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人脐带血与周围血中NKT细胞频率、亚群、表型及功能的比较

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免疫学杂志 2011年第4期27卷 277-282页

作者：李子涛杨滨燕刘昀王慧张建平陈慧吴长有中山大学中山医学院免疫学研究所热带传染病教育部重点实验室广州510080

目的比较足月产新生儿脐带血和正常人周围血NKT细胞的频率、亚群、表型特征及功能。方法分离足月产新生儿脐带血CBMCs和正常成年人周围血PBMCs,流式细胞术检测TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L、CCR7等表面分子的表达及细胞因子IL-4和... 详细信息

目的比较足月产新生儿脐带血和正常人周围血NKT细胞的频率、亚群、表型特征及功能。方法分离足月产新生儿脐带血CBMCs和正常成年人周围血PBMCs,流式细胞术检测TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L、CCR7等表面分子的表达及细胞因子IL-4和IFN-γ的产生。结果 CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的平均频率分别为0.35%和0.33%,二者无显著差别。CBMCs中CD4+NKT细胞频率(67.39%)高于PBMCs中CD4+NKT细胞频率(54.08%),但CD8+NKT细胞,PBMCs明显高于CBMCs(22.35%对5.86%),CD4-CD8-NKT二者相差无统计学意义。CBMCs中CD3+TCRvβ11+CD45RA+NKT细胞的频率(88.37%)高于PBMCs(61.32%)。CBMCs中CD62L(56.66%对49.60%)和CCR7(22.64%对20.03%)的比例稍高于PBMCs,但其差别无显著性。未刺激CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞均不产生IL-4和IFN-γ,PMA+Ionomycin刺激后,CBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞仍不能产生IL-4和IFN-γ,但PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞却有6.74%产生IL-4、26.96%产生IFN-γ、1.26%同时分泌IL-4和IFN-γ,产生细胞因子的CD3+TCRvβ11+NKT细胞主要为记忆性NKT细胞。结论 CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的亚群、表型和功能均存在一定差别,记忆性NKT细胞可能与其再次免疫应答相关。

关键词： NKT细胞频率亚群表型细胞因子

人外周血中γδT细胞亚群、表型和细胞因子产生的研究

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免疫学杂志 2018年第1期34卷 1-9页

作者：赵珺吴琼丽沈娟杨滨燕吴长有中山大学中山医学院免疫研究所热带传染病教育部重点实验室广州510080

目的进一步比较人外周血中γδT细胞及Vδ1^+、Vδ2^+、Vδ1^-Vδ2^-细胞频率、表型及功能方面异同,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离人外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞术检测TCRγδ、Vδ1、Vδ2、CD4、CD8、CD45RO... 详细信息

目的进一步比较人外周血中γδT细胞及Vδ1^+、Vδ2^+、Vδ1^-Vδ2^-细胞频率、表型及功能方面异同,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离人外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞术检测TCRγδ、Vδ1、Vδ2、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、Granzyme A。PMA+Ionomycin刺激前后检测细胞因子IFN-γ、IL-17A及转录因子T-bet、Ro Rγt水平。磁珠富集、流式分选和ELISA检测纯化细胞IFN-γ产生。结果根据γδT细胞受体(TCRγδ)δ链,将γδT细胞分为Vδ1^+,Vδ2^+,Vδ1^-Vδ2^-3群,TCRγδ高低表达与Vδ1、Vδ2表达相关。Vδ1^+、Vδ2^+细胞约有20%~40%细胞表达CD8,低表达CD4,而Vδ1^-Vδ2^-细胞约有60%表达CD8和20%表达CD4。约6%的Vδ1^+和30%的Vδ1^-Vδ2^-细胞表达CD45RO,而约有80%的Vδ2^+细胞表达CD45RO。刺激后,γδT细胞3个亚群均表达IFN-γ和IL-17,Vδ2^+细胞表达最高,3个亚群差异有显著性,与纯化细胞结果相符。3个亚群细胞均高表达转录因子T-bet和Ro Rγt,高表达颗粒酶A。结论人外周血中Vδ1^+、Vδ2^+及Vδ1^-Vδ2^-细胞在频率、表型及功能方面均有显著差异,均可产生高水平细胞因子IFN-γ,该结果将为γδT细胞进一步研究打下良好基础。

