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浙江省龙游县鼠形动物中5种病原的自然感染情况调查

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疾病监测 2021年第9期36卷 910-914页

作者：李婵徐芳杨章女张云朱函坪浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051 南京军区军事医学研究所江苏南京210002

目的了解浙江省衢州市龙游县鼠形动物中5种病原的自然感染情况,为预防和控制相关疾病提供依据。方法在龙游县野外捕获鼠形动物,解剖获取肺和肝脏组织。对鼠肺进行冷冻切片,用冷丙酮固定切片后用直接免疫荧光法检测汉坦病毒的携带情况;... 详细信息

目的了解浙江省衢州市龙游县鼠形动物中5种病原的自然感染情况,为预防和控制相关疾病提供依据。方法在龙游县野外捕获鼠形动物,解剖获取肺和肝脏组织。对鼠肺进行冷冻切片,用冷丙酮固定切片后用直接免疫荧光法检测汉坦病毒的携带情况;提取鼠肝DNA,利用特异性引物进行PCR扩增,检测伯氏螺旋体、查菲埃立克体、无形体、鼠疫耶尔森菌。结果2017年捕获的黑线姬鼠、针毛鼠、社鼠、臭鼩鼱、黄胸鼠和褐家鼠(共6种88只)中,黑线姬鼠为优势鼠种(88.64%),其次为针毛鼠(5.00%),其他种数量很少。2019年捕获的黑线姬鼠、黄胸鼠、针毛鼠、褐家鼠、臭鼩鼱和巢鼠中(共6种103只),黑线姬鼠也为优势鼠种(84.47%)。病原检测结果发现,在2017、2019年捕获的黑线姬鼠中,汉坦病毒抗原的阳性率分别为3.85%和4.60%,伯氏螺旋体核酸阳性率分别为1.28%和2.30%,查菲埃立克体核酸阳性率分别为6.41%和5.75%,无形体的核酸阳性率分别为1.28%和2.30%,鼠疫耶尔森菌均阴性。其余鼠种均未检出相关病原。结论龙游县黑线姬鼠数量多,是多种重要传染病的潜在传染源,需重点监测,扩大相关病原谱的调查和监测,为自然疫源性疾病的预防控制提供依据。

关键词：鼠形动物自然感染自然疫源性疾病

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蚊虫生物学及其防治

城市害虫防治 2006年第3期 7-13页

作者：莫建初杨章女浙江大学城市昆虫学研究中心杭州310029

拿蚊子同人体相比，谁都知道蚊子是微小的。可联合国世界卫生组织1998年7月大声疾呼：蚊子是威胁人类健康的头号公敌，切不可掉以轻心。

关键词：生物学防治蚊虫世界卫生组织人类健康蚊子联合国

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蚁虫生物学及其防治

城市害虫防治 2005年第3期 3-9页

作者：莫建初杨章女浙江大学城市昆虫学研究中心杭州310029

拿蚊子同人体相比，谁都知道蚊子是微小的。可联合国世界卫生组织1998年7月大声疾呼：蚊子是威胁人类健康的头号公敌，切不可掉以轻心。

关键词：生物学防治世界卫生组织人类健康蚊子联合国

钩端螺旋体磷酸二酯酶基因LARS06960的鉴定及其相关生物学功能初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第8期44卷 672-679页

作者：姚文武杨章女王凌波吴卓颖胡玮琳浙江省疾病预防控制中心微生物检验所杭州310051 浙江省微生物生化与代谢工程重点实验室杭州310058

目的确定钩端螺旋体LARS06960基因产物蛋白具有磷酸二酯酶(PDE)活性,确定该酶降解的底物细菌二核苷酸可激活巨噬细胞固有免疫因子。方法PCR扩增钩端螺旋体56601株LARS06960基因并构建原核表达系统。通过Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的... 详细信息

