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维生素D受体在SD大鼠原代脂肪细胞分化过程中的表达规律及脂质沉积研究

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维生素D受体在SD大鼠原代脂肪细胞分化过程中的表达规律及脂质沉...

作者：杨祎琦陕西理工学院

学位级别：硕士

维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)属于核受体(类固醇激素/甲状腺激素受体)超家族成员,以核受体(Nuclear VDR,nVDR)和膜受体(Membranae VDR,mVDR)两种形式存在,nVDR分子量大约50kDa左右,mVDR分子量大约60kDa左右,在体内主要介导维生... 详细信息

维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)属于核受体(类固醇激素/甲状腺激素受体)超家族成员,以核受体(Nuclear VDR,nVDR)和膜受体(Membranae VDR,mVDR)两种形式存在,nVDR分子量大约50kDa左右,mVDR分子量大约60kDa左右,在体内主要介导维生素D的细胞作用,被激活的VDR在细胞核内与视黄酸X受体(retinoid X receptor,RXR)形成异源二聚体,结合于靶基因启动子区的维生素D反应元件上,通过直接或间接方式激活下游靶基因的表达,以介导调节体内钙磷平衡、骨盐沉积、细胞的增殖分化及免疫系统功能等生理过程。然而对于VDR是否在脂肪细胞中表达至今在学术界尚存在较大争议。一方面1,25(OH)2D对脂肪细胞分化的作用存在分歧;另一方面,1,25(OH)2D还会影响脂肪因子的分泌,增加了1,25(OH)2D与脂肪组织互作的复杂性。有研究表明,超表达VDR会抑制3T3L1前体脂肪细胞的分化;但在全身性敲除VDR的小鼠体内却表现出体脂减少的现象。因此,有关VDR对脂肪细胞分化的作用及其方式,仍存有争论,需要进一步验证。本研究以体外培养的SD大鼠原代脂肪细胞为研究材料,采用荧光免疫组化法检测VDR及脂质沉积在脂肪细胞分化过程中的变化规律,利用qPCR和Western Blot方法研究原代脂肪细胞中VDR的作用。为1,25(OH)2D预防和治疗肥胖提供理论依据,对机体的代谢健康有重要意义。主要实验结果如下:(1)VDR在SD大鼠脂肪组织及前体脂肪细胞的细胞核中表达;(2)在SD大鼠前体脂肪细胞分化过程中VDR表达规律为先降低后升高,在细胞单层汇合并分化至第8天时,VDR基因表达量最低,蛋白表达量最低,后又有所升高;(3)细胞中脂滴随分化时间的推移逐渐增加,成脂基因PPAR?在分化16天时与VDR表达量差异极显著,具有统计学意义(p<0.01)。(4)VDR有可能参与前体脂肪细胞分化过程,并且当细胞中脂滴达到阈值后会反馈调节PPAR?基因的表达,其作为一个潜在的调节因子来抑制细胞继续成脂,但却并不是通过影响PPAR?基因mRNA降解而实现的,其可能直接或间接作用于PPAR?基因的启动子区而发挥一定的转绿调控作用。

关键词：维生素D受体脂肪细胞 PPAR? 免疫荧光染色 Bodipy

SD大鼠维生素D受体真核过表达载体构建及功能分析

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生物技术 2016年第2期26卷 108-112,151页

作者：杨祎琦程佳陕西理工学院维生素D生理与应用研究所陕西汉中723000

[目的]构建SD大鼠维生素D受体真核过表达载体并将其在癌细胞中表达及分析不同癌细胞VDR表达的差异性。[方法]通过基因工程方法从p UC18-rat-VDR质粒载体上通过PCR扩增得到了大鼠VDR片段全长,并构建CD513-VDR-EGFP真核超表达载体;经常规... 详细信息