关键词： γδT细胞频率亚群表型细胞因子

洋地黄毒苷通过调控转录因子RORγt的表达抑制Th17细胞产生IL-17A

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 519-524页

作者：余思菲杨滨燕张燕楠吴长有中山大学医学院免疫研究所热带传染病教育部重点实验室广州510080

目的研究洋地黄毒苷(Digitoxin)在体外对人CD4+T细胞产生IL-17A和IFN-γ的影响及其机制。方法人PBMC用抗CD3和抗CD28抗体共刺激或在诱导Th17分化的条件下,同时加或不加Digitoxin,用酶联免疫吸附法检测培养上清中IL-17A和IFN-γ的产生。... 详细信息

目的研究洋地黄毒苷(Digitoxin)在体外对人CD4+T细胞产生IL-17A和IFN-γ的影响及其机制。方法人PBMC用抗CD3和抗CD28抗体共刺激或在诱导Th17分化的条件下,同时加或不加Digitoxin,用酶联免疫吸附法检测培养上清中IL-17A和IFN-γ的产生。利用流式细胞术检测细胞因子IL-17A、IFN-γ以及转录因子RORγt的表达。利用Western blotting检测Digitoxin对RORγt表达的影响。结果 Digitoxin对人IL-17A有显著的剂量依赖性抑制作用,并且在刺激的早期(第0小时和第6小时)加入Digitoxin能显著地抑制IL-17A的产生,但不影响IFN-γ的产生,而晚期(第12小时和第24小时)加入Digitoxin对IL-17A的产生没有明显地抑制作用。进一步研究发现,Digitoxin抑制Th17细胞的分化,调控IL-17A的转录因子RORγt的表达。结论本实验表明,Digitoxin通过早期调控RORγt的表达来抑制IL-17A的产生,但不抑制IFN-γ的产生,提示Digitoxin除了对心血管作用外,也可以抑制炎症性疾病和自身免疫性疾病的发生发展。

关键词：洋地黄毒苷 Th17细胞 Th1细胞细胞因子 RORγt

人外周血CD3^+CD56^+NKT与Vα24^+iNKT、Vβ11^+iNKT细胞的关系及NKT亚群和细胞因子分泌的研究

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免疫学杂志 2013年第2期29卷 137-141页

作者：龚英李子涛付笑迎张燕楠王慧杨滨燕吴长有中山大学中山医学院免疫研究所热带传染病教育部重点实验室广州510080

目的探讨正常人外周血中CD3+CD56+NKT细胞的频率与CD3+Vα24+iNKT、CD3+Vβ11+iNKT细胞之间的关系、表型特征及细胞因子的表达。方法应用流式细胞术,检测CD3+CD56+NKT细胞频率与CD3+Vα24+iNKT和CD3+Vβ11+iNKT细胞之间的关系、CD4及CD... 详细信息

目的探讨正常人外周血中CD3+CD56+NKT细胞的频率与CD3+Vα24+iNKT、CD3+Vβ11+iNKT细胞之间的关系、表型特征及细胞因子的表达。方法应用流式细胞术,检测CD3+CD56+NKT细胞频率与CD3+Vα24+iNKT和CD3+Vβ11+iNKT细胞之间的关系、CD4及CD8表面分子及细胞因子的表达。结果正常人外周血CD3+CD56+NKT细胞的频率为6.39%±2.34%;只有1.5%CD3+CD56+NKT细胞表达TCRVα24和1.2%CD3+CD56+NKT细胞表达TCRVβ11,0.7%CD3+CD56+NKT细胞同时表达TCRVα24和TCRVβ11;根据CD4和CD8表面分子的表达,可将CD3+CD56+NKT细胞分为66.9%CD4+、20.4%CD8+和11.6%CD4-CD8-3个亚群;当细胞刺激后,50.2%CD3+CD56+NKT细胞分泌IFN-γ,3.3%分泌IL-4,1.5%同时分泌IFN-γ和IL-4。此外,CD4+NKT、CD8+NKT和CD4-CD8-NKT 3群细胞分泌IFN-γ的频率分别为45.1%、70.3%和55.4%,分泌IL-4的频率为6.5%、7.0%和6.9%,同时分泌IFN-γ和IL-4的频率为2.4%、4.7%和3.1%。结论大多数CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT和CD3+TCRVβ11+iNKT细胞是不同的NKT细胞亚群,CD3+CD56+NKT细胞频率小,能分泌大量的细胞因子,参与机体的免疫反应。

