食品,防止感染的进一步发生。传统的HAV检测方法由于检出率不高以及病毒在细胞内的培养周期长等问题,往往耗时费力,无法快速有效地对其进行检测。本文对目前报道较多的HAV快速检测技术进行了阐述和梳理,对各项技术的检出限、检测时间以及优缺点进行了比较,并对HAV快速检测技术研究进行了展望,为后续HAV的快速检测研究提供依据,也有助于进一步探讨与开发HAV快速检测的新技术,以有效防止HAV的传播与危害。

关键词：甲型肝炎病毒快速检测分子生物学免疫学

GI和GII诺如病毒ERA的可视化快速检测

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华南理工大学学报（自然科学版） 2023年第12期51卷 140-151页

作者：杨艳歌吴占文李涛王帅李红娜孙冬梅袁飞中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全) 北京100176 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163000

诺如病毒(NoV)是常见的食源性病毒之一,只要极少数量的NoV就可以导致机体感染发病,但目前还没有特效的治疗药物和疫苗,因此建立快速检测方法对食品中的NoV进行早期筛查至关重要。本研究首先通过装甲RNA技术将GB 4789.42规定的GI和GII No... 详细信息

诺如病毒(NoV)是常见的食源性病毒之一,只要极少数量的NoV就可以导致机体感染发病,但目前还没有特效的治疗药物和疫苗,因此建立快速检测方法对食品中的NoV进行早期筛查至关重要。本研究首先通过装甲RNA技术将GB 4789.42规定的GI和GII NoV的靶标基因包裹到MS2噬菌体的衣壳蛋白中,制成内含GI和GII NoV两联检测靶标的重组质粒参考样品,其次基于酶促等温扩增(ERA)技术,分别设计了GI和GII NoV基础型ERA和荧光型ERA检测的引物和探针,并通过试验筛选确定了最佳的引物探针组合。从而建立了GI和GII NoV检测ERA显色法和荧光法两种可视化方法,通过肉眼可直接观测结果。进一步对反应程序进行了优化,将ERA显色法和荧光法的扩增时间分别缩短至5min和8min。并通过对反应体系的优化,将体系减半,从而降低了检测成本。在此情况下,对核酸参考样品检测的最低灵敏度分别可达10^(-2)、10^(-3)ng/μL。最后将本研究建立的可视化快速检测方法应用于真实的GI和GIINoV粪便样本检测,并对方法的性能参数进行分析,结果显示:建立的GI和GII NoV ERA可视化快速检测方法特异性良好,对其他食源性病毒无交叉扩增,最低可检出10拷贝/μL的NoV,可以满足GI和GII NoV可视化快速筛查的需求。本研究方法的建立为NoV的快速筛查和风险监测提供了良好的技术支撑,对于控制NoV爆发、保障人民健康具有重要意义。

关键词：诺如病毒重组质粒酶促重组等温扩增可视化快速检测

重组酶聚合酶扩增、重组酶介导等温扩增及酶促重组等温扩增技术在食源性致病菌快速检测中的研究进展

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食品科学 2023年第9期44卷 297-305页

作者：王帅杨艳歌吴占文李红娜李涛孙冬梅袁飞黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163000 中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全)北京100176

随着人民生活水平的提高,食品安全问题也越来越受到社会关注,其中生物(微生物)因子是影响食品安全的最主要因素。食品安全研究领域针对生物(微生物)因子的检测技术众多,其中等温扩增技术因不需依赖复杂的仪器设备,能够快速、准确地进行... 详细信息

随着人民生活水平的提高,食品安全问题也越来越受到社会关注,其中生物(微生物)因子是影响食品安全的最主要因素。食品安全研究领域针对生物(微生物)因子的检测技术众多,其中等温扩增技术因不需依赖复杂的仪器设备,能够快速、准确地进行生物成分检测而被广泛应用,尤其是新发展起来的重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)、重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)和酶促重组等温扩增(enzymatic recombinase amplification,ERA)技术。这3种等温扩增技术相对于其他等温扩增技术具有反应条件更温和、引物设计更简单等优点,且检测原理相似,本文对这3种技术进行对比研究,从原理、概念以及近年来在食源性致病菌快速检测方面的研究应用情况进行综述,概括其在食品检测中的优势和面临的实际问题,并对未来的发展前景进行展望。

关键词：重组酶聚合酶扩增重组酶介导等温扩增酶促重组等温扩增食源性致病菌快速检测

GⅠ和GⅡ诺如病毒RAA可视化快速检测方法的建立

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中国食品学报 2023年第12期23卷 196-208页

作者：林志伟杨艳歌吴占文王帅李涛李红娜袁飞黑龙江八一农垦大学农学院黑龙江大庆163000 中国检验检疫科学研究院、国家市场监管重点实验室(食品质量与安全) 北京100176 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163000