目的确定钩端螺旋体LARS06960基因产物蛋白具有磷酸二酯酶(PDE)活性,确定该酶降解的底物细菌二核苷酸可激活巨噬细胞固有免疫因子。方法PCR扩增钩端螺旋体56601株LARS06960基因并构建原核表达系统。通过Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rPDE。高效液相色谱法(HPLC)检测rPDE降解细菌二核苷酸c-di-AMP或5′-pApA底物为AMP的活性。荧光定量RT-PCR法检测钩端螺旋体感染巨噬细胞过程中钩体LARS06960基因和细胞固有免疫相关因子基因mRNA水平变化。采用荧光定量RT-PCR法和ELISA法检测细菌二核苷酸影响细胞固有免疫相关因子表达及分泌水平变化。结果成功构建钩端螺旋体LARS06960基因原核表达系统,纯化的rPDE具有体外降解5′-pApA和c-di-AMP为AMP的功能。钩端螺旋体感染巨噬细胞过程中,钩体LARS06960基因表达水平显著下降,巨噬细胞IFN-β、TNF-α、IL-6以及IL-1β编码基因表达水平均显著升高。LARS06960编码的PDE酶降解底物细菌二核苷酸可诱导IFN-β和IL-6基因mRNA表达水平或蛋白分泌水平的升高。结论LARS06960基因产物PDE具有PDE活性,其水解底物细菌二核苷酸激活巨噬细胞固有免疫应答。

关键词：钩端螺旋体磷酸二酯酶固有免疫

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百日咳病原新认识及其抗感染策略

临床儿科杂志 2024年第6期42卷 480-484,508页

作者：华春珍王传清杨章女黄丽素浙江大学医学院附属儿童医院感染科国家儿童健康与疾病临床研究中心浙江杭州310052 复旦大学附属儿科医院医院感染控制科临床检验中心细菌室上海201102 浙江省疾病预防控制中心微生物检验所浙江杭州310052

百日咳是由百日咳鲍特菌感染引起的急性呼吸道传染病,本病历史悠久,任何年龄段的人群均可感染发病。百日咳再现已成为引起高度关注的全球性问题,包括我国在内。2022年起至今,我国报告百日咳病例数上升迅猛。当前百日咳鲍特菌流行株的主... 详细信息

百日咳是由百日咳鲍特菌感染引起的急性呼吸道传染病,本病历史悠久,任何年龄段的人群均可感染发病。百日咳再现已成为引起高度关注的全球性问题,包括我国在内。2022年起至今,我国报告百日咳病例数上升迅猛。当前百日咳鲍特菌流行株的主要抗原(百日咳毒素)的基因型已发生改变,相应抗原与疫苗株不同而产生免疫逃逸,是当前百日咳再现的重要原因之一。百日咳鲍特菌目前普遍对大环内酯类抗生素耐药是临床治疗失败的重要原因,因此不再推荐其作为百日咳抗感染治疗的首选用药。2月龄以上无磺胺禁忌症的患儿,百日咳卡他期和痉咳期推荐复方磺胺甲噁唑口服作为首选抗感染方案;对2月龄以下或症状危重的患儿,推荐哌拉西林或头孢哌酮-舒巴坦静滴治疗。改良或研发与流行株抗原一致的新一代百日咳疫苗将是提升易感人群免疫保护力、控制本病流行的长远策略。

关键词：百日咳再现免疫逃逸大环内酯类抗生素疫苗

亚非马蜂溶血肽基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合在昆虫细胞中的表达

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农业生物技术学报 2006年第1期14卷 102-106+152页

作者：施婉君杨章女张传溪程家安上海201101 浙江大学应用昆虫学研究所杭州310029上海交通大学资源环境科学系浙江大学应用昆虫学研究所

构建亚非马蜂(Polisteshebraeus)溶血肽基因重组转移载体pBacHT-GFPTPhMT,转化含穿梭载体Bacmid的受体菌Escherichiacoli(DH10Bac)中,得重组穿梭载体Bacmid-GFPTPhM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾(Trichoplusiani)细胞系Tn。SDS-PAGE分析表明,感染Bacmid-GFPTPhM的Tn-5B1-4细胞的表达产物在约为34kD处出现特异性条带,表达量约占细胞总蛋白的3%。Westernblot显示表达产物具有良好的免疫活性。感染Bacmid-GFPTPhM的细胞表达时相动态分析进一步表明,与增强型绿色荧光基因融合的亚非马蜂溶血肽基因的重组病毒已在昆虫细胞中进行了成功地表达,感染后72h表达量可达最高水平。