关键词： NKT细胞频率亚群细胞表型细胞因子

IL-12有助于化疗药物处理后肿瘤患者及小鼠的细胞免疫功能重建

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细胞与分子免疫学杂志 2018年第4期34卷 289-295页

作者：沈娟池沛东张飞谢淑华杨滨燕吴长有中山大学医学院免疫学研究所广东省器官移植重点实验室广东广州510080 中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室广东广州510060

目的探讨白细胞介素12(IL-12)是否能够恢复化疗药物对肿瘤患者和小鼠细胞的免疫抑制作用。方法分离顺铂化疗前后肿瘤患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC),在抗CD3抗体和抗CD28抗体共刺激条件下,加或不加IL-12。培养后,ELISA检测上清中... 详细信息

目的探讨白细胞介素12(IL-12)是否能够恢复化疗药物对肿瘤患者和小鼠细胞的免疫抑制作用。方法分离顺铂化疗前后肿瘤患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC),在抗CD3抗体和抗CD28抗体共刺激条件下,加或不加IL-12。培养后,ELISA检测上清中γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,流式细胞术检测不同亚群T细胞IFN-γ的水平。建立顺铂毒性小鼠模型,采用以上方法检测IFN-γ、TNF-α水平。结果肿瘤患者产生的IFN-γ和TNF-α显著低于正常人;与化疗前患者相比,化疗后患者IFN-γ和TNF-α的产生明显减少,IL-12可以显著增强IFN-γ和TNF-α的产生;T细胞亚群分析的结果表明,IL-12可以恢复化疗后CD4^+T细胞和CD8^+T细胞中IFN-γ的水平。小鼠体内实验证明,化疗药物抑制小鼠T细胞的免疫功能,IL-12能完全恢复T细胞免疫功能。结论化疗药物抑制肿瘤患者和小鼠细胞的免疫应答,而IL-12能够恢复化疗药物对细胞因子的抑制作用,从而对肿瘤化疗患者重建免疫功能起到非常重要的作用。

关键词：白细胞介素12(IL-12) 顺铂免疫恢复小鼠

IL-12依赖于TRAIL途径增强NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第9期28卷 926-929页

作者：付笑迎杨滨燕黄俊琪龙喜贵吴长有中山大学医学院免疫学研究所热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080

目的:探讨IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的相关机制。方法:纯化正常人NK细胞,分为加或不加IL-12两个刺激组,通过基因芯片筛选差异基因,并通过流式细胞术在单个细胞水平检测相关杀伤分子的表达。结果:基因芯片系统结果显示I... 详细信息

目的:探讨IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的相关机制。方法:纯化正常人NK细胞,分为加或不加IL-12两个刺激组,通过基因芯片筛选差异基因,并通过流式细胞术在单个细胞水平检测相关杀伤分子的表达。结果:基因芯片系统结果显示IL-12刺激组和未刺激组相比,17种基因具有显著性差异(fold change≥10),其中5种基因上调,12种基因下调。在IL-12的刺激作用下,TRAIL的表达在CD56+CD16+和CD56-CD16+NK细胞上显著增加。同时,Jurkat细胞亦高表达TRAIL受体TRAIL-R2(DR5)。TRAIL中和抗体RIK-2可以阻断IL-12诱导的NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能。结论:TRAIL是IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的主要途径之一。

关键词： NK细胞 IL-12 TRAIL Jurkat细胞杀伤功能

小鼠脾细胞CD4^+ CD25^+调节性T细胞的表型特征

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现代免疫学 2006年第3期26卷 208-212页

作者：杨滨燕沈二霞吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

观察CD4+CD25+T和CD4+CD25-T细胞的表型和细胞因子的表达。自小鼠脾脏制备单个细胞悬液,分离CD4+T细胞、CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,进行细胞表面标记,激活后进行细胞内细胞因子染色,利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析细胞表面分子、... 详细信息