[目的]构建SD大鼠维生素D受体真核过表达载体并将其在癌细胞中表达及分析不同癌细胞VDR表达的差异性。[方法]通过基因工程方法从p UC18-rat-VDR质粒载体上通过PCR扩增得到了大鼠VDR片段全长,并构建CD513-VDR-EGFP真核超表达载体;经常规PCR、XbaⅠ和Bam HⅠ双酶切及测序鉴定后提取重组质粒CD513-VDR-EGFP并进行细胞转染。利用Western Blot和q PCR方法分析蛋白和基因表达差异。[结果]荧光显微镜下可见单独转染CD513-EGFP和单独转染CD513-VDR-EGFP的293T细胞和He La细胞表达强烈的绿色荧光蛋白,并检测到蛋白及基因表达差异性的存在。[结论]成功构建重组质粒CD513-VDR-EGFP并在目的细胞中过表达(P0.05)。

关键词：维生素D 维生素D受体超表达载体 CD513 癌细胞

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鸡蛋清溶菌酶的提取纯化及抗菌活性的检测

黑龙江畜牧兽医 2017年第5期 135-137+294页

作者：雒志恒杨祎琦王永吉陕西理工大学维生素D生理与应用研究所

为了探索鸡蛋清中溶菌酶的提取、纯化方法及抗菌活性检测方法,试验首先采用724型弱酸性阳离子交换树脂对鸡蛋清溶菌酶进行提取,再通过（NH4）2SO4盐析、透析、调整透析液p H值等步骤对溶菌酶进行纯化,最后经真空冷冻干燥,得到白色溶菌... 详细信息

为了探索鸡蛋清中溶菌酶的提取、纯化方法及抗菌活性检测方法,试验首先采用724型弱酸性阳离子交换树脂对鸡蛋清溶菌酶进行提取,再通过（NH4）2SO4盐析、透析、调整透析液p H值等步骤对溶菌酶进行纯化,最后经真空冷冻干燥,得到白色溶菌酶成品;进一步将提纯后的样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行纯度鉴定,并进行了抗菌活性检测。结果表明:经离子交换层析和盐析纯化后,样品电泳条带清晰,抑菌圈清晰可见,通过该提取方法提纯的溶菌酶纯度达到电泳纯,且抑菌作用较好,特别是针对枯草芽孢杆菌具有显著的抑菌作用。

关键词：蛋清溶菌酶盐析 (NH4)2SO4 阳离子交换层析抗菌活性检测

维生素D受体在体外培养SD大鼠脂肪细胞中的表达

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动物医学进展 2017年第2期38卷 40-45页

作者：程佳杨祎琦庞田田陕西理工大学维生素D生理与应用研究所陕西汉中723000

为了探索维生素D受体(VDR)在SD大鼠脂肪细胞分化过程中的表达规律,采用Ⅱ型胶原酶消化法进行SD大鼠脂肪细胞的分离培养,并将其诱导分化为成熟的脂肪细胞,分别在细胞生长至单层汇合后的第0、4、8、12、16天收集细胞样品。对VDR和脂滴进... 详细信息

为了探索维生素D受体(VDR)在SD大鼠脂肪细胞分化过程中的表达规律,采用Ⅱ型胶原酶消化法进行SD大鼠脂肪细胞的分离培养,并将其诱导分化为成熟的脂肪细胞,分别在细胞生长至单层汇合后的第0、4、8、12、16天收集细胞样品。对VDR和脂滴进行荧光染色,同时采用Western blot对脂肪细胞分化过程中的VDR蛋白表达量进行分析,采用real-time PCR定量分析脂肪细胞分化过程中的VDR表达量。结果显示,随SD大鼠脂肪细胞的分化,细胞中脂滴逐渐增加,VDR mRNA和蛋白的表达量与脂质积累过程呈负相关性,表明VDR的表达在脂肪细胞分化过程中有一定的变化规律,其可能以负反馈的调节机制参与了脂肪细胞的分化过程。

