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鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化

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中国组织工程研究 2018年第13期22卷 2027-2032页

作者：陈俊杨自金徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科江苏省连云港市222002

背景:脐血间充质干细胞是从胎儿脐血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为类神经元的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的科学研究价值。目的:探讨... 详细信息

背景:脐血间充质干细胞是从胎儿脐血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为类神经元的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的科学研究价值。目的:探讨鼠神经生长因子在体外条件下对脐血间充质干细胞向类神经元诱导分化的作用。方法:复苏人脐血间充质干细胞,体外扩增培养并观察细胞形态特征,绘制细胞生长曲线。取第5代脐血间充质干细胞,分别加入质量浓度为50,100,150,200μg/L的鼠神经生长因子培养液作为诱导组,另设不加任何诱导剂的空白对照组,每日倒置显微镜下观察细胞形态变化并拍照记录,诱导7 d后采用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,使用Image-Pro Plus 6.0软件计算NSE、GFAP阳性表达率。结果与结论:(1)脐血间充质干细胞复苏后活性达90%以上,形态为大小不一的长梭形、纺锤形,其生长曲线呈"S"型,第3-6天为细胞对数生长期;(2)经鼠神经生长因子诱导后细胞形态出现典型类神经元样改变,而对照组细胞形态无明显变化;(3)免疫细胞化学法显示鼠神经生长因子诱导后细胞NSE、GFAP均呈阳性表达,其中100μg/L鼠神经生长因子诱导组的NSE、GFAP阳性表达率最高,相比其他鼠神经生长因子诱导组差异有显著性意义(P<0.05),而对照组无NSE、GFAP阳性细胞;(4)结果表明,鼠神经生长因子在体外能够诱导脐血间充质干细胞分化为类神经元,100μg/L为较合适的诱导质量浓度。

关键词：干细胞鼠神经生长因子脐血间充质干细胞神经元诱导分化神经元特异性烯醇化酶胶质纤维酸性蛋白

神经营养素-3体外诱导新生鼠海马神经干细胞定向分化

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实用儿科临床杂志 2007年第24期22卷 1855-1856,1883页

作者：杨自金连云港市第一人民医院儿科江苏连云港222002

目的探讨神经营养素-3(NT-3)对神经干细胞(NSCs)定向分化的影响。方法取24h龄新生鼠海马组织,以无血清培养基获得NSCs,随即分为实验和对照组。实验组用基础培养液加50g/L胎牛血清(FBS)和20μg/LNT-3诱导其分化;对照组用基础培养液加50g/... 详细信息

目的探讨神经营养素-3(NT-3)对神经干细胞(NSCs)定向分化的影响。方法取24h龄新生鼠海马组织,以无血清培养基获得NSCs,随即分为实验和对照组。实验组用基础培养液加50g/L胎牛血清(FBS)和20μg/LNT-3诱导其分化;对照组用基础培养液加50g/LFBS。用免疫荧光及流式细胞仪法检测分化得到神经元特异性烯醇化酶(NSE)神经元及阳性神经元比例。结果随着分化培养时间延长,二组NSE阳性神经元渐增加;实验组NSE阳性神经元的比例在分化培养第3天达到高峰,约63%,对照组仅29%,二组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论NT-3体外促进NSCs向神经元定向分化,并可提高其分化比例。

关键词：神经干细胞神经元神经营养素-3 分化

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重症手足口病33例

实用儿科临床杂志 2011年第22期26卷 1742-1743页

作者：杨自金连云港市第一人民医院儿科江苏连云港222002

目的探讨重症手足口病(HFMD)的临床特点、治疗方法及预后。方法收集33例重症HFMD患儿的临床资料,并对其临床特点、治疗方法和转归等进行分析。结果 33例中男25例,女8例;3岁以下占93.93%。中枢神经系统损害发生在病程第3天(中位数)。33... 详细信息