观察CD4+CD25+T和CD4+CD25-T细胞的表型和细胞因子的表达。自小鼠脾脏制备单个细胞悬液,分离CD4+T细胞、CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,进行细胞表面标记,激活后进行细胞内细胞因子染色,利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析细胞表面分子、转录因子和细胞因子表达之间的关系。结果:在CD4+T细胞中,约有7.8%的细胞同时表达CD25分子。与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞CD44的表达略有增加,CD45RB的表达明显下降,CTLA-4和Foxp3明显增加。以同时表达CTLA-4和Foxp3的细胞为主,其次为单独表达Foxp3的细胞。细胞因子的研究结果表明,与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞IL-2、IFN-γ明显减少,而只产生IL-10的细胞略有增加。CD4+CD25+调节性T细胞无论在表型、转录因子的表达以及细胞因子表达方面均于非调节性T细胞不同。

关键词： CD4^+CD25^+T细胞调节性T细胞细胞表型 Foxp3 细胞因子

索曲妥林对人T细胞产生细胞因子抑制作用的机制研究

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免疫学杂志 2019年第6期35卷 461-470,477页

作者：金水平吴琼丽康双朋杨滨燕吴长有中山大学中山医学院免疫学研究所

目的观察索曲妥林(sotrastaurin或AEB071)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)、纯化CD4^+T细胞和CD8^+T细胞分泌细胞因子的抑制作用及其机制。方法采集健康志愿者的静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离PBMCs后纯化CD4^+T和CD8^+T细胞,应用抗... 详细信息

目的观察索曲妥林(sotrastaurin或AEB071)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)、纯化CD4^+T细胞和CD8^+T细胞分泌细胞因子的抑制作用及其机制。方法采集健康志愿者的静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离PBMCs后纯化CD4^+T和CD8^+T细胞,应用抗CD3抗体联合CD28抗体进行刺激,加或不加入AEB071培养后,检测细胞因子的产生、转录因子的表达和细胞的活化与增殖。结果索曲妥林处理不促进外周血T细胞的凋亡,而能抑制T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2,且呈时间和剂量依赖性;进一步研究发现,索曲妥林通过下调STAT-1和STAT-4的磷酸化以及T-bet的表达抑制细胞因子的产生。同时经研究发现,索曲妥林处理后抑制T细胞的活化和增殖。结论索曲妥林抑制T细胞转录因子的表达与磷酸化而抑制细胞因子的产生,从而抑制人体免疫功能。为此,进一步研究索曲妥林免疫抑制的机制,对索曲妥林在器官移植、银屑病和溃疡性结肠炎的治疗方面的应用,具有参考价值。

关键词：免疫抑制剂索曲妥林 IFN-γ TNF-α IL-2

一氧化氮抑制T细胞产生细胞因子但促进单核细胞细胞因子的分泌

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免疫学杂志 2019年第12期35卷 1013-1021页

作者：谌亚星余思菲吴琼丽沈娟杨滨燕吴长有中山大学中山医学院免疫学研究所

目的研究一氧化氮(nitric oxide,NO)对T细胞和单核细胞分泌细胞因子的作用及机制。方法用抗人CD3抗体或抗人CD3抗体联合抗人CD28抗体或LPS刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)、纯化T细胞或纯化单核细胞,加或不加一氧化氮培养,ELISA检测培... 详细信息

目的研究一氧化氮(nitric oxide,NO)对T细胞和单核细胞分泌细胞因子的作用及机制。方法用抗人CD3抗体或抗人CD3抗体联合抗人CD28抗体或LPS刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)、纯化T细胞或纯化单核细胞,加或不加一氧化氮培养,ELISA检测培养细胞上清液中细胞因子的含量;流式细胞术检测T细胞表面活化分子CD69和CD25的表达、T-box转录因子(T-bet)的表达,STAT1和STAT4的磷酸化程度以及T细胞的分裂情况。结果一氧化氮呈时间和剂量依赖方式抑制T细胞产生IFN-γ、TNF-α和IL-2,但促进单核细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,且不诱导细胞的凋亡。进一步研究发现其抑制细胞晚期活化分子的表达和细胞的分裂,以及抑制T细胞相关转录因子T-bet的表达,但不抑制STAT1和STAT4的磷酸化程度。结论一氧化氮通过非细胞毒性作用抑制活化的T细胞产生细胞因子,但促进活化的单核细胞的细胞因子的分泌,其机制是通过抑制转录因子T-bet信号通路而抑制T细胞细胞因子的分泌,该研究将为临床应用提供理论依据。

关键词：一氧化氮 T淋巴细胞单核细胞细胞因子免疫抑制