关键词：维生素D受体脂肪细胞脂滴 SD大鼠

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鸡蛋清溶菌酶的提取纯化及抗菌活性的检测

黑龙江畜牧兽医 2017年第3期 135-137,294页

作者：雒志恒杨祎琦王永吉陕西理工大学维生素D生理与应用研究所

为了探索鸡蛋清中溶菌酶的提取、纯化方法及抗菌活性检测方法,试验首先采用724型弱酸性阳离子交换树脂对鸡蛋清溶菌酶进行提取,再通过（NH4）2SO4盐析、透析、调整透析液pH值等步骤对溶菌酶进行纯化,最后经真空冷冻干燥,得到白色溶菌酶... 详细信息

为了探索鸡蛋清中溶菌酶的提取、纯化方法及抗菌活性检测方法,试验首先采用724型弱酸性阳离子交换树脂对鸡蛋清溶菌酶进行提取,再通过（NH4）2SO4盐析、透析、调整透析液pH值等步骤对溶菌酶进行纯化,最后经真空冷冻干燥,得到白色溶菌酶成品;进一步将提纯后的样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行纯度鉴定,并进行了抗菌活性检测。结果表明：经离子交换层析和盐析纯化后,样品电泳条带清晰,抑菌圈清晰可见,通过该提取方法提纯的溶菌酶纯度达到电泳纯,且抑菌作用较好,特别是针对枯草芽孢杆菌具有显著的抑菌作用。

关键词：蛋清溶菌酶盐析 (NH4)2SO4 阳离子交换层析抗菌活性检测

去卵巢大鼠骨、生殖系统组织病理学与形态计量学观察

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中国骨质疏松杂志 2015年第7期21卷 774-779页

作者：祁珊珊王永吉庞田田杨祎琦吴婕辛薇陕西理工学院维生素D生理与应用研究所陕西汉中723000

目的观察去卵巢大鼠骨、生殖系统的组织病理学和形态计量学变化。方法将40只3月龄健康雌性SD大鼠随机分为两组,20只实施卵巢去除手术,20只实施假手术。术后3个月分别从两组大鼠中随机抽取7只,解剖后进行胫骨、股骨、子宫和阴道组织样品... 详细信息

目的观察去卵巢大鼠骨、生殖系统的组织病理学和形态计量学变化。方法将40只3月龄健康雌性SD大鼠随机分为两组,20只实施卵巢去除手术,20只实施假手术。术后3个月分别从两组大鼠中随机抽取7只,解剖后进行胫骨、股骨、子宫和阴道组织样品的取材,常规石蜡包埋、切片、H&E染色并观察。应用病理图像分析系统对胫骨、股骨、子宫和阴道进行形态计量学分析。结果去势组大鼠胫骨、股骨干骺端骨小梁面积百分率、骨小梁平均厚度均较假手术组减少(P<0.05),去势组骨小梁间距较假手术组增大(P<0.05);去势组大鼠子宫萎缩,子宫管径、子宫黏膜上皮厚度、子宫肌层厚度、以及子宫腺数量均较假手术组显著降低(P<0.05);阴道黏膜上皮的厚度较假手术组显著降低(P<0.05)。组织学观察显示去除卵巢后3个月大鼠呈现明显的骨质疏松症状以及生殖系统萎缩等。结论去卵巢大鼠除骨组织结构改变外,子宫和阴道组织学形态变化证实雌性动物子宫、阴道黏膜的形态受雌激素的直接调节。

关键词：去卵巢大鼠骨生殖系统组织病理学形态计量学

去卵巢法建立SD大鼠绝经后骨质疏松模型手术探讨

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中国兽医杂志 2014年第2期50卷 27-29页

作者：祁珊珊杨祎琦庞田田王永吉陕西理工学院维生素D生理与应用研究所陕西汉中723000

以维生素D类药物防治SD大鼠绝经后骨质疏松症的研究是近年来医学领域的一个热点。本研究探讨了建立绝经后骨质疏松模型的一种手术方法。试验对21只3月龄雌性SD大鼠进行了去除卵巢的手术,手术均采用腹正中切口,以利于卵巢的摘除。试验结... 详细信息