诺如病毒(NoV)是引起全球急性肠胃炎疾病的主要病原体之一,极易爆发传播,增加医疗与经济负担。目的:通过重组酶介导等温扩增技术(RAA)开发一种新型的NoV检测方法。方法:根据ISO TS 15216-2-2013、GB 4789.42规定的GⅠ和GⅡ NoV检测靶标... 详细信息

诺如病毒(NoV)是引起全球急性肠胃炎疾病的主要病原体之一,极易爆发传播,增加医疗与经济负担。目的:通过重组酶介导等温扩增技术(RAA)开发一种新型的NoV检测方法。方法:根据ISO TS 15216-2-2013、GB 4789.42规定的GⅠ和GⅡ NoV检测靶标所对应的cDNA序列,设计并筛选最佳RAA引物及探针,确定其对其它常见食源性腹泻病毒的特异性。通过优化确定最短检测时间、反应程序以及反应体系,分析该检测体系下对NoV参考质粒和真实样本检测的灵敏度,从而建立GⅠ和GⅡ NoV RAA可视化快速检测方法。结果:所建立的RAA检测方法特异性好,与其它食源性病毒无交叉反应。在保证扩增效率的前提下,优化后的反应程序可将检测时间缩短为10 min左右,反应成本可减少三分之二。对参考质粒和真实样本检测的灵敏度分别达10^(-2)ng/μL和1 ng/μL。结论:本试验建立的两种NoV检测方法特异性强、灵敏度高,且简单、快速、可视,为今后NoV快速检测奠定良好的基础。

关键词：诺如病毒(NoV) 重组酶介导等温扩增(RAA) 可视化快速检测

RPA、RAA及ERA技术在食源性致病菌快速检测中的研究进展

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食品科学 2022年

作者：王帅杨艳歌吴占文李红娜李涛孙冬梅袁飞黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全)

随着人民生活水平的提高，食品安全问题也越来越受社会关注，其中生物（微生物）因子是影响食品安全的最主要因素。而由于等温扩增技术不需依赖复杂的仪器设备，能够快速、准确的进行生物成分检测而被广泛应用于食品安全研究，尤其是新...

随着人民生活水平的提高，食品安全问题也越来越受社会关注，其中生物（微生物）因子是影响食品安全的最主要因素。而由于等温扩增技术不需依赖复杂的仪器设备，能够快速、准确的进行生物成分检测而被广泛应用于食品安全研究，尤其是新发展起来的重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）、重组酶介导链替换核酸扩增技术（Recombinase Aided Amplification，RAA）和酶促重组等温扩增技术（Enzymatic Recombinase Amplification，ERA）。这三种等温扩增技术相对于其他等温扩增技术具有反应条件更温和，引物设计更简单等优点，且检测原理相似，因此本文对这三种技术进行了对比研究，从原理、概念以及近年来在食源性致病菌快速检测方面的研究应用情况进行综述，概括了其在食品检测中的优势和面临的实际问题，并对未来的发展前景提出了展望。

关键词：

双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒

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食品科学 2023年第18期44卷 355-363页

作者：吴占文王帅康婕李涛李红娜蔡杰张昊杨艳歌袁飞中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全)北京100176 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163000 陕西省产品质量监督检验研究院陕西西安710048

目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RTERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法:分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中,通过体外转录的方式获得高纯度NoV RNA参考样品。以设计的MS2噬菌体引物探针,与实验室前期筛选的GI、GII NoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验,并对反应体系和反应程序进行优化,分析方法的灵敏度。最后,采用建立的方法开展真实样本检测,以GB 4789.42-2016《食品微生物学检验诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比,确定方法的准确性和可行性。结果:建立MS2与GI、MS2与GII两组双重荧光RT-ERA检测方法,最佳引物及探针体积分别为4.1μL与1.8μL,检测时间可缩短至10 min左右,且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品。应用所建立的方法对29份真实样品进行检测,检测结果与GB 4789.42-2016一致。结论:本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GI和GII NoV的同时检测,且灵敏度高、准确性强,为今后NoV现场快速检测提供一定基础。

关键词：诺如病毒逆转录-酶促重组等温扩增技术双重荧光快速检测贝类

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食源性致病菌快速检测技术研究进展

食品科学 2022年第3期43卷 276-285页

作者：王丹丹刘鸣畅杨艳歌王洪越袁飞吴亚君吴淑清长春大学食品科学与工程学院吉林长春130022 中国检验检疫科学研究院北京100176

食源性致病菌是影响食品安全的主要问题之一。建立快速的食源性致病菌检测方法对控制农产品和食品从生产、加工、运输、仓储、口岸通关到销售和消费各个环节的生物性风险至关重要。由于传统病原微生物检测耗时长且操作较繁琐,不能及时... 详细信息