目的探讨重症手足口病(HFMD)的临床特点、治疗方法及预后。方法收集33例重症HFMD患儿的临床资料,并对其临床特点、治疗方法和转归等进行分析。结果 33例中男25例,女8例;3岁以下占93.93%。中枢神经系统损害发生在病程第3天(中位数)。33例均出现发热、皮疹,26例有易惊、肢体抖动、惊恐样表情,10例出现呕吐,6例出现走路不稳、肢体无力,6例出现抽搐,3例出现嗜睡,3例出现肢体迟缓性瘫痪,2例出现呼吸不规则、抽泣样呼吸,2例出现昏迷,1例出现感染性休克。并病毒性脑炎27例,脑膜炎、脑脊髓炎、脑干脑炎各2例。入院后予甲泼尼龙、丙种球蛋白、降颅压、抗感染等对症治疗。经治疗后死亡1例,死于神经源性肺水肿;3例出院时留有神经系统损伤后遗症;余29例治愈出院。结论 HFMD并中枢神经系统感染主要发生在3岁以下幼儿,早发现、早治疗大多预后较好,并发脑干脑炎、神经源性肺水肿、脑脊髓炎病情重,可导致死亡或留有后遗症。

关键词：手足口病脑炎脑脊髓炎肠道病毒

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托吡酯添加治疗难治性癫的疗效

实用儿科临床杂志 2010年第18期25卷 1436-1437页

作者：杨自金连云港市第一人民医院儿科江苏连云港222000

目的研究托吡酯添加治疗难治性癫的疗效和安全性。方法以2008年8月-2009年11月在本院儿科就诊的31例难治性癫患儿为研究对象,原来托吡酯添加治疗使用的抗癫药物种类和剂量不变,采用托吡酯添加治疗,初始剂量从0.5～1.***.kg-1.d-1... 详细信息

目的研究托吡酯添加治疗难治性癫的疗效和安全性。方法以2008年8月-2009年11月在本院儿科就诊的31例难治性癫患儿为研究对象,原来托吡酯添加治疗使用的抗癫药物种类和剂量不变,采用托吡酯添加治疗,初始剂量从0.5～1.***.kg-1.d-1开始,每周增加0.5～1.0 mg.kg-1,目标剂量为4.0～8.0 mg.kg-1.d-1,根据癫控制情况调整托吡酯用量。随访3个月。结果患儿治疗12周后,总有效率为84.0%,其中控制5例,显效14例,有效7例,无效5例,无恶化病例。治疗8周、12周,总有效率与治疗4周比较明显提高(Pa<0.05)。发作类型中,治疗12周后简单局限性癫总有效率为75.0%,复杂局限性癫为88.8%,全面性发作为92.3%,继发性癫为50.0%。9例患儿在加量期出现不良反应,但不需特殊处理,除6例体质量下降外,其他症状自行消失。结论托吡酯添加治疗难治性癫是安全有效的。

关键词：癫癎,难治性托吡酯儿童

鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化

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中国组织工程研究 2018年第17期22卷 2692-2698页

作者：陈俊杨自金李红梅徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科江苏省连云港市222002

背景:作者在前期研究中发现鼠神经生长因子具备诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化的能力,为进一步探讨提高诱导效率的方法,拟尝试使用多种细胞生长因子进行联合诱导。目的:探讨鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子在体外条件下... 详细信息

背景:作者在前期研究中发现鼠神经生长因子具备诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化的能力,为进一步探讨提高诱导效率的方法,拟尝试使用多种细胞生长因子进行联合诱导。目的:探讨鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子在体外条件下对人脐血间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化的作用。方法:复苏获赠的原代人脐血间充质干细胞并进行体外扩增培养,取第5代脐血间充质干细胞分为5组,其中前4组为预诱导组,在加入成纤维生长因子和表皮生长因子预诱导24 h后,再用鼠神经生长因子、脑源性神经营养因子及二者联合对脐血间充质干细胞进行诱导,对照组仅使用等量细胞培养基培养;最后一组为非预诱导组,先用细胞培养基培养24 h后,再加入鼠神经生长因子和脑源性神经营养因子进行联合诱导。倒置显微镜下观察诱导后细胞形态变化,并用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,实时荧光定量PCR技术检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白在m RNA水平的相对表达量。结果与结论:(1)脐血间充质干细胞形态为大小不一的长梭形、纺锤形,经诱导后细胞胞体逐渐回缩变圆,并向一侧或多侧发出突起,呈现出神经元样细胞改变;(2)免疫细胞化学及实时荧光定量PCR结果显示各实验组细胞均阳性表达神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白,联合诱导组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性率及二者m RNA表达量均高于单独诱导组、对照组以及非预诱导组;(3)鼠神经生长因子和脑源性神经营养因子均能诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化,二者在诱导过程中具有协同作用,联合使用能够有效提高诱导效率。