以维生素D类药物防治SD大鼠绝经后骨质疏松症的研究是近年来医学领域的一个热点。本研究探讨了建立绝经后骨质疏松模型的一种手术方法。试验对21只3月龄雌性SD大鼠进行了去除卵巢的手术,手术均采用腹正中切口,以利于卵巢的摘除。试验结果表明,该卵巢去除方法具有切口小,操作简便,成功率高的特点。文中归纳了卵巢去除手术的操作程序、术后护理,以及注意事项等,讨论了利用大鼠卵巢切除术建立绝经后骨质疏松模型的关键技术环节,为建立绝经后骨质疏松症动物模型的工作提供技术资料。

关键词：绝经后骨质疏松症动物模型大鼠卵巢去除术

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维生素D受体在大鼠脂肪组织中的表达定位

生物技术 2014年第6期24卷 31-34页

作者：程佳杨祎琦祁珊珊魏夏媛王永吉陕西理工学院维生素D生理与应用研究所陕西汉中723000

[目的]研究维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)在大鼠不同部位脂肪组织中的定位及基因表达量的差异。[方法]利用苏木精伊红染色(Haematoxylin and Eosin stain,H&E)和免疫荧光染色技术,分别对正常SD雌鼠和SD雄鼠的内脏、皮下和肾周的... 详细信息

[目的]研究维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)在大鼠不同部位脂肪组织中的定位及基因表达量的差异。[方法]利用苏木精伊红染色(Haematoxylin and Eosin stain,H&E)和免疫荧光染色技术,分别对正常SD雌鼠和SD雄鼠的内脏、皮下和肾周的脂肪组织,进行形态学分析和VDR定位研究;同时提取各脂肪组织的RNA,利用RT-PCR技术定量分析大鼠各脂肪组织间VDR的表达差异。[结果]大鼠不同部位的脂肪组织在形态学上具有一定的差异;VDR主要集中分布在大鼠脂肪细胞的细胞核中;VDR基因在雌雄SD大鼠各个脂肪组织中的表达量不同,但差异不显著(P>0.05)。[结论]为脂肪细胞的分化以及VDR的功能研究奠定基础,为今后肥胖的发病与治疗提供理论依据。

关键词：维生素D受体脂肪组织大鼠

维生素D受体在C57BL/6小鼠十二指肠中的定位表达分析

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中国实验动物学报 2017年第3期25卷 320-324页

作者：程佳刘少伟曹婉莹杨祎琦姚望陕西理工大学维生素D生理与应用研究所陕西汉中723000

目的为探讨维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在C57BL/6小鼠十二指肠中的定位与表达,研究维生素D系统与肠道发育过程的相关性。方法利用实时定量PCR(quantitative PCR,q PCR)、苏木精伊红染色、免疫荧光染色、免疫印迹(Western blott... 详细信息

目的为探讨维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在C57BL/6小鼠十二指肠中的定位与表达,研究维生素D系统与肠道发育过程的相关性。方法利用实时定量PCR(quantitative PCR,q PCR)、苏木精伊红染色、免疫荧光染色、免疫印迹(Western blotting,WB)的检测技术,对C57BL/6小鼠十二指肠中VDR定位表达做定性与定量的分析。结果 VDR的mRNA在C57BL/6小鼠十二指肠组织中的表达在其出生的第21天达到峰值。此外,VDR主要分布在C57BL/6小鼠十二指肠上皮细胞和平滑肌细胞的胞质中。对组织样品的WB检测显示,C57BL/6小鼠十二指肠发育过程中,VDR没有发生明显的核转位。结论从分子生物学角度分析了VDR在C57BL/6小鼠十二指肠不同生长发育阶段的表达规律,为了解和完善VDR在肠道中的作用奠定理论基础。

关键词：维生素D受体十二指肠表达小鼠