食源性致病菌是影响食品安全的主要问题之一。建立快速的食源性致病菌检测方法对控制农产品和食品从生产、加工、运输、仓储、口岸通关到销售和消费各个环节的生物性风险至关重要。由于传统病原微生物检测耗时长且操作较繁琐,不能及时检测出食品中的病原菌。近年来随着生物技术的快速发展以及对食品安全监测要求的提高,食源性致病菌快速检测方法的研究和建立受到高度重视,但由于检测方法种类较多,缺乏统一的评价指标,难以对不同的方法进行对比。本文以目前报道较多和实现商品化应用的快速检测方法如显色培养基技术、腺苷三磷酸发光技术、免疫学技术、分子生物学技术、生物传感器技术、流式细胞技术以及光谱技术等,从食物基质、检测限、检测时间、优缺点以及是否需要预增菌/分离/富集前处理步骤等多个角度进行横向比较,总结了各类方法的基本原理、主要技术路线和关键指标参数,以期为后续相关方法的技术评价和比对提供参考。

关键词：食品安全食源性致病菌快速检测技术

婴儿配方乳粉中食源性致病菌双重ERA快速检测方法的建立

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食品科学 2023年

作者：王帅吴占文王迎春李涛李红娜杨艳歌袁飞中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全) 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

为快速多重筛查婴儿配方乳粉中食源性致病菌的污染情况，建立克罗诺杆菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌及金黄色葡萄球菌双重酶促等温扩增(Enzymatic Recombinase Amplification，ERA)快速检测方法。首先，通过筛选确定了对4种食... 详细信息

为快速多重筛查婴儿配方乳粉中食源性致病菌的污染情况，建立克罗诺杆菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌及金黄色葡萄球菌双重酶促等温扩增(Enzymatic Recombinase Amplification，ERA)快速检测方法。首先，通过筛选确定了对4种食源性致病菌特异性好、扩增效率高的引物探针。经过优化建立了两组双重ERA检测体系可快速筛查4种食源性致病菌。该方法对沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌及金黄色葡萄球菌的最低检出限均为10-2ng/μL；对克罗诺杆菌的最低检出限为1 ng/μL。模拟污染实验显示，污染量为1 CFU/mL的样品增菌培养6 h后，可检出4种致病菌。应用该方法对市售婴儿配方乳粉样品进行检测，检测结果与行业标准规定的实时荧光PCR法一致，证实了本研究建立的双重ERA检测方法的准确性和可靠性。采用本方法仅需20 min左右即可一次性检出4种致病菌，相较于传统的“金标准”方法以及实时荧光PCR法显著提高了检测效率，对于推进食源性致病菌的快速筛查具有重要意义。

关键词：酶促等温扩增技术克罗诺杆菌沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏菌金黄色葡萄球菌

甘草提取物的生物功能评价及相关质量标志物预测

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沈阳农业大学学报 2023年第1期54卷 72-80页

作者：杨悦刘鸣畅杨艳歌吴亚君中国检验检疫科学研究院北京100176

为研究不同品种甘草提取物的护肤相关生物功能差异及其影响因素,筛选出可用于表征甘草提取物护肤活性优劣的质量标志物(Q-Markers),测定甘草提取物中总黄酮、总皂苷和总多糖,以及甘草酸、甘草苷、光甘草定、异甘草苷、甘草素、甘草次酸... 详细信息

为研究不同品种甘草提取物的护肤相关生物功能差异及其影响因素,筛选出可用于表征甘草提取物护肤活性优劣的质量标志物(Q-Markers),测定甘草提取物中总黄酮、总皂苷和总多糖,以及甘草酸、甘草苷、光甘草定、异甘草苷、甘草素、甘草次酸和异甘草素7种主要活性单体的含量,并在细胞水平对商品乌拉尔甘草、胀果甘草和光果甘草提取物的保湿及美白功效进行比较研究,进而对甘草提取物的主要活性成分含量及护肤相关生物功能进行了相关性分析。比较研究结果显示,保湿活性方面,乌拉尔甘草和胀果甘草具有显著优势,而美白活性方面,光果甘草具有显著优势。相关性分析结果显示,总多糖、甘草素和甘草次酸含量与保湿活性具有较强正相关性,光甘草定、总黄酮和异甘草苷含量与美白活性具有较强正相关性。综上所述,不同品种甘草提取物的护肤功效不尽相同,需针对不同功效需求进行区分使用。另外,筛选出总多糖、甘草素和甘草次酸可作为甘草保湿活性的潜在质量标志物,筛选出光甘草定、总黄酮和异甘草苷可作为甘草美白活性的潜在质量标志物。

关键词：甘草提取物活性成分含量保湿美白质量标志物