关键词：胎血间质干细胞神经生长因子脑源性神经营养因子细胞分化神经元组织工程干细胞脐血间充质干细胞鼠神经生长因子神经元样细胞诱导分化

神经营养素3及神经干细胞联合移植治疗实验性大鼠缺氧缺血性脑损伤

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中华儿科杂志 2007年第3期45卷 212-216页

作者：王丽敏王海燕杨自金朱晓峰原德新佳木斯大学附属第一医院儿科 154003 山东省菏泽医学专科学校儿科教研室佳木斯大学神经科学研究所佳木斯大学组胚教研室 154003

目的研究神经营养素3(NT-3)及神经干细胞联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠神经功能恢复及神经干细胞分化为神经元的比例的影响,并探讨其可能机制。方法取新出生的24 h 内的 wistar 大鼠,从海马中分离神经细胞,进行培养、鉴定。用出... 详细信息

目的研究神经营养素3(NT-3)及神经干细胞联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠神经功能恢复及神经干细胞分化为神经元的比例的影响,并探讨其可能机制。方法取新出生的24 h 内的 wistar 大鼠,从海马中分离神经细胞,进行培养、鉴定。用出生7 d 的 wistar 新生大鼠制作缺氧缺血性脑损伤的动物模型,模型成功后7 d 进行移植。将实验大鼠随机分为5组:正常组、模型组、假移植组、神经干细胞移植组、NT-3及神经干细胞联合移植组(简称联合移植组),每组12只。移植部位为损伤同侧侧脑室。移植后4周进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查。结果从新生鼠海马中成功培养出神经干细胞,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球,绝大多数的细胞表达神经干细胞的标志物神经巢蛋白(nestin)。说明培养的细胞大部分为神经干细胞,细胞纯度达90%以上。Y 迷宫实验结果:神经干细胞移植组平均(163±11.6)次学会,记忆的平均正确率为(50±13.3)%;神经干细胞(NSC)+NT-3联合移植组平均(117.27±11.04)次学会,记忆的正确率平均(63±11.2)%。握持牵引实验结果:神经干细胞移植组平均(30.1±11.8)s,右下肢能放置的占40%;NSC+NT-3联合移植组平均(40.64±10.6)s,右下肢能放置的占72.73%。斜坡实验结果:神经干细胞移植组平均(20.3±8.25);NSC+NT-3联合移植组平均(12.9±5.15)s。说明接受 NT-3及神经干细胞移植组大鼠的学习能力、记忆能力及肢体功能与单纯神经干细胞移植组相比有明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。其神经干细胞分化成神经元的比例(50%)与单纯神经干细胞移植组(30%)比有明显增多。结论 NT-3与神经干细胞联合移植能提高缺氧缺血性脑损伤大鼠的学习、记忆能力和肢体功能,并能提高神经干细胞向神经元转化的比率,NT-3和神经干细胞联合移植较单独神经干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤有更好的治疗效果。

关键词：神经营养素3 神经干细胞移植缺氧缺血性脑损伤

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新生大鼠海马神经干细胞的无血清培养及鉴定

实用儿科临床杂志 2007年第14期22卷 1090-1091,1093页

作者：杨自金王海燕王丽敏连云港市第一人民医院儿科江苏连云港222002 佳木斯大学附属第一医院儿科黑龙江佳木斯154003

目的探讨新生大鼠海马神经干细胞无血清培养的最佳方法,观察神经干细胞的生长、增殖及分化的特点。方法分离新生24h大鼠的海马组织,分别采用含碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、及bFGF+EGF的无血清条件培养基进行悬浮培养... 详细信息

目的探讨新生大鼠海马神经干细胞无血清培养的最佳方法,观察神经干细胞的生长、增殖及分化的特点。方法分离新生24h大鼠的海马组织,分别采用含碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、及bFGF+EGF的无血清条件培养基进行悬浮培养,采用神经巢蛋白(nestin)免疫荧光染色方法鉴定神经干细胞,通过胎牛血清诱导分化,鉴定分化细胞,进一步证实神经干细胞。结果bFGF+EGF能更好的诱导神经干细胞增殖,培养细胞呈nestin抗原阳性,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性抗原。结论bFGF+EGF的无血清培养基可用于培养大鼠海马神经干细胞。

关键词：神经干细胞细胞培养增殖分化