关键词：亚非马蜂蜂毒溶血肽增强型绿色荧光蛋白基因表达

汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用

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中华流行病学杂志 2017年第4期38卷 528-530页

作者：姚苹苹徐芳孙一晟杨章女张云岳明朱函坪浙江省疾病预防控制中心浙江省肾综合征出血热疫苗研究重点实验室杭州310051 南京军区军事医学研究所 210002 南京医科大学第一附属医院 210029

目的应用基因工程技术，在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因，表达产物作为诊断抗原，用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因，基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧... 详细信息

目的应用基因工程技术，在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因，表达产物作为诊断抗原，用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因，基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧光法了解重组NP（rNP）表达及与特异性免疫反应情况，SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况。建立免疫印迹法检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清样品，并与常规间接免疫荧光法进行比较。结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP，SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带，此抗原仅与HFRS患者血清起反应。经双盲试验，两法检测血清143份，HFRS阳性符合率为97.67%。结论成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统。所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。

关键词：汉坦病毒 N蛋白重组表达杆状病毒表达系统免疫印迹法

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蚊虫生物学及其防治技术

城市害虫防治 2005年第1期 7-13页

作者：杨章女莫建初傅桂明浙江大学城市昆虫学研究中心杭州310029 浙江省疾病预防控制中心消毒杀虫所杭州310009

拿蚊虫同人体相比，谁都知道蚊虫是微小的。可联合国世界卫生组织1998年7月大声疾呼：蚊虫是威胁人类健康的头号公敌，切不可掉以轻心。

关键词：蚊虫生物学防治技术疟疾丝虫病蜕皮激素驱蚊药丙酮沉淀法

杆状病毒为载体的重组汉坦病毒S基因在Vero—E6细胞中的表达及其生物活性

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中华实验和临床病毒学杂志 2011年第4期25卷 280-282页

作者：朱函坪姚苹苹王洁杨章女徐芳谢荣辉张云朱智勇浙江省疾病预防控制中心杭州310051 南京医科大学康达学院

目的将汉坦病毒HV Z10株S基因（HV5）插入已含CMV基因的杆状病毒转移载体pDual-CMV，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS，转化Vero-E6细胞，用于血清汉坦病毒抗体的检测。方法以pEGFP-N1质粒为模板，通过PCR扩增CMV基因序列，酶切插... 详细信息

目的将汉坦病毒HV Z10株S基因（HV5）插入已含CMV基因的杆状病毒转移载体pDual-CMV，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS，转化Vero-E6细胞，用于血清汉坦病毒抗体的检测。方法以pEGFP-N1质粒为模板，通过PCR扩增CMV基因序列，酶切插入杆状病毒转移载体pFastTBacDUAL,构建含CMV的转移载体pDual-CMV。酶切含HV S基因的pMD19-Z10S质粒，插入pDual-CMV，构建pDual-CMV-HVS，转化感受态DH10BAC，筛选并取重组杆状病毒基因，转染TN细胞，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS。BAC-pDual-CMV-HVS转化Vero-E6细胞，制备抗原片，用于血清中抗汉坦病毒抗体的检测并与传统方法进行比较。结果经测序成功构建重组杆状病毒转移载体pDual-CMV-HVS，按杆状病毒表达系统操作方法，成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS，转化VeroE6细胞，经汉坦病毒抗体阳性血清检测，HV S基因在细胞中得到表达，与传统方法一致。结论成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS重组杆状病毒，可用于汉坦病毒抗原片的制备，该抗原片制备方法简便、无需特殊设备，可用汉坦病毒抗体的检测。

关键词：汉坦病毒属病毒蛋白质类基因表达调控荧光抗体技术间接